檢驗(yàn)科血清游離脂肪酸測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

PAGEPAGE5玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號(hào)：JYK-3-SH-039版本/修訂號(hào)：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第1頁(yè)共5頁(yè)編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01血清游離脂肪酸測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請(qǐng) 單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：血清游離脂肪酸測(cè)定(縮寫NEFA)；組合項(xiàng)目申請(qǐng)：血生化項(xiàng)目組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1.3標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對(duì)反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血的標(biāo)本。2.1.5.3無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。2.2.2標(biāo)本保存時(shí)間：室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),由于酶的代謝作用,NEFA的水平會(huì)升高。不能及時(shí)分析的標(biāo)本在-20度下最多放置24小時(shí)。2.2.3已完成測(cè)試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹?fàn)顟B(tài)。2.3.2不建議采集抗凝血標(biāo)本.如使用抗凝劑，請(qǐng)用EDTA、檸檬酸鈉、草酸銨，不能使用肝素抗凝。3方法原理在輔酶A（COA）與腺苷三磷酸（ATP）的作用下，標(biāo)本中的游離脂肪酸經(jīng)?；o酶A合成酶（ACS）的作用生成?；o酶A。酰基輔酶A被?；o酶A氧化酶（ACD）氧化后，生成過(guò)氧化氫。在過(guò)氧化氫酶（POD）作用下，過(guò)氧化氫使4-氨基安替比林與N，N-雙（4-磺基丁酸）-間甲苯胺二鈉（DSBmT）氧化縮合，產(chǎn)生紫紅色色素。通過(guò)測(cè)定紫紅色色素的吸光度求出游離脂肪酸的含量。4試劑及其他用品4.1試劑：由日本積水化學(xué)醫(yī)療株式會(huì)社出品。4.2試劑盒保存：保存于2～10℃，不開蓋情況下至標(biāo)簽的失效期。開蓋后放于儀器的冰箱中至少穩(wěn)定30天。開蓋后避免污染。變質(zhì)指示：當(dāng)試劑變紅色時(shí)，不能繼續(xù)使用。避免冷凍保存。4.3試劑盒準(zhǔn)備：試劑1：用NEFA溶解液①溶解NEFA酶品①后待用；試劑2：用NEFA溶解液②溶解NEFA酶品②后待用。4.4試劑盒主要成分：NEFA酶品①：?；o酶A合成酶42.5U/50ml4-氨基安替比林10.9mg/50ml抗壞血酸氧化酶輔酶A腺苷三磷酸鈉氯化鎂NEFA溶解液①：2-氨基-2-羥甲基-1，3-丙二醇緩沖液（pH7.4）100mmol/lNEFA酶品②:?；o酶A氧化酶532.8U/100ml過(guò)氧化物酶NEFA溶解液②：DSBmT1mmol/lN-乙基順丁烯二酰亞胺5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品:試劑盒配套的該公司的NEFA校準(zhǔn)品。5.2校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：非線性模式，5個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。5.3校準(zhǔn)周期：校準(zhǔn)間隔時(shí)間14天。但在：①更換試劑批號(hào)或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；②儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后；均須進(jìn)行一次校準(zhǔn)。5.4校準(zhǔn)液重建方法：校準(zhǔn)液即開即用，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個(gè)不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開即用，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測(cè)定：在每一天中測(cè)定兩個(gè)水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動(dòng)生化分析儀器全自動(dòng)生化分析儀器。8標(biāo)本檢測(cè)步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測(cè)定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。主要分析參數(shù)參見(jiàn)儀器10結(jié)果計(jì)算計(jì)算公式：血清游離脂肪酸濃度（g/L）＝儀器根據(jù)此公式自動(dòng)給出每個(gè)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核確認(rèn)準(zhǔn)確無(wú)誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：10-1000μEq/l，超過(guò)此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說(shuō)明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測(cè)定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV為<3.0%，總CV<10.0%。12.2線性范圍10-1000μEq/l12.3方法的有限性及干擾因素：膽紅素達(dá)5mg/dl,抗壞血酸50mg/dl時(shí)，對(duì)測(cè)定值無(wú)影響。由于溶血標(biāo)本會(huì)對(duì)測(cè)定值產(chǎn)生正的誤差，與其他項(xiàng)目相關(guān)的測(cè)定值比較，出現(xiàn)極端高值的情況下，請(qǐng)使用其他的檢查方法再測(cè)定。12.4靈敏度:油酸1000μEq/l時(shí),吸光度在0.24-0.30范圍內(nèi).13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：129-769μEq/l14臨床意義14.1血清游離脂肪酸是由油酸、軟脂酸、亞油酸等組成，大部分的游離脂肪酸與白蛋白結(jié)合，存在于血液中。14.2測(cè)定血清游離脂肪酸可以了解脂肪代謝的情況，升高代表脂肪分解增加。它的濃度受脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能的影響。14.3生理性升高：饑餓、運(yùn)動(dòng)、情緒激動(dòng)時(shí)可升高。病理性升高：甲亢、未經(jīng)治療的糖尿病人、注射腎上腺素或去甲腎上腺素及生長(zhǎng)激素后、任何能使體內(nèi)激素（甲狀腺素、腎上腺素、去甲腎上腺素、生長(zhǎng)激素）水平升高的疾病、藥物如咖啡因、磺胺丁脲、乙醇、肝素、煙酸、避孕藥等。病理性降低：用胰島素或葡萄糖后的短時(shí)間內(nèi)；某此藥物，如阿司匹林、安妥明、尼克酸和心得安等。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)定結(jié)果，審核者對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。無(wú)威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott自動(dòng)生化分析儀儀