DB37T3406-2018水產(chǎn)品中三嗪類、酰胺類、二硝基苯胺類除草劑殘留量的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法.doc

ICS67.120.30B 50DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 37/T 34062018水產(chǎn)品中三嗪類、酰胺類、二硝基苯胺類除草劑殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法Determination of triazine, amide, dinitroaniline herbicide residues in fishery products by gas chromatography mass spectrometry2018 - 08 - 17發(fā)布2018 - 09 - 17實(shí)施山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB37/T 34062018前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省海洋與漁業(yè)廳提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由山東省漁業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省海洋資源與環(huán)境研究院、山東省水產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：徐英江、張華威、宮向紅、張秀珍、田秀慧、韓典峰、劉小靜、黃會(huì)、任傳博。10水產(chǎn)品中三嗪類、酰胺類、二硝基苯胺類除草劑殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中三嗪類（撲草凈、阿特拉津、特丁津、西瑪津、環(huán)草津、敵草凈、撲草凈、莠滅凈、西草凈、草凈津）、酰胺類（乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、丁草胺、丙草胺）、二硝基苯胺類（二甲戊樂靈）等16種三嗪類、酰胺類、二硝基苯胺類除草劑殘留量檢測(cè)的試劑與材料制備、儀器和設(shè)備、樣品的制備、測(cè)定步驟、結(jié)果計(jì)算和表述、檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度等技術(shù)內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于魚、蝦、蟹、貝、海參、龜鱉類、藻類等水產(chǎn)品可食部分中三嗪類、酰胺類、二硝基苯胺類除草劑殘留量的測(cè)定。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理試樣用乙酸乙酯-二氯甲烷混合溶液提取，凝膠滲透色譜與HLB固相萃取柱凈化，氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。4 試劑和材料以下所用試劑除另有指定外，均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T 6682中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)：a) 乙酸乙酯：色譜純；b) 二氯甲烷：色譜純；c) 環(huán)己烷：色譜純；d) 甲醇：色譜純；e) 正己烷：色譜純；f) 丙酮：色譜純；g) 乙酸乙酯-二氯甲烷溶液：乙酸乙酯+二氯甲烷=3+2（V/V）；h) 乙酸乙酯-環(huán)己烷溶液：乙酸乙酯與環(huán)己烷等體積混合；i) 正己烷-丙酮溶液：正己烷與丙酮等體積混合；j) 標(biāo)準(zhǔn)品：撲滅津（CAS：139-40-2）、阿特拉津（CAS：1912-24-9）、特丁津（CAS：5915-41-3）、西瑪津（CAS：122-34-9）、乙草胺（CAS：34256-82-1）、甲草胺（CAS：15972-60-8）、環(huán)草津（CAS：22936-86-3）、敵草凈（CAS：1014-69-3）、撲草凈（CAS：7287-19-6）、莠滅凈（CAS：834-12-8）、異丙甲草胺（CAS：87392-12-9）、西草凈（CAS：1014-70-6）、二甲戊樂靈（CAS：40487-42-1）、丁草胺（CAS：23184-66-9）、草凈津（CAS：21725-46-2）、丙草胺（CAS：51218-49-6），純度均98.0 % ；k) 標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取撲滅津、阿特拉津、特丁津、西瑪津、乙草胺、甲草胺、環(huán)草津、敵草凈、撲草凈、莠滅凈、異丙甲草胺、西草凈、二甲戊樂靈、丁草胺、草凈津、丙草胺各10 mg，用乙酸乙酯溶解，分別定容至10 mL，配制成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液，于4 下避光保存，有效使用期為6個(gè)月；l) 混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：分別準(zhǔn)確移取適量撲滅津等16種除草劑單標(biāo)貯備液，用乙酸乙酯稀釋成混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，使其中撲滅津、阿特拉津、特丁津、西瑪津、敵草凈、撲草凈、莠滅凈、異丙甲草胺的濃度均為1.0 g/mL，環(huán)草津、西草凈、甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺的濃度均為1.5 g/mL，草凈津、二甲戊樂靈的濃度均為2.0 g/mL，于4 下避光保存，有效使用期為1個(gè)月。