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ELISA檢測乙肝抗體1ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025肝表面抗體ELISA檢測實驗?zāi)康?.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶標儀的使用方法。2ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025免疫標記技術(shù)免疫標記技術(shù)是用熒光、酶、或者放射性核素等標記抗體或抗原,利用標記技術(shù)的高度敏感性進行的抗原抗體的反應(yīng)。
細胞1細胞2標記物分類熒光素放射免疫技術(shù)放射性核素免疫熒光技術(shù)酶免疫酶技術(shù)3ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025免疫酶技術(shù)
用酶標記的抗原或抗體進行的抗原抗體反應(yīng)??捎妹笜藴y定儀測定光密度(OD)來反應(yīng)抗原或抗體含量,靈敏度可達到ng—pg/ml。細胞1標記物DH2+H2O2D+2H2O
酶具有高效催化性:可加快化學(xué)反應(yīng)的速率;在反應(yīng)前后沒有質(zhì)和量的改變;微量的酶便可發(fā)揮巨大的催化作用4ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025酶免疫技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗酶免疫組化法用于檢測可溶性抗原或抗體用于檢測組織或細胞表面的抗原5ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025酶聯(lián)免疫吸附試驗-ELISAELISA是一種免疫測定(immunoassay,IA)。抗原或者抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記:加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物;產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進行定性或定量分析。6ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025酶聯(lián)免疫吸附實驗—ELISA實驗原理抗原或抗體吸附到固體相載體表面后,以及抗原抗體與酶連接后,仍保持免疫活性和酶活性,當酶遇到相應(yīng)第底物時,在酶的催化下引起底物水解顯色。產(chǎn)物的量與標體中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進行定性或定量分析。
7ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法有三個必要的試劑:(1)免疫吸附劑(2)結(jié)合物(3)酶反應(yīng)的底物8ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025ELISA的類型間接法(測抗體)雙抗體夾心發(fā)(測大分子抗原)競爭發(fā)(測小分子抗原)9ELISA檢測乙肝抗體1/22/202510ELISA檢測乙肝抗體1/22/202511ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025競爭法
用于抗原和半抗原的定量測定,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體表面,經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和待測抗原的混合液,而另一組加酶標記抗原,再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差即為所要測定的未知抗原的量。
這種方法所測定的抗原只有一個結(jié)合部位就可,因此,對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點就是快,因此只有一個保溫洗滌過程,但常需用較多的酶標記抗原。12ELISA檢測乙肝抗體1/22/2025操作步驟1.從冰箱取出試劑盒,室溫平衡30分鐘。2.按如下方式加待測血清,每孔1滴。3.每孔加酶結(jié)合物1滴(孔上方懸空滴加,無氣泡),混勻,空白孔不加,置37度溫箱30分鐘。4.取出反應(yīng)板,棄液,拍干。5.每孔注滿洗條液,(不要溢出)靜置5秒后棄液,拍干,重復(fù)洗條5次,拍干。6.每孔加顯色劑A和B各1滴,置37度溫箱15分鐘。7.每孔加終止液1滴混勻,觀察結(jié)果。待1待2待2陽性陰性空白13ELISA檢測乙肝抗體1/22/202514ELISA檢測乙肝抗體1/22/202515ELISA檢測乙肝抗
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