乙型肝炎病毒的生物危害評估報告

乙型肝炎病毒的生物危害評估報告1危害程度分類1.1分類等級根據(jù)中華人民共和國傳染病防治法，乙型肝炎病毒（HBV）屬于乙類傳染病。在衛(wèi)生部2006年公布的人間傳染的病原微生物名錄中將其列為危害程度第三類病原微生物。運輸包裝僅病毒培養(yǎng)物為A類，UN編號為UN2814。1.2實驗室操作生物安全實驗室級別要求根據(jù)人間傳染的病原微生物名錄要求：乙肝血清學(xué)檢測未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作，應(yīng)在級生物安全實驗室（BSL-2）實驗室中進(jìn)行。2背景資料2.1一般生物學(xué)特性乙型肝炎病毒屬嗜肝DNA病毒，有包膜，病毒顆粒為直徑42nm的圓球形。在病毒感染者的外周血中還有直徑22nm的圓形和管形顆粒。這種顆粒為乙型肝炎表面抗原，沒有核酸，無傳染性。1）大球形顆粒：亦稱Dane顆粒，它是一種由一個囊膜和一個含有DNA分子的核衣殼組成的病毒顆粒，直徑約42nm。核衣殼為20面體對稱結(jié)構(gòu)。游離的核衣殼只能在肝細(xì)胞核內(nèi)觀察到。血中Dane顆粒濃度以急性肝炎潛伏期后期為最高，在疾病起始后則迅速下降。Dane顆粒表面含有HBsAg，核心中還含有雙股有缺口的DNA鏈和依賴DNA的DNA多聚酶。目前認(rèn)為Dane顆粒即完整的HBV。HBV DNA的兩鏈長短不一，長鏈（L）完整，為負(fù)鏈，長度恒定，約3200個核苷酸。短鏈（S）為正鏈，長度可變，約為長鏈長度的50100%，鏈的增生按5-3順序進(jìn)行。在不同分子中短鏈3端的位置是可變的，而短鏈和長鏈的5端位置固定點為粘性末端，通過250300個核苷酸堿基配對，以維持DNA分子的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。在粘性末端兩側(cè)，兩鏈5端各有一個由11個bp組成的直接重復(fù)序列（Direct repeat DR）-5TTCACCTCTCC，該DR位于第1824個核苷酸者稱DR1，位于第1590個核苷酸者稱DR2，在病毒復(fù)制中起作用。2）小形球顆粒：直徑約22nm的小球形顆粒是HBV感染后血液中最多見的一種。它由HBsAg，即病毒的囊膜組成?；瘜W(xué)組成為脂蛋白，可按其特有的密度與正常血清蛋白部分分離。在此顆粒中未檢出達(dá)DNA多聚酶活性。目前認(rèn)為HBV的小顆粒不是HBV，可能是它感染肝細(xì)胞時合成過剩的囊膜而游離于血循環(huán)中。3）管形顆粒：直徑約22nm，長度可在100700nm之間。實際上它是一串聚合起來的小顆粒，但同樣具有HBsAg的抗原性。2.2對外界環(huán)境的穩(wěn)定性HBV對外界抵抗力環(huán)境抵抗力較強，對干燥、紫外線、75%乙醇等均有耐受性，60可存活2小時，30-32至少可存活6個月，20可存活5年。但100煮沸10分鐘；高壓蒸汽滅菌、0.5%過氧乙酸、5%次氯酸鈉等均能滅活病毒，因此，注射器具、醫(yī)療用具通過高溫消毒、煮沸或蒸汽消毒完全可以達(dá)到消毒目的。2.3傳播途徑及致病性乙型肝炎病毒通常是經(jīng)過腸道外途徑傳播,其典型的傳播途徑是輸入污染的血及血制品。HBV的傳染性很強，外科和口腔手術(shù)、針剌、使用公用剃刀、牙刷等物品，皮膚微小操作污染含少量病毒的血液，均可成為傳染源。另外, 由于乙型肝炎患者和HBsAg攜帶者的精液、陰道分泌物均可檢出HBsAg，因此，兩性接觸傳播乙型肝炎的可能性是存在的。近來有人報告在急性乙型肝炎患者和慢性HBsAg攜帶者唾液標(biāo)本中檢測到HBsAg及Dane顆粒，因此，HBsAg隨唾液經(jīng)口傳播的途徑應(yīng)當(dāng)重視。