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DB22DB22/T2909—2018H5N8亞型禽流感病毒HA和NA基因熒光RT-PCR檢測方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofHAandNAgenesofAvianinfluenzasubtypeH5N8吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布I1GB/T19438.1禽流感病毒通用熒光RTRT-PCR：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ReverseTranscription-PCt值：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到的設(shè)定的閾值時所Taq酶：Taq脫氧核糖核酸聚合酶（Thermusaquatic基因和NA基因探針分別在5’端標(biāo)記VIC和FAM熒光素作為報告熒光基團，3’端分別標(biāo)記MGB和BHQ1作為淬熒光信號被淬滅基團所吸收，儀器檢測不到熒光信號；而反應(yīng)進行到延伸階段時，Taq酶發(fā)揮5’→3’的2引物F1：5’–CTTGCGACTGGGCTCAGAAA引物R2：5’-CTGACCTGGAGGTTCG8.1.1.2每管加入600μL裂解液，分別加入被檢），3），溫冰箱（-80℃)（6.4）。在PCR溶液配制區(qū)，反應(yīng)體系配制見表1與表2，每份檢測樣品的熒光RT-PCR體系為25μL。用旋渦DEPC水（5.2.7）DEPC水（5.2.7）4

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