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課時(shí)作業(yè)(四十)1.(2022·福建)肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱,癌基因RAS表達(dá)增加,會(huì)引發(fā)肺癌。爭辯人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá),發(fā)覺肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。請(qǐng)回答:(1)進(jìn)行過程①時(shí),需用________酶切開載體以插入let-7基因。載體應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,以驅(qū)動(dòng)let-7基因轉(zhuǎn)錄,該部位稱為________。(2)進(jìn)行過程②時(shí),需用________酶處理貼附在培育皿壁上的細(xì)胞,以利于傳代培育。(3)爭辯發(fā)覺,let-7基因能影響癌基因RAS的表達(dá),其影響機(jī)理如圖2。據(jù)圖分析,可從細(xì)胞中提取________進(jìn)行分子雜交,以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制,可能是由于細(xì)胞中________(RASmRNA/RAS蛋白)含量削減引起的。答案(1)限制性核酸內(nèi)切(或限制)啟動(dòng)子(2)胰蛋白(3)RNARAS蛋白2.(2022·新課標(biāo)全國Ⅱ)植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性,其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因,并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中,有可能提高后者的耐旱性。回答下列問題:(1)理論上,基因組文庫含有生物的________基因;而cDNA文庫中含有生物的________基因。(2)若要從植物甲中獲得耐旱基因,可首先建立該植物的基因組文庫,再從中________出所需的耐旱基因。(3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌,并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物________的體細(xì)胞中,經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá),應(yīng)檢測此再生植株中該基因的________,假如檢測結(jié)果呈陽性,再在田間試驗(yàn)中檢測植株的________是否得到提高。(4)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交,子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3∶1時(shí),則可推想該耐旱基因整合到了________(填“同源染色體的一條上”或“同源染色體的兩條上”)。解析(1)基因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫,基因組文庫包含生物基因組的全部基因,cDNA文庫是以mRNA反轉(zhuǎn)錄后構(gòu)建的,只含有已經(jīng)表達(dá)的基因(并不是全部基因都會(huì)表達(dá)),即部分基因。(2)從基因文庫中獵取目的基因需要進(jìn)行篩選。(3)要提高植物乙的耐旱性,需要利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將耐旱基因?qū)胫参镆业捏w細(xì)胞中。要檢測目的基因(耐旱基因)是否表達(dá)應(yīng)當(dāng)用抗原—抗體雜交檢測目的基因(耐旱基因)的表達(dá)產(chǎn)物(即耐旱的相關(guān)蛋白質(zhì));個(gè)體水平檢測可以通過田間試驗(yàn),觀看檢測其耐旱性狀況。(4)假如耐旱基因整合到同源染色體的兩條上,則子代將全部表現(xiàn)耐旱,不會(huì)毀滅性狀分別。[或“假如耐旱基因整合到同源染色體的一條上,則轉(zhuǎn)基因植株的基因型可以用A_表示(A表示耐旱基因,_表示另一條染色體上沒有相應(yīng)的基因),A_自交后代基因型為AA∶A_∶__=1∶2∶1,所以耐旱∶不耐旱=3∶1,與題意相符。答案(1)全部部分(2)篩選(3)乙表達(dá)產(chǎn)物耐旱性(4)同源染色體的一條上3.(2022·海南)下面是將某細(xì)菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi),制備“工程菌”的示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答:(1)獲得A有兩條途徑:一是以A的mRNA為模板,在________酶的催化下,合成互補(bǔ)的單鏈DNA,然后在________作用下合成雙鏈DNA,從而獲得所需基因;二是依據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的________序列,推想出相應(yīng)的mRNA序列,然后依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,推想其DNA的________序列,再通過化學(xué)方法合成所需基因。(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí),需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有________、________、4種脫氧核苷酸、三磷酸腺苷和耐熱性的DNA聚合酶,擴(kuò)增過程可以在PCR擴(kuò)增儀中完成。(3)由A和載體B拼接形成的C通常稱為________。(4)在基因工程中,常用Ca2+處理D,其目的是__________________________________________________________。解析(1)利用逆轉(zhuǎn)錄法合成目的基因的過程是:以mRNA為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化作用下合成單鏈DNA,然后在DNA聚合酶作用下,合成雙鏈DNA分子;蛋白質(zhì)工程合成目的基因的過程是:依據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的氨基酸序列,推想相應(yīng)的mRNA序列,然后依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,推想DNA中脫氧核苷酸的排列挨次,通過化學(xué)方法合成。(2)PCR過程中需要酶、底物、模板、引物和能量等條件。(3)目的基因和運(yùn)載體結(jié)合,形成基因表達(dá)載體。