孕婦在妊娠后期患急性乙型肝炎，新生兒易感染此病。2.4乙型肝炎預(yù)防、診斷和治療2.4.1預(yù)防措施1）健康教育：應(yīng)向群眾宣傳乙肝知識，認(rèn)清乙肝病毒傳播途徑的復(fù)雜性和乙肝在我國人群中的普遍性，樹立預(yù)防為主，自我保護(hù)意識。2）執(zhí)行新生兒乙肝疫苗計劃免疫，做好產(chǎn)前檢查，特別是HBsAg伴有HBeAg的雙陽母親新生兒，用乙肝疫苗聯(lián)合乙肝高效價免疫球蛋白注射以阻斷母嬰傳播。3）獻(xiàn)血員的篩選：獻(xiàn)血員必須做到每次獻(xiàn)血前檢測血清轉(zhuǎn)氨酶（ALT），以敏感的方法（ELISA）檢測HBsAg，兩項中任何一項陽性均不得獻(xiàn)血。4）防止醫(yī)源性傳播，各級醫(yī)療衛(wèi)生單位，應(yīng)嚴(yán)格實行一人一針一管。2.4.2實驗室檢查及其診斷乙型肝炎的臨床表現(xiàn)形式多樣，診斷的依據(jù)除病人癥狀，體征外，須根據(jù)流行病學(xué)，實驗室檢查和或肝活檢等手段進(jìn)行綜合分析，動態(tài)觀察診斷。1）流行病學(xué)資料：半年內(nèi)接受過血及血制品或曾有其他醫(yī)源性感染，生活中的密切接觸，尤其是性接觸。2）癥狀：近期出現(xiàn)的無其他原因可解釋的持續(xù)一周以上的明顯乏力和消化道癥狀。3）體征：肝腫大，伴有觸痛或叩痛；皮膚，鞏膜黃染。4）肝功能檢查：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）明顯增高。5）HBV標(biāo)記物檢查：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽性。2.4.3 治療病毒性肝炎目前還缺乏可靠的特效治療方法。各型肝炎的治療原則均以足夠的休息、營養(yǎng)為主，輔以適當(dāng)藥物，避免飲灑、過勞或損害肝臟藥物。1）急性肝炎以一般及支持療法為主。休息與隔離應(yīng)強調(diào)早期臥床休息，至癥狀明顯減退，可逐步增加活動。飲食飲食宜清淡，熱量足夠，蛋白質(zhì)攝入爭取達(dá)到每日11.5g/kg，適當(dāng)補充維生素B族和C，不強調(diào)高糖和低脂肪飲食。2）輕度慢性肝炎除一般及支持療法以外，還需要進(jìn)行對癥和抗病毒治療。休息無需絕對臥床休息，宜用動靜結(jié)合的療養(yǎng)措施。處于活動期的患者，應(yīng)以靜養(yǎng)為主；處于靜止期的患者，可從事力所能及的輕工作。癥狀消失，肝功能正常3個月以上者，可恢復(fù)其原來工作，但仍需隨訪12年。飲食應(yīng)適當(dāng)進(jìn)食較多的蛋白質(zhì)，避免過高熱量飲食。以防止肝臟脂肪變性。也不宜進(jìn)食過多的糖，以免導(dǎo)致糖尿病。對癥治療包括降低轉(zhuǎn)氨酶制劑，如聯(lián)苯雙脂、垂盆草、齊墩果酸等，具有非特異性降低ALT的作用。這些降酶藥物雖然可能具有護(hù)肝的作用，但停藥后容易產(chǎn)生ALT反跳。故在顯效后應(yīng)注意逐漸停藥。一般的非特異性護(hù)肝藥物，主要包括維生素類（B族、C、E、K等），促進(jìn)解毒功能藥物如葡醛內(nèi)脂（肝泰樂）、還原型谷胱甘肽、維丙胺、硫辛酸等，促進(jìn)能量代謝藥三磷酸腺苷（ATP）、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成藥物（肝安、水解蛋白等）以改善微循環(huán)藥物（丹參、低分子右旋糖酐等）可作為輔助治療，但宜精簡，避免使用過多藥物。