生物技術(shù)制藥期末

1、第四章抗體制藥1Ig分子是由 二硫鍵 連接起來的 4條（兩對） 條多肽鏈構(gòu)成的。2單克隆抗體制備時(shí)對動(dòng)物的免疫方法分為 體內(nèi)免疫 和 體外免疫 。3一般來說PEG的 相對分子質(zhì)量 和 濃度 越大，細(xì)胞的融合率越高。1.Ig分子的抗原結(jié)合部位是由（VL和VH的CDR區(qū) ）共同構(gòu)成。2.制備單克隆抗體時(shí)一般采用與（骨髓瘤細(xì)胞 ）供體同一品系的動(dòng)物進(jìn)行免疫。3. 生物藥物檢驗(yàn)要求（理化指標(biāo)和生物活性指標(biāo)缺一不可 ）。4.下列不屬于基因產(chǎn)品液態(tài)保存的方法是（低濃度保存 ）5.前預(yù)防乙型肝炎使用的生物制品屬于（疫苗 ）。單克隆抗體 ： 由單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，這種抗體是針對一種抗原決定簇的抗體，稱

2、為單克隆抗體。雙功能抗體：就是雙特異性單鏈抗體，將抗A抗原抗體的輕鏈可變區(qū)基因與抗B抗原抗體的重鏈可變區(qū)通過短肽鏈接子連接構(gòu)建成雙鏈抗體的表達(dá)質(zhì)粒，表達(dá)后形成雙特異性抗體。多克隆抗體： 病原微生物含有多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)，因此這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體?？贵w ： 是指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白?？寺』褐竼蝹€(gè)細(xì)胞通過無性繁殖而獲得細(xì)胞集團(tuán)的整個(gè)培養(yǎng)過程。免疫球蛋白： 將具有抗體活性及化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白。類型 基本結(jié)構(gòu)人- 鼠嵌和抗體 人IgC-小鼠IgV改型抗體 小鼠CDR替換人CDRFab 完整L鏈和FdFv VH和VL單鏈抗

3、體（scFv） VH-或-VL單域抗體 VH或 VL最小識別單位（MRU） 一個(gè)CDR 人- 鼠嵌和抗體：由于抗體同抗原結(jié)合的功能決定于抗體分子的可變區(qū)（V），同種性免疫原決定于抗體分子的穩(wěn)定區(qū)（C）,如果在基因水平上把鼠源性單克隆抗體的重鏈（H）和輕鏈（L）可變區(qū)分離出來，分別與人Ig的重鏈的穩(wěn)定區(qū)（C）基因連接成人-鼠嵌合體的H和L鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞，就能表達(dá)出完整的人-鼠嵌合抗體。Fab抗體：用胃蛋白可將IgG的重鏈在鉸鏈區(qū)的C端處裂解，獲得兩個(gè)完全相同的抗原結(jié)合片段，在Fab片段之間仍保留有鉸鏈區(qū)與二硫鍵，為Fab雙體，具有完整的雙價(jià)抗體活性，但相對分子質(zhì)量減少了1/3，為10

4、000，在人體內(nèi)產(chǎn)生的抗鼠蛋白的排斥反應(yīng)也相應(yīng)降低30%，由于仍保持抗體分子的立體構(gòu)型，因此在人體任然很穩(wěn)定，成為小分子抗體的錐形。單鏈抗體：是由一段彈性鏈接肽把抗體可變區(qū)重鏈（VH）與輕鏈（vl）相連而成，是具有親代抗體全部抗原結(jié)合特異性的最小功能單位。單域抗體：抗體的VH-或-VL是具有結(jié)合抗原特異性的小抗體片段。改形抗體 ：Ig 分子中參與構(gòu)成抗原結(jié)合部位的區(qū)域是H和L鏈V區(qū)中的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR區(qū)），而不是整個(gè)可變區(qū)。 H和L鏈各有三個(gè)CDR，其它部分稱框架區(qū)。用鼠源單抗的CDR序列替換人Ig 分子中CDR序列，則可使人的Ig 分子具有鼠源單抗的抗原結(jié)合特異性?？上庖咴葱?。又稱CD

