HBV基因分型的檢測(cè)方法及臨床意義上課講義.ppt

1、HBV基因分型檢測(cè)方法及其意義,杭州博賽基因診斷技術(shù)有限公司,HBV的基因型和分布,根據(jù)全基因核苷酸序列異源性或者基因區(qū)核苷酸序列異源性，將不同病毒株分為不同的基因型，迄今為止，可以分為個(gè)基因型，即、和型。,2. A 型：西歐,北歐、北美洲及非洲地區(qū); B 型和C 型：亞洲,澳大利亞; D 型：中東、北非和南歐; E 型：非洲撒哈拉沙漠地帶; F 型：美國(guó); G 型：法國(guó)和美國(guó); H 型：尼加拉瓜、墨西哥,及美國(guó)加里弗尼亞地區(qū)。,HBV的基因型和分布,17.2,81.4,53,32,12.2,84.7,0%,20%,40%,60%,80%,100%,中國(guó) (上海）,臺(tái)灣,日本,其他基因型,HB

2、V基因型C,HBV基因型B,亞洲部分地區(qū)的基因型分布,國(guó)內(nèi)部分地區(qū)基因型分布,100% 80% 60% 40% 20%,沈陽(yáng) 北京 廣州 上海,HBV基因型的臨床意義,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn), HBV基因型具有如下意義 HBV標(biāo)志物清除 病毒致病性 乙型肝炎的病程及轉(zhuǎn)歸 藥物敏感性 與HBV血清型比較,HBV 基因型具有更加重要的意義。,HBV基因型和的清除的關(guān)系,臨床資料顯示，的清除可能與基因型有關(guān)。 與基因型相比，基因型有更高的陽(yáng)性率，分別為與。 基因型的自發(fā)性清除要比C基因型早年，并且在 清除后，肝臟生物化學(xué)指標(biāo)持續(xù)正常。,HBV標(biāo)志物清除,HBeAg累積清除率,Journal of Medic

3、al Virology 70:350354 (2003),HBV標(biāo)志物清除,HBV基因型與HBsAg轉(zhuǎn)陰 的關(guān)系,Hepatology. 2004 Jun;39(6):1694-701.,HBV標(biāo)志物清除,HBV 基因型與病毒致制病性的關(guān)系,日本學(xué)者Shiina分析了1 744 例HBsAg 陽(yáng)性者的基因型與肝功能異常的關(guān)系后發(fā)現(xiàn),與B 基因型相比,C 基因型的肝功能異常更為常見(jiàn)。,C 基因型引起的臨床表現(xiàn)及組織學(xué)損傷更嚴(yán)重。,HBV基因型與肝硬化的關(guān)系,病毒致病性,KAO等在進(jìn)一步對(duì)67 例無(wú)癥狀HBV攜帶,103 例慢性肝炎,32 例肝硬化,20 例肝細(xì)胞癌患者進(jìn)行基因分型研究中發(fā)現(xiàn),各組

4、均以B/ C 型為主,C基因型所占比例按上述順序逐漸增大,而B(niǎo) 基因型的比例逐漸減小;與B 基因型比較,C 基因型在肝硬化及50 歲以上的肝細(xì)胞癌患者中比例較高,而B(niǎo) 基因型與50 歲以下,特別是35 歲以下的肝細(xì)胞癌患者有關(guān)。,HBV基因型和肝細(xì)胞癌的關(guān)系,病毒致病性,HBV基因型與抗病毒藥物敏感性的關(guān)系,不同基因型HBV 感染對(duì)干擾素治療的反應(yīng)有差別,Kao 對(duì)58 例慢性乙型肝炎患者給予干擾素治療48周,B 基因型和C 基因型的完全應(yīng)答率(血清ALT 恢復(fù)正常,HBeAg 消除,HBV DNA 轉(zhuǎn)陰) 分別為41和15 ,說(shuō)明干擾素對(duì)B基因型治療效果較好。,Kao JH, et al.

5、J Hepatol 2000;33:9981002.,核苷類藥物療效與HBV基因型的關(guān)系。,Intervirology 2003;46:373376,注：最近文獻(xiàn)傾向于沒(méi)有兩者沒(méi)有差異，但是基因型B除外。,檢測(cè)基因分型的常見(jiàn)方法,基因測(cè)序法 PCR-RFLP ELISA 生物芯片 實(shí)時(shí)熒光PCR法,核酸序列測(cè)定法檢測(cè)HBV基因分型方法,首先采用末端終止法，獲得待檢樣本的核酸序列，通常按照國(guó)際慣例選擇HBV S區(qū)基因進(jìn)行擴(kuò)增，獲得HBV S區(qū)的序列，然后將該序列與國(guó)際基因庫(kù)中HBV 各個(gè)基因型的標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)，建立親緣樹(shù)，分析待檢HBV與何種基因型的遺傳距離最近，即判斷為該種基因型。,HBV親緣樹(shù)分析,B基因型,C基因型,B、C混合型,熒光PCR檢測(cè)特點(diǎn)： 1.準(zhǔn)確性好:與核酸序列測(cè)定分型比較，兩者結(jié)果吻合率100%。 2.有效防污染: PCR反應(yīng)和分析在完全閉管條件下進(jìn)行，同時(shí)采用了d-UTP-UNG系統(tǒng)，有效防范PCR產(chǎn)物污染，提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性。 3.操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、結(jié)果判斷直觀明確 :試劑在熒光PCR檢測(cè)儀上進(jìn)行擴(kuò)增和分型分析，不需進(jìn)行電泳、核酸純化、紫外燈觀測(cè)、測(cè)序反應(yīng)等步驟。只需0.51.2小時(shí)即可完成PCR過(guò)程，