(4)在利用大腸桿菌做受體細(xì)胞時(shí),需要先用Ca2+處理,使之成為感受態(tài)細(xì)胞,有利于吸取重組DNA分子。答案(1)逆轉(zhuǎn)錄DNA聚合酶氨基酸脫氧核苷酸(2)引物(目的基因或A基因)模板(3)基因表達(dá)載體(4)使其成為感受態(tài)細(xì)胞,使大腸桿菌更簡潔吸取重組DNA分子4.(2021·新課標(biāo)全國Ⅰ)閱讀如下材料:材料甲科學(xué)家將牛生長激素基因?qū)胄∈笫芫?,得到了體型巨大的“超級(jí)小鼠”;科學(xué)家接受農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因煙草。材料乙T4溶菌酶在溫度較高時(shí)易失去活性,科學(xué)家對(duì)編碼T4溶菌酶的基因進(jìn)行改造,使其表達(dá)的T4溶菌酶的第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼?,在該半胱氨酸與第97位的半胱氨酸之間形成了一個(gè)二硫鍵,提高了T4溶菌酶的耐熱性。材料丙兔甲和兔乙是同一物種的兩個(gè)雌性個(gè)體,科學(xué)家將兔甲受精卵發(fā)育成的胚胎移植到兔乙的體內(nèi),成功產(chǎn)出兔甲的后代,證明白同一物種的胚胎可在不同個(gè)體的體內(nèi)發(fā)育?;卮鹣铝袉栴}:(1)材料甲屬于基因工程的范疇。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠的受精卵中常用________法。構(gòu)建基因表達(dá)載體常用的工具酶有________和________。在培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí),常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,農(nóng)桿菌的作用是___________________________________________________________________________________。(2)材料乙屬于________工程范疇。該工程是指以分子生物學(xué)相關(guān)理論為基礎(chǔ),通過基因修飾或基因合成,對(duì)________進(jìn)行改造,或制造一種________的技術(shù)。在該實(shí)例中,引起T4溶菌酶空間結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變的緣由是組成該酶肽鏈的________序列發(fā)生了轉(zhuǎn)變。(4)材料丙屬于胚胎工程的范疇。胚胎移植是指將獲得的早期胚胎移植到________種的、生理狀況相同的另一個(gè)雌性動(dòng)物體內(nèi),使之連續(xù)發(fā)育成新個(gè)體的技術(shù)。在資料丙的實(shí)例中,兔甲稱為________體,兔乙稱為________體。解析(1)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠的受精卵中常用顯微注射法,構(gòu)建基因表達(dá)載體常用的工具酶是限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶。農(nóng)桿菌的作用是將目的基因?qū)氲街参?受體)細(xì)胞內(nèi)。(2)資料乙中的技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程的范疇,該工程是指以分子生物學(xué)相關(guān)理論為基礎(chǔ),通過對(duì)基因修飾或基因合成,對(duì)現(xiàn)有的蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì)的技術(shù)。在該實(shí)例中,引起T4溶菌酶空間結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變的緣由是組成該酶肽鏈的氨基酸序列發(fā)生了轉(zhuǎn)變。(3)胚胎移植是指將獲得的早期胚胎移植到同種的、生理狀態(tài)相同的另一個(gè)雌性動(dòng)物體內(nèi),使之連續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。在資料丙實(shí)例中,兔甲稱為供體,兔乙稱為受體。答案(1)顯微注射限制性內(nèi)切酶DNA連接酶農(nóng)桿菌可感染植物,將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中(2)蛋白質(zhì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)新蛋白質(zhì)氨基酸(3)同供受5.我國科學(xué)家張道遠(yuǎn)先生通過從耐旱灌木白花檉柳中克隆得到TSOD基因,利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)化到棉花中,獲得了具備更強(qiáng)抗旱性的T4代轉(zhuǎn)基因棉花株系。下圖為轉(zhuǎn)基因抗旱棉花的培育過程示意圖,請(qǐng)據(jù)圖回答:(1)①過程表示用________擴(kuò)增目的基因的方法。②過程用到的工具酶有_____________________________。步驟③一般用________處理農(nóng)桿菌,使其易吸取四周環(huán)境中的DNA分子。(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞除步驟④所示的方法外,還可接受________。假如受體細(xì)胞是動(dòng)物的受精卵,則一般接受的方法是________。(3)外植體培育成為試管苗的過程接受了________技術(shù),利用了________的原理,步驟⑤⑥表示________。(4)為了確定抗旱轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功,可先用放射性同位素標(biāo)記的________作探針進(jìn)行分子水平鑒定,再________進(jìn)行個(gè)體水平鑒定棉花植株的抗旱性。解析(1)①過程表示用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。②過程用到的工具酶有限制酶(限制性核酸內(nèi)切酶)、DNA連接酶。步驟③一般用Ca2+(或CaCl2)處理農(nóng)桿菌,使其易吸取四周環(huán)境中的DNA分子。(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞除步驟④所示的方法外,還可接受花粉管通道法(基因槍法)。假如受體細(xì)胞是動(dòng)物的受精卵,則一般接受的方法是顯微注射法。(3)外植體培育成為試管苗的過程接受了植物組織培育技術(shù),利用了植物細(xì)胞的全能性的原理,步驟⑤⑥表示脫分化、再分化。