5、R移植抗體。 （單克隆抗體）免疫導(dǎo)向療法障礙有：1，單克隆抗體均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體，加速了排斥反應(yīng)，難以維持有效藥物作用靶組織時(shí)間；2，完整的抗體分子，即Ig的相對分子質(zhì)量過大，難以透穿腫瘤組織。 改造：1，降低單克隆抗體的免疫原性；2，降低單克隆抗體的相對分子質(zhì)量。免疫學(xué)的三大類抗體診斷藥物：血清學(xué)鑒定用的抗體制劑、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體制劑和體內(nèi)導(dǎo)向診斷藥物。第五章 植物細(xì)胞工程制藥1與動(dòng)物細(xì)胞和微生物細(xì)胞相比，植物細(xì)胞具有 細(xì)胞壁 、液泡 和 質(zhì)體 。2植物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)分為 靜止 和 振蕩 。3植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)物的生長主要取決于 生長素和 分裂素 的比例。4大多

6、數(shù)植物細(xì)胞的培養(yǎng)基中的氮都是以 NH4+ 和 NO3- 形式提供的。5常用的對植物組織培養(yǎng)的表面滅菌劑是 次氯酸鈣 、 次氯酸鈉 和 氯化汞 。6植物培養(yǎng)細(xì)胞重量的增加主要取決于對數(shù)期 ，而次級代謝產(chǎn)物的累積則主要在 穩(wěn)定期 。次級代謝作用 ： 由特異蛋白質(zhì)調(diào)控產(chǎn)生的內(nèi)源化合物的合成,代謝及分解作用的綜合過程.初級代謝物：核酸、核苷、核苷酸、氨基酸、蛋白質(zhì)及糖類。次級：生物堿、黃酮體、萜類、有機(jī)酸、木質(zhì)素等。 次級代謝產(chǎn)物：除了核酸、核苷、核苷酸、氨基酸、蛋白質(zhì)及糖類以外，具有如下特征的成分成為次級代謝產(chǎn)物：有明顯的分類學(xué)區(qū)域界限；其合成需在一定的條件下才能發(fā)生；缺乏明確的生理功能；是生命的多

7、余成分。植物細(xì)胞工程：以植物細(xì)胞為基本單位，應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等理論和技術(shù)，在立體條件下進(jìn)行培養(yǎng)、繁殖或人為的驚細(xì)操作，使細(xì)胞的某些生物學(xué)特性按人們的意思發(fā)生改變，從而改良品種、制造新品種、加速繁育植物個(gè)體或獲得有用物質(zhì)的一門科學(xué)或技術(shù)。植物細(xì)胞全能性：植物體中任何一個(gè)具有完整細(xì)胞核的細(xì)胞，在一定條件下都可以重新再分化成原來的個(gè)體。分化：可以分為胚胎發(fā)生和器官發(fā)生兩個(gè)階段。前者是從精子與卵細(xì)胞結(jié)合開始，分化為幼胚，進(jìn)而發(fā)育為成熟胚和種子。種子在適宜的條件下分化過程，形成根、莖、葉、花和果實(shí)。脫分化：已經(jīng)分化的細(xì)胞、組織和器官在人工培養(yǎng)的條件下又變成未分化的細(xì)胞和組織的過程。再分化：通

8、過脫分化誘導(dǎo)形成的愈傷組織在適宜的培養(yǎng)條件下可再分化成為胚狀體或直接分化出器官。細(xì)胞培養(yǎng)：指利用單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行液體或固體培養(yǎng)，誘導(dǎo)其增殖及分化的培養(yǎng)試驗(yàn)。目的：得到單細(xì)胞無性繁殖系。外植體：指用于植物組織培養(yǎng)的器官或組織，植物的各部位如根、莖、葉、花、果、穗、胚珠、胚乳、花藥和花粉等均可作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)：由最初的外植體上切下的新增殖的組織，培養(yǎng)一代稱為“第一代培養(yǎng)”，連續(xù)多代的培養(yǎng)就稱為繼代培養(yǎng)。植物激素：是植物代謝過程中形成的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，在極低濃度（小于1微摩時(shí)即能調(diào)節(jié)植物的生育過程，并能從合成部位轉(zhuǎn)運(yùn)到作用部位而發(fā)揮作用。 固體培養(yǎng)：是在培養(yǎng)基中加入一定量的凝固劑，經(jīng)加熱溶

