毒理學水生毒性試驗設計.doc

某化合物A,在水中溶解度10%,在丙酮中的溶解度為100%,不揮發(fā).在pH5.4mg/L,pH值為6.4-7.0，水溫(222)?？傆捕?25250mg/L(以CaCO3計)。自然光照，實驗周期96h，實驗方式采用靜水式，96h之內不更換試液。1.4 實驗生物 受試斑馬魚購于上海市楊浦區(qū)花鳥蟲魚市場，體長為(30.000.75)mm，體重量為（0.200.01）g.行為活潑，反應靈敏，無畸形，逆水性強。魚苗經w=5%食鹽水消毒后進入實驗室，用曝氣48h的自然脫氮自來水在實驗室經過馴養(yǎng)710d后方可實驗，馴養(yǎng)期間死亡率應小于3%。實驗前24h停止喂飼，實驗期間不喂食，每天清除糞便及食物殘渣,保證每天實驗期間光照12h。2 實驗方法 先做預實驗，以確定化合物A對斑馬魚24h100%致死的最低濃度和96h不引起死亡的最高濃度。實驗在2L的燒杯中進行，設置間隔較大的濃度梯度，盡可能使LC50在設置的濃度范圍內，每個濃度設平行。實驗開始后每隔一段時間觀察記錄，整理24h、48h，72h，96h觀察記錄，需要統計各容器試驗魚的存活情況和行為特征，實驗觀察時發(fā)現死魚需要及時撈出。濃度/(mg/l)014.55.07.010死亡率/%00080100100從預實驗得到的無死亡濃度和100%死亡濃度之間，以實驗配置好的母液以及稀釋水，按照一定的間隔設置6個實驗濃度組（4.5mg/L, 5.0mg/L, 5.5mg/L, 6.0mg/L, 6.5mg/L, 7.0mg/L）和一個空白對照組（曝氣自來水）以及助溶劑（丙酮）對照組，每組設三個平行。每組10條斑馬魚，以96h為一個實驗周期，采用靜水流的方式，在24h，48h，72h，96h后分別觀察斑馬魚存活狀況，并記錄溶解氧、pH、溫度情況，魚的死亡情況及行為變化等等，還要及時撈出死魚。最終確定魚死亡50%時受試物的濃度，半數致死濃度用24h-LC50、48h-LC50、72h-LC50、96h-LC50來表示，判斷斑馬魚死亡需要用玻璃棒輕輕按壓斑馬魚的尾部，如果沒有反應即認為斑馬魚已經死亡。死亡率濃度（mg/L）24h48h72h96hX1x2x3平均值x1x2x3平均值x1x2X3平均值x1x2x3平均值自來水空白丙酮空白4.55.05.56.06.57.0 根據化合物A對斑馬魚的致死數據計算出其平均死亡率，再轉化為概率單位，求出概率單位與化合物A濃度對數的回歸方程，計算出化合物A的LC50，具體結果見表3. 污染物實驗時間/h相關系數LC50（mg/L）化合物A24487296根據魚類毒性分級標準，LC5010000mg/L為微毒或無毒。再以此判斷含該化合物的廢水的毒性.關于含化合物A的廢水毒性實驗,實驗設計廢水濃度100、50、40、20、10、5和0(CK)7個處理，3次重復。每組廢水中均放入10尾斑馬魚,實驗周期為96h,開始暴露前,試驗魚逐條測量全長和體重,各組之間試驗魚的全長和體重均無顯著性差異.采用自然光照,對照組和實驗組同時進行試驗,試驗期間每24h更換一次試液.為防止餌料影響,試驗期間不喂食.每兩小時觀察記錄1次斑馬魚的生活作息;分別于4h,8h,12h,24h,48h,96h時統計斑馬魚的死亡率.廢水濃度(%)不同實驗時間魚的死亡率(%)4h8h12h24h48h96h0510204050100根據斑馬魚在各觀察時間段的死亡率,計算出LC50, SC,MAC和Tua急性毒性特征參數。（1） 半致死濃度（LC50）：采用概率單位-質量濃度直線回歸計算。（2） 安全濃度(SC):SC=0.1各觀察時段的半致死濃度。（3） 毒性累積程度（MAC）:MAC=某觀察時段的半致死濃度差值/最初觀察點與實驗結束時的半致死濃度差值100%。分析斑馬魚對含A廢水的蓄積與降減動態(tài)。（4） 急性毒性單位(Tua)=100%/LC50 總結：在上環(huán)境毒理學的時候，老師講到，對于水生生物的毒性試驗的一般程序：1，實驗條件的準備。2，實驗生物的選擇與準備。3，稀釋水。4，毒物準備。5，測試方法選擇與測試重點的確定。6，實驗濃度的選擇與設計。7，指標觀測。8，數據分析與統計。9，得出相應結論。綜合比較來看，我還是緊緊圍繞著這條主線走。當然此次設計試驗，除了結合平時尹老師課堂上所講的知識之外，本人也查閱了大量的相關毒性實驗文獻，其中還有向劉樹深老師請教，與同學們的交流的過程，個人感覺是學到了很多課本以外的東西，也體會到了實驗設計的難度。如同平常所做的實驗，那些都