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DB22DB22/T2909—2018H5N8亞型禽流感病毒HA和NA基因熒光RT-PCR檢測(cè)方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofHAandNAgenesofAvianinfluenzasubtypeH5N8吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布I1GB/T19438.1禽流感病毒通用熒光RTRT-PCR：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ReverseTranscription-PCt值：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到的設(shè)定的閾值時(shí)所Taq酶：Taq脫氧核糖核酸聚合酶（Thermusaquatic基因和NA基因探針?lè)謩e在5’端標(biāo)記VIC和FAM熒光素作為報(bào)告熒光基團(tuán)，3’端分別標(biāo)記MGB和BHQ1作為淬熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)所吸收，儀器檢測(cè)不到熒光信號(hào)；而反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時(shí)，Taq酶發(fā)揮5’→3’的2引物F1：5’–CTTGCGACTGGGCTCAGAAA引物R2：5’-CTGACCTGGAGGTTCG8.1.1.2每管加入600μL裂解液，分別加入被檢），3），溫冰箱（-80℃)（6.4）。在PCR溶液配制區(qū)，反應(yīng)體系配制見(jiàn)表1與表2，每份檢測(cè)樣品的熒光RT-PCR體系為25μL。用旋渦DEPC水（5.2.7）DEPC水（5.2.7）4

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