9、解后，分別裝入培養(yǎng)的容器，冷卻后凝結(jié)成固體培養(yǎng)基。生物反應(yīng)器：人們通常將用于細(xì)胞大規(guī)模生產(chǎn)的裝置稱為發(fā)酵罐，而將主要用于生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物的裝置稱為生物反應(yīng)器。1 影響植物次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)生和累積的主要因素有哪些？影響次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)生和累積的因素主要有：（1）、生物條件：外植體、季節(jié)、休眠、分化等；（2）、物理?xiàng)l件：溫度、光（光照時(shí)間、光強(qiáng)、光質(zhì)）、通氣（氧氣）、酸度和滲透壓；（3）、化學(xué)條件：無機(jī)鹽、碳源、物質(zhì)生長調(diào)節(jié)劑、維生素、氨基酸、核酸、抗生素、天然物質(zhì)和前體等；（4）、工業(yè)培養(yǎng)條件：培養(yǎng)罐類型、通氣、攪拌和培養(yǎng)方式。2.各種植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器的特點(diǎn)是什么？（1）機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器

10、；優(yōu)點(diǎn)是：反應(yīng)器內(nèi)的溫度、PH值、溶氧及營養(yǎng)物濃度較其他反應(yīng)器更易控制；缺點(diǎn)是：攪拌產(chǎn)生的剪切力對細(xì)胞造成傷害、抑制植物細(xì)胞生長和次級代謝物產(chǎn)生。（2）鼓泡塔生物反應(yīng)器；優(yōu)點(diǎn)：操作不易染菌，提供了較高的熱量和質(zhì)量傳遞，放大相對容易；缺點(diǎn)是：流體流動(dòng)形式難以確定，混合不均，缺乏有關(guān)反應(yīng)器內(nèi)的非牛頓流體的流動(dòng)與傳遞的數(shù)據(jù)。（3）氣升式生物反應(yīng)器；優(yōu)點(diǎn)：在低剪切力下達(dá)到較好的混合和較高的氧傳遞效果，運(yùn)動(dòng)部件不易染菌，操作費(fèi)用低；缺點(diǎn)：高密度培養(yǎng)時(shí)混合不夠均勻；（4）轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器；優(yōu)點(diǎn)：在高密度培養(yǎng)時(shí)有較高的氧傳遞效率，缺點(diǎn)：難于大規(guī)模操作，放大困難。（5）固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器；優(yōu)點(diǎn)：在一定程度上

11、克服了植物細(xì)胞遺傳和生理特性的不穩(wěn)定，細(xì)胞大小的不一致性、高產(chǎn)細(xì)胞系的低產(chǎn)率等植物細(xì)胞培養(yǎng)中的突出難題，提高產(chǎn)物的產(chǎn)率。缺點(diǎn)：固定化細(xì)胞培養(yǎng)的先決條件是細(xì)胞代謝產(chǎn)物必須分泌到胞外，3.植物組織的固體培養(yǎng)有何缺點(diǎn)？（1）外植體或愈傷組織僅有一部分與培養(yǎng)基接觸，造成培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度差，導(dǎo)致生長的不平衡；（2）外植體的基部插入培養(yǎng)基中，因此該處呈現(xiàn)氣體交換不暢，阻礙了組織呼吸作用的正常進(jìn)行，同時(shí)也堆積生長過程中排出的有害物質(zhì)。（3）容易出現(xiàn)極化現(xiàn)象，導(dǎo)致細(xì)胞群體的不均勻。（4）在培養(yǎng)過程中需要檢測的一些生理特殊化指標(biāo)不方便。4植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的主要方法及其特點(diǎn)是什么？（1）成批培養(yǎng)法： 最適

12、于植物細(xì)胞培養(yǎng)的是氣升式反應(yīng)器。兩步培養(yǎng)法，使用兩個(gè)反應(yīng)器第一個(gè)用于細(xì)胞生物量的累積，第二個(gè)用于次級代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)。（2）半連續(xù)培養(yǎng)法：在反應(yīng)器中投料和接種培養(yǎng)一段時(shí)間后，將部分培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行交換的培養(yǎng)方法。是一種具有定時(shí)進(jìn)出裝置的成批培養(yǎng)系統(tǒng)。（3）連續(xù)培養(yǎng)法 ： 生產(chǎn)能力較高，但技術(shù)條件要求苛刻。（4）固定化培養(yǎng)法 ：固定化的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞位置固定，易于獲得高密度細(xì)胞群體和維持細(xì)胞間的物理化學(xué)梯度，利于細(xì)胞組織化，易于控制培養(yǎng)條件及獲得次級代謝產(chǎn)物。5植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基由哪些主要成分組成？植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)基常含有無機(jī)鹽、碳源、有機(jī)氮源、植物生長激素、維生素等成分。（1）無機(jī)鹽 有大