5 儀器和設(shè)備5.1 氣相色譜質(zhì)譜-聯(lián)用儀：配電子轟擊離子源（EI源）。5.2 分析天平：感量0.0001 g。5.3 天平：感量0.01 g。5.4 超聲波清洗器。5.5 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000 r/min。5.6 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.7 凝膠色譜儀。5.8 固相萃取裝置。5.9 氮吹儀。5.10 旋渦混合器。5.11 固相萃取柱：HLB，60 mg/3 mL，或相當(dāng)者。5.12 凝膠色譜柱：長30 cm，內(nèi)徑2.3 cm2.5 cm；填料：Bio Beads（S-X3），200400目，25 g；或相當(dāng)者。6 樣品的制備魚，去鱗、去皮，沿脊背取肌肉，將鱗、皮單獨(dú)收集；蝦，去頭、去殼、去腸腺，取肌肉部分；蟹、貝、海參、龜鱉類、海帶等取可食部分，樣品充分?jǐn)囁?、混勻。如不能及時(shí)檢測(cè)，-18 以下冷凍保存?zhèn)溆谩? 測(cè)定步驟7.1 提取稱取試料5.00 g（0.05 g），置于50 mL離心管中，加入乙酸乙酯-二氯甲烷溶液25 mL，3 000 r/min旋渦1 min，超聲提取20 min，4000 r/min離心10 min。上層清液轉(zhuǎn)移至150 mL雞心瓶中，殘?jiān)右宜嵋阴?二氯甲烷溶液20 mL重復(fù)提取一次，合并上清液。40 旋蒸濃縮至近干，用乙酸乙酯-環(huán)己烷溶液溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?0 mL，待凈化。7.2 凈化7.2.1 凝膠色譜凈化凝膠色譜儀器流動(dòng)相為乙酸乙酯-環(huán)己烷溶液，流速4.7 mL/min，收集時(shí)間8 min23 min。收集流出液，于40 旋蒸濃縮至近干，用甲醇1 mL復(fù)溶并加入水9 mL混勻，待凈化。7.2.2 固相萃取凈化依次用甲醇3 mL、水3 mL活化固相萃取小柱，取待凈化液過柱，控制流速不超過2 mL/min，用水3 mL淋洗小柱，抽干5 min，加正己烷-丙酮溶液6 mL洗脫。收集洗脫液，40 氮吹至近干，用乙酸乙酯定容至0.5 mL，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。7.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確移取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，用乙酸乙酯稀釋成一系列的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，使其中撲滅津、阿特拉津、特丁津、西瑪津、敵草凈、撲草凈、莠滅凈、異丙甲草胺濃度分別為5.00 g/L、10.0 g/L、20.0 g/L、50.0 g/L、100 g/L，環(huán)草津、西草凈、甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺濃度分別為7.50 g/L、15.0 g/L、30.0 g/L、75.0 g/L、150 g/L，草凈津、二甲戊樂靈濃度分別為10.0 g/L、20.0 g/L、40.0 g/L、100 g/L、200 g/L，臨用時(shí)配制。以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。7.4 測(cè)定7.4.1 氣相色譜參考條件：a) 色譜柱：DB-17ms毛細(xì)管柱，30 m0.25 mm0.25 m，或相當(dāng)者；b) 載氣：高純氦氣，純度99.999 %，流速1.0 mL/min ；c) 進(jìn)樣方式：無分流進(jìn)樣；d) 進(jìn)樣量：1 L ；e) 進(jìn)樣口溫度：260 ；f) 柱溫：起始溫度50 ，保持1 min；以20 /min升溫至200 ，保持10 min，以10 /min升溫至240 ，以30 /min升溫至300 ，保持3 min 。7.4.2 質(zhì)譜參考條件a) 離子源： EI源；b) 接口溫度：280 ；c) 離子源溫度：230 ；d) 四級(jí)桿溫度：150 ；e) 溶劑延遲：4.0 min ；f) 測(cè)定方式：選擇離子（SIM）監(jiān)測(cè)模式，定量離子和定性離子見表1。