DB21T 1861.2-2010 水產(chǎn)生物種質檢驗技術規(guī)程 擴增片段長度多態(tài)性法　_第1頁
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DB21DB21/T1861.2—2010水產(chǎn)生物種質檢驗技術規(guī)程擴增片段長度多態(tài)性法AFLPproceduretodetectgermplasmforaquaculturespecies2010-12-31發(fā)布2011-02-01實施遼寧省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T18654.15-2008養(yǎng)殖魚類種質檢驗第15部分：2DNA酶切后經(jīng)PCR進行選擇性擴增，先將基因組DNA用兩種限制性內切酶酶切成大小不等產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳將特異的限制性片段分離。由于不同來源DNA的酶切片段存在5.20乙二胺四乙酸（EDTA分析純。34空白對照管；在每個離心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。毛囊裂解液用1×PCR緩沖液(50用苯酚和氯仿方法抽提DNA；用50μLTE緩沖液（10mmol/LTris-HClpH8.0，lmmol/LEDT末狀；將研缽放入65℃水浴至樣品粉末剛開始融化，向研缽中加入DNA提取液(10mmol/L5吸取1~3μL提取的DNA，用濃度1~2％g/mL)=[A260／(0.020×L)]×本規(guī)程統(tǒng)一采用EcoRⅠ/MseⅠ雙酶切組合反應體系。按表1配體積(μL） ————體積(μL）627循環(huán)降低退火（1）模具處理與安裝：清洗用作模具的玻璃板并晾干，并分別涂上），（3）預電泳凝膠聚合后，將梳子正向插入膠頂空處，形成加樣孔，連接好電泳設備，添加TBE（9）將上述膠板置于凝膠成像儀中，利用相關圖像采集系8Shannon多樣性指數(shù)(Shannonindex，I)、遺傳距離（GeneticDistance，D）等遺傳參算。并用UPGMA做基于Nei’s遺傳距離的樹形圖，以及用鄰近法（Neighborjoiningmethod，NJ）構建MseⅠ選擇擴增引物：5

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