13、量元素和微量元素，30毫克每升為界限，大量有氮、硫、磷、鉀、鎂、鈣、氯、鈉。微量有鐵、錳、碘、鉬、銅、鋅、碘。（2）碳源 常用碳源為碳水化合物、肌醇、甘油、乳糖和半乳糖。天然提取物如椰子乳、對愈傷組織的誘導(dǎo)和培養(yǎng)也有重要意義。（3）植物生長調(diào)節(jié)劑 常見的植物激素有生長素、分裂素、赤霉素、脫落酸、乙烯。（4）有機(jī)氮源 常用蛋白質(zhì)水解物或各種氨基酸，有機(jī)氮源對細(xì)胞的早期生長有利，氨基酸的加入是為了代替或增加氮源的供應(yīng)。（5）維生素 通常是維生素自養(yǎng)型，但大多數(shù)不能滿足需要。B族維生素還需加入生物素和肌醇。植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)的生長過程主要取決于：生長素和分裂素的比例；植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)：成批培養(yǎng)、半

14、連續(xù)和連續(xù)培養(yǎng)（懸浮培養(yǎng)）及固定化培養(yǎng)。成批培養(yǎng)：將培養(yǎng)基一次性加入反應(yīng)器中，接種、培養(yǎng)一定時(shí)間后收獲細(xì)胞的操作方式。半連續(xù)培養(yǎng)法：在反應(yīng)器中投料和接種培養(yǎng)一段時(shí)間后，將部分培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行交換的培養(yǎng)方法。連續(xù)培養(yǎng)法：利用連續(xù)反應(yīng)培養(yǎng)器，在投料和接種培養(yǎng)一段時(shí)間后，以一定速度連續(xù)采集細(xì)胞和培養(yǎng)液，并以同樣速度供給新鮮培養(yǎng)基以及使細(xì)胞生長環(huán)境長期維持恒定的方法。如上，植物次級代謝產(chǎn)物的積累主要在細(xì)胞生長的穩(wěn)定期，表明細(xì)胞成塊而趨于分化時(shí)，細(xì)胞塊中各個(gè)細(xì)胞處于一定理化梯度之下此現(xiàn)象與完整植株相似，由此提出固定化培養(yǎng)技術(shù)。固定化培養(yǎng)采用的固定化反應(yīng)器有：網(wǎng)狀多孔板、尼龍網(wǎng)套和中孔纖維膜；也可通

15、過凈化空氣代替攪拌。固定化培養(yǎng)法： 將細(xì)胞固定在尼龍網(wǎng)套內(nèi)或固定于中空纖維膜反應(yīng)器的膜表面，或固定于網(wǎng)狀多孔板上，放在培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，或連續(xù)通入新鮮培養(yǎng)基，進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)又連續(xù)收集培養(yǎng)產(chǎn)物，可通入凈化空氣代替攪拌。 常用的滅菌劑有：氯酸鈣、次氯酸鈉和氯化汞。三、培養(yǎng)條件的影響可分為培養(yǎng)環(huán)境的內(nèi)在因素（包括營養(yǎng)成分、生物及非生物元素、pH、通氣及混合程度、與接種有關(guān)的因素）和培養(yǎng)環(huán)境的外部因素（剪切力、攪拌頻率、溫度和光）等的影響。 （1）接種和誘導(dǎo)：（2）培養(yǎng)基的組成：磷、氮、銅、碳源（種類及濃度）、植物生長調(diào)節(jié)劑、O2和pH等。2.兩步培養(yǎng)法 第一步使用適合細(xì)胞生長的培養(yǎng)，營養(yǎng)豐富，稱為生長

16、培養(yǎng)基；第二步使用適于次級代謝產(chǎn)物合成的培養(yǎng)基，較低含量的硝酸鹽和磷酸鹽，并含有較低的糖分或少量的碳源，稱為生產(chǎn)培養(yǎng)基。3、培養(yǎng)環(huán)境的外部因素（1）溫度：（2）攪拌頻率（3）培養(yǎng)容器的影響：（4）光的影響： 第六章 酶工程制藥1酶的固定化方法為 載體結(jié)合法 、 交聯(lián)法 和 包埋法 。2酶的載體結(jié)合法根據(jù)結(jié)合形式的不同分為物理吸附法、離子結(jié)合法和 共價(jià)結(jié)合法 。3目前工業(yè)常的酶一般是以 微生物 為主要來源。4篩選產(chǎn)酶菌的方法主要包括以下菌樣采集 菌種的初篩、純化 復(fù)篩和生產(chǎn)性能鑒定等步驟5酶在醫(yī)藥領(lǐng)域有應(yīng)用主要包括 疾病診斷、疾病治療、藥物生產(chǎn)和 分析檢測 四個(gè)方面的6在固定化細(xì)胞中應(yīng)用最多，最