(4)為了確定抗旱轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功,可先用放射性同位素標(biāo)記的抗旱基因(TSOD基因、目的基因)作探針進(jìn)行分子水平鑒定,再移栽到干旱土地中進(jìn)行個(gè)體水平鑒定棉花植株的抗旱性。答案(1)PCR技術(shù)限制酶(限制性核酸內(nèi)切酶)、DNA連接酶Ca2+(或CaCl2)(2)花粉管通道法(基因槍法)顯微注射法(3)植物組織培育植物細(xì)胞的全能性脫分化、再分化(4)抗旱基因(TSOD基因、目的基因)移栽到干旱土地中6.請(qǐng)回答有關(guān)下圖的問題:(1)圖甲中①-⑤所示的生物工程為________。(2)圖甲中序號(hào)④所示過程叫做________。(3)如圖乙,一個(gè)基因表達(dá)載體的組成,除了目的基因外,在基因尾端還必需有[2]________;圖中[3]________的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。(4)若預(yù)期蛋白質(zhì)欲通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn),則構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),圖乙中序號(hào)[1]代表的是________;且在圖甲中⑨過程之前,要對(duì)精子進(jìn)行篩選,保留含性染色體________的精子。(5)為獲得較多的受精卵進(jìn)行爭辯,圖甲中⑥過程一般用激素對(duì)供體做________處理;為提高培育成功率,進(jìn)行⑩過程之前,要對(duì)________動(dòng)物做________處理。若圖甲中的卵母細(xì)胞來自從屠宰場收集的卵巢,則其在⑧之前需進(jìn)行體外培育到________期方能受精。(6)用________技術(shù)處理發(fā)育到________期或囊胚期的早期胚胎,可獲得同卵雙胎或多胎。若是對(duì)囊胚進(jìn)行處理,要留意將________均等分割。解析(1)蛋白質(zhì)工程的一般過程為:①依據(jù)中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列:預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推想應(yīng)有氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)。②最終還是回到基因工程上來進(jìn)行蛋白質(zhì)的合成。(2)據(jù)圖分析,圖甲中④表示的是從細(xì)胞質(zhì)中獵取相關(guān)蛋白質(zhì)的核酸片段,即模板信使RNA,反轉(zhuǎn)錄形成目的基因。(3)基因表達(dá)載體的組成:目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因,其中在基因首端是[1]啟動(dòng)子,在基因尾端是[2]終止子;[3]是標(biāo)記基因,作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。(4)通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)預(yù)期蛋白質(zhì),構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),[1]代表的是乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子;將目的基因?qū)胧芫褧r(shí),要篩選出含有X性染色體的精子進(jìn)行體外受精,形成的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在哺乳期才能表達(dá)出預(yù)期蛋白質(zhì)。(5)為獲得較多的受精卵,圖甲中⑥過程用促性腺激素對(duì)供體做超數(shù)排卵處理;⑩胚胎移植之前,要對(duì)供、受體動(dòng)物做同期發(fā)情處理,使得供體與受體具有相同的生理變化,為供體的胚胎植入受體供應(yīng)了相同的生理環(huán)境。從屠宰場收集的卵巢中采集卵母細(xì)胞,要在體外經(jīng)人工培育成熟,即培育到減數(shù)其次次分裂中(或MⅡ中)期,才能與獲能的精子受精。(6)進(jìn)行胚胎分割時(shí),應(yīng)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚;對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)要留意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割,否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。答案(1)蛋白質(zhì)工程(2)反轉(zhuǎn)錄(3)終止子標(biāo)記基因(4)乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子X(5)超數(shù)排卵供、受體同期發(fā)情減數(shù)其次次分裂中(或MⅡ中)(6)胚胎分割桑椹胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)7.毛角蛋白Ⅱ型中間絲(KIFⅡ)基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量親熱相關(guān)。獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡潔流程如圖。(1)過程①所需要的酶是________和________。(2)在過程②中,用________處理將皮膚組織塊分散成單個(gè)成纖維細(xì)胞。在培育過程中,將成纖維細(xì)胞置于95%的空氣和________的混合氣體環(huán)境中培育。(3)在過程③中,可用________(激素)處理以獵取更多的卵(母)細(xì)胞,還可從剛宰殺的山羊________中獵取。(4)從重組細(xì)胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術(shù)是________。在胚胎移植前,通過________技術(shù)可獲得較多胚胎。(5)下列關(guān)于轉(zhuǎn)基因生物平安性的敘述,錯(cuò)誤的是 ()A.種植轉(zhuǎn)基因作物應(yīng)與傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)種植區(qū)隔離B.轉(zhuǎn)基因作物被動(dòng)物食用后,目的基因會(huì)轉(zhuǎn)入動(dòng)物體細(xì)胞中C.種植轉(zhuǎn)基因植物有可能因基因集中而影響野生植物的遺傳多樣性D.轉(zhuǎn)基因植物的抗除草劑基因可能通過花粉傳
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