表1 待測(cè)物定量離子和定性離子化合物名稱定量離子m/z定性離子1 m/z定性離子2m/z撲滅津214229172阿特拉津200215173特丁津214173229西瑪津201186173表1 （續(xù)）化合物名稱定量離子m/z定性離子1 m/z定性離子2m/z乙草胺162223174甲草胺160188217環(huán)草津212227170敵草凈213198171撲草凈241184226莠滅凈227170185異丙甲草胺162238146西草凈213170185二甲戊樂靈252281162丁草胺176160188草凈津225198240丙草胺1622381767.4.3 測(cè)定方法7.4.3.1 定性方法在同樣測(cè)試條件下，試樣液中待測(cè)物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作液中待測(cè)物的保留時(shí)間偏差在0.10 min以內(nèi)，在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的特征離子均應(yīng)出現(xiàn)，且檢測(cè)到的離子的相對(duì)豐度，應(yīng)與濃度相當(dāng)?shù)男Ｕ龢?biāo)準(zhǔn)溶液相對(duì)豐度一致。其允許偏差應(yīng)符合表2要求。表2 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的允許偏差相對(duì)離子豐度%允許偏差%501020501510202010507.4.3.2 定量方法按7.4.1和7.4.2設(shè)定儀器條件，待儀器穩(wěn)定后，根據(jù)表1中的定量離子分別對(duì)16種除草劑進(jìn)行測(cè)定，記錄保留時(shí)間和峰面積，以峰面積按外標(biāo)法進(jìn)行單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)定量，標(biāo)準(zhǔn)工作液和試樣液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白樣品及加標(biāo)樣品的選擇離子流圖參見附錄B。7.4.3.3 空白試驗(yàn)除不加試料外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行平行操作。8 結(jié)果計(jì)算和表述按式（1）分別計(jì)算試樣中16種除草劑的殘留量（g/kg），計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用兩次平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。(1)式中：x試樣中被測(cè)組分的殘留量，單位為g/kg；ci試樣溶液中對(duì)應(yīng)的被測(cè)組分濃度，單位為g/L；V試樣溶液定容體積，單位為mL；m供試試樣的質(zhì)量，單位為g；2稀釋倍數(shù)。9 檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度9.1 檢出限撲滅津、阿特拉津、特丁津、西瑪津、敵草凈、撲草凈、莠滅凈、異丙甲草胺分別為0.3 g/kg；環(huán)草津、西草凈、甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺分別為0.5 g/kg；草凈津、二甲戊樂靈分別為0.8 g/kg。9.2 定量限撲滅津、阿特拉津、特丁津、西瑪津、敵草凈、撲草凈、莠滅凈、異丙甲草胺分別為1.0 g/kg；環(huán)草津、西草凈、甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺分別為1.5 g/kg；草凈津、二甲戊樂靈分別為2.0 g/kg。9.3 準(zhǔn)確度撲滅津、阿特拉津、特丁津、西瑪津、敵草凈、撲草凈、莠滅凈、異丙甲草胺在添加濃度1 g/kg10 g/kg時(shí)，回收率均為70 %120 % ；環(huán)草津、西草凈、甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺在添加濃度1.5 g/kg15 g/kg 時(shí)，回收率均為70 %120 % ；草凈津、二甲戊樂靈在添加濃度2 g/kg20 g/kg時(shí)，回收率均為70 %120 % 。9.4 精密度本方法的批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15 % ，批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15 % 。AA附錄A （資料性附錄）16種除草劑中、英文名稱及分子量表A.1 16種除草劑中、英文名稱及分子量中文名稱英文名稱分子量撲滅津Propazine229阿特拉津Atrazine215特丁津Terbuthylazine229西瑪津Simazine201乙草胺Acetochlor269甲草胺Alachlor269環(huán)草津Cyprazine227敵草凈Desmetryn213撲草凈Prometryn241莠滅凈Ametryn227異丙甲草胺Metolachlor283西草凈Simetryn213二甲戊樂靈Pendimethalin281丁草胺Butachlor311草凈津Cyanazine240丙草胺Pretilachlor311BB附錄B （資料性附錄）色譜圖圖B.1 16種除草劑標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖（10 ng/mL）圖B.2 草魚加標(biāo)樣品總離子流圖（10 g/kg）圖B.3 對(duì)蝦加標(biāo)樣品