17、有效的方法是 包埋法 。7酶和細(xì)胞的固定化載體主要有 吸附載體 、 包埋載體和 交聯(lián)載體 三類。8選擇酶和細(xì)胞固定化方法時(shí)應(yīng)考慮 應(yīng)用的安全性 、 操作中的穩(wěn)定性 及 固定化成本 。9根據(jù)固定化酶的反應(yīng)系統(tǒng)，其活力的測定可以分為 分批測定法和 連續(xù)測定法 兩種。10固定化酶的偶聯(lián)率 小于1 ，擴(kuò)散限制對酶活力有影響；偶聯(lián)率 大于1 ，有細(xì)胞分裂或從載體排除抑制劑等原因。11酶化學(xué)修飾的方法有 表面化學(xué)修飾、 酶分子內(nèi)部修飾和 結(jié)合定點(diǎn)突變的化學(xué)修飾 。固定化酶 固定化酶是指限制或固定于特定空間位置的酶，具體來說，是指經(jīng)物理或化學(xué)方法處理，使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動(dòng)受到限制，而又能發(fā)揮催化作用的

18、酶制劑。模擬酶 ：根據(jù)酶的作用原理，用各種方法人為制造的具有酶性質(zhì)的催化劑。酶化學(xué)修飾：通過主鏈有切割、剪切和側(cè)鏈基團(tuán)有化學(xué)修飾對酶蛋白進(jìn)行分子改造，以改變其理化性質(zhì)和生物活性。這種應(yīng)用化學(xué)方法對酶分子施行種種“手術(shù)”的技術(shù)稱為酶分子的化學(xué)修飾。固定化細(xì)胞： 將細(xì)胞限制或定位于特定空間位置的方法稱為細(xì)胞固定化技術(shù)。被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱為固定化細(xì)胞。人工模擬酶：根據(jù)酶的作用原理，用各種方法人為制造的具有酶性質(zhì)的催化劑。酶化學(xué)修飾：通過主鏈的切割、剪接和側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾對酶蛋白進(jìn)行分子改造，以改變其理化性質(zhì)及生物活性。有機(jī)相酶反應(yīng)：指酶在具有有機(jī)溶劑存在的介質(zhì)中所進(jìn)行的催化反應(yīng)。分

19、子印跡：指制備對某一特定化合物具有選擇性的聚合物的過程。生物印跡：是分子印跡的一種形式，它是以天然的生物材料，如蛋白質(zhì)和糖類物質(zhì)為骨架，在其上進(jìn)行分子印跡而產(chǎn)生對印跡分子具有特異性識別空腔的過程。1 作為一個(gè)優(yōu)良的產(chǎn)酶菌種：繁殖快、產(chǎn)酶高，最好是產(chǎn)生胞內(nèi)酶的菌株2 酶經(jīng)固定化后，其最適pH值一般都：升高或下降3 抗體酶是具有催化活性的：免疫球蛋白4 載體結(jié)合法是酶和細(xì)胞固定化的主要方法之一，下列那種方法不屬于載體結(jié)合固定化方法：交聯(lián)法5 模擬酶的分類，按屬性分為：主-客體酶、膠束酶、肽酶、半合成酶、分子印跡酶。6 按Kirby分類：單純酶模型、機(jī)制酶模型、單純合成的酶樣化合物。7 核酶是具有催

20、化活性的：核糖核酸8 分子印跡方法：共價(jià)分子印跡和非共價(jià)分子印跡。9 酶化學(xué)修飾的目的 提高酶的生物活性； 增強(qiáng)在不良環(huán)境中的穩(wěn)定性； 降低或消除其免疫原性10、酶化學(xué)修飾的方法（1） . 酶的表面化學(xué)修飾包括：大分子修飾、小分子修飾、交聯(lián)修飾、固定化修飾。（2） . 酶分子內(nèi)部修飾包括：非催化活性基團(tuán)的修飾、蛋白主鏈的修飾、催化活性基團(tuán)的修飾、與輔因子有關(guān)的修飾、肽鏈伸展后的修飾。3. 結(jié)合定點(diǎn)突變的化學(xué)修飾分子印跡有兩種方法：共價(jià)分子印跡，(如染料、二胺類、維生素、氨基酸衍生物、肽)和非共價(jià)分子印跡(如游離糖及其衍生物、甘油酸及其衍生物、氨基酸及其衍生物、芳香酮、轉(zhuǎn)鐵蛋白、苦杏仁酸、二醛等

