水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留檢測前處理方法研究與優(yōu)化.doc

水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留檢測前處理方法研究與優(yōu)化 曹秀梅 （秦皇島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，河北秦皇島066000） 摘要：采用高效液相色譜法測定水產(chǎn)品中孔雀石綠的殘留量，參考GB/T20361-xx的方法，將前處理步驟部分進行了優(yōu)化，將樣品前處理的勻漿提取改為樣品渦動和離心；增加50mL實驗用水，去掉二次萃取乙腈，不用過濾膜過濾直接上機進行測定。結(jié)果表明：經(jīng)添加回收實驗，回收率在80%左右，本方法操作簡便，消除了乳化現(xiàn)象，提高回收率，偏差小。 關(guān)鍵詞：水產(chǎn)品；孔雀石綠；前處理；優(yōu)化 水產(chǎn)品營養(yǎng)豐富，味道鮮美，深受人們喜愛。近年來水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，水產(chǎn)品中藥物殘留對人類健康的危害已成為當(dāng)今突出的食品安全問題1，許多商者為了增加收益，在水產(chǎn)品中添加孔雀石綠藥物對其新鮮度和完好性進行防御?？兹甘G是帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，可用于治理魚類、魚卵寄生蟲、真菌或細(xì)菌感染，在養(yǎng)殖與運輸中被常常用到，是廉價、療效好的藥物，然而其具有難代謝、殘留時間長、高毒性、高殘留、可致癌、致畸形等多種副作用，危害人們的身體健康，被許多國家紛紛禁止使用。為了防止濫用孔雀石綠，許多國家也都制定了相應(yīng)的法規(guī)措施及檢測標(biāo)準(zhǔn)。目前對孔雀石綠的檢測主要有高效液相色譜法，有的省部級單位開始用液質(zhì)聯(lián)用檢測儀，雖然有較低的檢測限，但是儀器價格昂貴，技術(shù)要求較高。而且，我們在采用國標(biāo)GB/T20361-xx的熒光檢測方法實驗過程中發(fā)現(xiàn)了一些問題，為提高檢測工作效率，保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，我們在此基礎(chǔ)上進行了部分改進。經(jīng)過研究能滿足水產(chǎn)品孔雀石綠殘留量測定的要求，可為保護廣大消費者的身體健康、為農(nóng)業(yè)執(zhí)法提供重要的技術(shù)保障。 1實驗部分 1.1儀器與設(shè)備 島津LC20A液相色譜儀，熒光檢測器；高速離心機：TGL-20M；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 1.2色譜條件 參照GB/T20361-xx2的色譜條件。 1.3樣品制備 參照GB/T20361-xx2的樣品提取、萃取、凈化等步驟，結(jié)合優(yōu)化步驟進行處理操作，符合檢測標(biāo)準(zhǔn)要求。 2結(jié)果與討論 實驗結(jié)果以色譜圖中保留時間定性，外標(biāo)法定量。 2.1樣品提取改進 本方法將GB/T20361-xx中的1000r/min勻漿提取30s改為加標(biāo)靜置10min，防止用勻漿機勻漿增加加標(biāo)損失，影響回收率，并用3000r/min渦動2min，4000r/min離心3min，使孔雀石綠提取完全，增加它的溶出效果，從而增加實驗的回收率效果。 2.2樣品萃取改進 因GB/T20361-xx方法萃取乳化現(xiàn)象嚴(yán)重，第二次萃取分層不明顯，因此第一次萃取加入50mL水；由于乙腈對水的溶解度較大，第二次將5mL乙腈去掉，不用離心第二次分層效果非常明顯，縮短了時間，提取分離效果也提高了。 2.3樣品過濾膜改進 由于市面上的濾膜質(zhì)量參差不齊，有時出現(xiàn)一些濾膜的雜峰3，干擾出峰，使得譜圖不美觀，所以本方法將過柱提取液直接于刻度管中定容上機測定，節(jié)約了成本，提高了效率。 2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線及加標(biāo)回收情況 以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，在0.1500ng/mL線性范圍內(nèi)良好，線性范圍良好。標(biāo)準(zhǔn)品譜圖見圖1。 取大菱鲆7份樣品，分別按加入1mL500ng/mL；2mL500ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液，進行加標(biāo)回收實驗，每個溶度重復(fù)3次，另外一份為空白對照，按照改進的方法進行測定，結(jié)果如表1。 3結(jié)論 本實驗在GB/T20361-xx的基礎(chǔ)上進行了改進。將樣品前處理的勻漿提取改為樣品渦動和離心；提高了目標(biāo)物的溶出效果，減少了勻漿帶來的損失，提高了回收率，同時在萃取步驟增加50mL實驗用水，去掉5mL乙腈，減少了試劑的使用，防止了乳化現(xiàn)象的出現(xiàn)，增加了萃取分層的效果；實驗最后不用過濾膜過濾直接上機進行測定，節(jié)省了消耗品的成本，也避免了雜峰的干擾。結(jié)果表明，經(jīng)改進的方法用于檢測水產(chǎn)品中的孔雀石綠成分，簡便、偏差小、提高了回收率、提高了工作效率。而且通過從事檢測工作不同工作年限的試驗人員的多次比對，回收率也能達到80%左右，說明改進后的方法適用于水產(chǎn)品中的孔雀石綠成分殘留量的檢測。 參考文獻： 1鄭斌.水產(chǎn)品中幾種常用藥物殘留的液相色譜檢測方法研究D.青島：中國海洋大學(xué)，xx 2GB/T20361-xx.水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測定高效液相色譜