21、）。1作為一個(gè)優(yōu)良的產(chǎn)酶菌種，應(yīng)具備條件有那些？(1) 繁殖快、產(chǎn)酶高，酶的性質(zhì)應(yīng)符合使用要求，而且最好是產(chǎn)生胞外酶的菌株。(2) 不是致病菌，在系統(tǒng)發(fā)育上與病原菌無關(guān)，也不產(chǎn)生有毒物質(zhì)。 (3) 產(chǎn)酶性能穩(wěn)定、不易變異退化，不易感染噬菌體。 (4) 所需原料穩(wěn)定，來源廣泛，價(jià)格低廉。 發(fā)酵周期短，易于培養(yǎng)。2試比較物理吸附法和共價(jià)結(jié)合法兩種酶固定方法的優(yōu)缺點(diǎn)。物理吸附法優(yōu)點(diǎn)：制作條件溫和、簡便，成本低，載體再生、可反復(fù)使用。缺點(diǎn)：結(jié)合力弱，對pH、離子強(qiáng)度、溫度等因素敏感，酶易脫落。 共價(jià)結(jié)合法優(yōu)點(diǎn)：酶與載體結(jié)合力強(qiáng)，穩(wěn)定性好。缺點(diǎn)：條件激烈，易引起酶失活；成本高。3固定化酶和固定化細(xì)胞的特

22、點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)各是什么？固定化酶的特點(diǎn)： 具有生物催化劑的功能，又有固相催化劑的功能。主要優(yōu)點(diǎn)如下：可多次使用 反應(yīng)后，酶底物產(chǎn)物易分開，產(chǎn)物中無殘留酶，易純化，產(chǎn)品質(zhì)量高。反應(yīng)條件易控制。酶的利用效率高。比水溶性酶更適合于多酶反應(yīng)。4，為什么要對酶進(jìn)行化學(xué)修飾？（1）提高生物活性；（2）增強(qiáng)在不良環(huán)境中的穩(wěn)定性；（3）針對異體反應(yīng)，降低生物識別能力4、 從現(xiàn)代觀點(diǎn)來看， 酶工程主要有哪些方面的研究內(nèi)容：1、 酶的分離、提純、大批量生產(chǎn)及應(yīng)用開發(fā)。2、酶和細(xì)胞的固定化及酶反應(yīng)器的研究。3、酶生產(chǎn)中基因工程技術(shù)的應(yīng)用及遺傳修飾酶的研究。3、酶的分子改造與化學(xué)修飾以及酶的結(jié)構(gòu)與功能之間關(guān)系的研究。4、有

23、機(jī)相中酶反應(yīng)的研究。5、酶的抑制劑、激活劑的開發(fā)及應(yīng)用研究。6抗體酶、核酸酶的研究。7模擬酶、合成酶及酶分子的人工設(shè)計(jì)、合成的研究。2、 固定化酶的特點(diǎn)：具有生物催化劑的功能，又有固相催化劑的功能。 可多次使用，在多數(shù)情況下，酶的穩(wěn)定性提高 反應(yīng)后，酶、底物、產(chǎn)物易分開，產(chǎn)物中無殘留酶，易純化，產(chǎn)品質(zhì)量高。 反應(yīng)條件易控制，可實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化反應(yīng)的連續(xù)化和自動(dòng)控制。 酶的利用效率高。單位酶催化的底物量增加，用酶量減少。 比水溶性酶更適合于多酶反應(yīng)。酶固定化方法：1，載體結(jié)合法（物理吸附法、離子結(jié)合法、共價(jià)結(jié)合法）2，交聯(lián)法3，包埋法（網(wǎng)格型、微囊型）4，熱處理（細(xì)胞，針對固定化細(xì)胞）（無載體法）固定化

24、細(xì)胞的特點(diǎn)：既有細(xì)胞特性，也有生物催化劑功能，又有固相催化劑特點(diǎn)。優(yōu)點(diǎn)：無須進(jìn)行酶的分離純化 保持酶的原始狀態(tài)，固定化過程中酶的回收率高細(xì)胞內(nèi)酶比固定化酶穩(wěn)定性高 細(xì)胞內(nèi)酶的輔助因子可自動(dòng)再生 細(xì)胞本身含多酶體系，可催化一系列反應(yīng) 抗污染能力強(qiáng)第七章 發(fā)酵工程技術(shù)概論發(fā)酵的基本過程：菌種、種子制備、發(fā)酵、發(fā)酵液預(yù)處理、提取精制發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)水平取決于三個(gè)要素，分別是 生產(chǎn)菌種 、 發(fā)酵工藝 和 發(fā)酵設(shè)備。2.發(fā)酵工程產(chǎn)品開發(fā)的關(guān)鍵是篩選到高效菌株，一般優(yōu)良菌種的選育方法主要有 自然選育 、 誘變育種 和 原生質(zhì)體融合 。3.微生物誘變育種導(dǎo)致遺傳物質(zhì)DNA結(jié)構(gòu)上發(fā)生變化，通常用物理、化學(xué) 、生

25、物 等因素進(jìn)行對微生物的誘變。4.發(fā)酵產(chǎn)物的提取方法一般有 吸附法 、 沉淀法 、 溶劑萃取法 、離子交換法5.在發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中使用的碳源有 糖類 、 脂肪 、 有機(jī)酸 、 碳水化合物 .2. 簡述培養(yǎng)基對發(fā)酵的影響微生物的生長需要一定的營養(yǎng)，不同的微生物對營養(yǎng)的要求有很大的差異，培養(yǎng)基的成分和配比合適與否，對產(chǎn)生菌的生長發(fā)育，發(fā)酵單位的增長，有相當(dāng)大的影響，同時(shí)還會影響到提取工藝和產(chǎn)品質(zhì)量。微生物的生長需要較多供給有機(jī)碳架的碳源，構(gòu)成含氮物質(zhì)的氮源，還有無機(jī)鹽類，微量元素和水分等。1.碳源是構(gòu)成微生物細(xì)胞和各種代謝產(chǎn)物碳架的營養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)碳源在微生物的代謝過程中被氧化、釋放出能量，并以ATP

26、的形式貯存于細(xì)胞內(nèi)，供給微生物生命活動(dòng)所需的能量。2.無機(jī)鹽和微量元素是構(gòu)成菌體原生質(zhì)的成分，可維持酶的活性，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的滲透壓和PH，參與產(chǎn)物的合成等。3.水是必需的物質(zhì)，它既是構(gòu)成菌體細(xì)胞的主要成分，又是營養(yǎng)物質(zhì)傳遞的介質(zhì)，對微生物的生長繁殖和產(chǎn)物合成有很重要的作用。3. 簡述溫度對發(fā)酵的影響，如何控制溫度可提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)率？影響：1.影響各種酶反應(yīng)的速率和蛋白質(zhì)的性質(zhì)，溫度對菌體生長的酶反應(yīng)和代謝產(chǎn)物合成的影響往往不同，溫度能改變菌體代謝產(chǎn)物的合成方向，對多組分次級代謝產(chǎn)物的組分比例影響2.影響發(fā)酵液的物理性質(zhì)，如發(fā)酵液黏度、基質(zhì)和氧在發(fā)酵液中的溶解度和傳遞速率、某些基質(zhì)的分解和吸收速率等。在理論上，整個(gè)發(fā)酵過程中不應(yīng)只選一個(gè)培養(yǎng)溫度，而應(yīng)該根據(jù)發(fā)酵的不同階段選擇不同的培養(yǎng)溫度。在生長階段，應(yīng)選擇最適生長溫度；在產(chǎn)物分泌階段，應(yīng)選擇最適生產(chǎn)溫度。這樣變溫發(fā)酵所得產(chǎn)物的產(chǎn)量是比較理想的。但在工業(yè)發(fā)酵過程中，由于發(fā)酵液的體積很大，升降溫度都比較的困難，所以在整個(gè)發(fā)酵過程中，往往采用一個(gè)比較適合的培養(yǎng)溫度，使得到的產(chǎn)物產(chǎn)率最高。發(fā)酵溫度：生物熱、攪拌熱、蒸發(fā)熱、輻射熱（1）.最適溫度的