抗病毒治療：a.干擾素慢性乙型肝炎時干擾素使用的指征為：HBV在活動性復(fù)制中；肝炎處于活動期；HBV DNA血濃度低；抗-HBc IgM 陽性。使用干擾素治療時劑量應(yīng)偏大（300萬600萬U/次），療程應(yīng)偏長（6個月1年）。干擾素一般僅能抑制HBV復(fù)制，使HBeAg和HBV DNA轉(zhuǎn)陰，而難以使HBsAg轉(zhuǎn)陰。b. 核苷類似物 拉米夫定（lamivudine，3TC，TM）主要通過抑制HBV DNA逆轉(zhuǎn)錄酶的活性及抑制共價閉合環(huán)DNA（covalently closed circle DNA,cccDNA）的合成而抑制HBV DNA的合成。它不抑制線粒體DNA和骨髓，無直接調(diào)節(jié)免疫作用，因而基本上無不良反應(yīng)。長期（6個月以上）用藥可使HBV DNA發(fā)生變異而產(chǎn)生耐藥性。3從事實驗室活動的危險性分析及相應(yīng)的預(yù)防措施3.1實驗室實驗活動背景資料本實驗室主要從事HBV/HCV/HIV 病毒及梅毒螺旋體的血清學(xué)檢測。HBV 抗體篩查實驗: 酶免法(ELISA)3.2可能危害在實驗操作過程中，接收樣本時樣本包裝密封性不好造成樣本泄露；操作過程中如打開容器蓋時樣本外濺，加樣、孵育、震蕩、分離保存血清等時由于操作不慎導(dǎo)致樣本濺出、離心管破裂崩濺、氣溶膠等。實驗室工作環(huán)境的污染，實驗人員如果接觸污染的實驗儀器表面、冰箱、加樣器、實驗臺、門把手及實驗廢棄物等均可能被感染。3.3預(yù)防及處置措施3.3.1預(yù)防避免職業(yè)性血液及體液暴露是實驗室預(yù)防HBV傳播的主要措施。1) 實驗檢測過程均應(yīng)在生物安全防護(hù)級實驗室內(nèi)進(jìn)行。2) 操作者在實驗全過程包括樣品接收，都應(yīng)穿戴好一切生物安全防護(hù)裝備，一次性的口罩、帽子、乳膠手套，防護(hù)衣、必要時配戴防護(hù)鏡等，操作全過程應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行實驗室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）。3) 盡量避免在實驗室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時應(yīng)采取措施防止刺傷或劃傷，并應(yīng)對用過的物品進(jìn)行消毒處理。4）完成乙型肝炎病毒疫苗接種程序，并且進(jìn)行抗體檢測。5）經(jīng)過規(guī)范的生物安全培訓(xùn)，并經(jīng)過嚴(yán)格考核和取得上級主管部門人員許可；近期較深的開放性傷口的人員應(yīng)該禁止或限制其進(jìn)入相關(guān)實驗操作區(qū)。6）限制在妊娠早期的工作人員進(jìn)行病毒相關(guān)的感染性材料的操作。7) 如接觸物傳染性危險大，可戴雙層（兩付）手套以增加保護(hù)。操作時手套破損，應(yīng)立即丟棄、洗手并戴上新手套。8) 禁止采用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實驗室的所有液體。9) 工作完畢，要對工作臺面消毒。工作臺面應(yīng)當(dāng)用0.1%0.2%次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；10) 工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作衣，用肥皂和流動水洗手。3.3.2處置措施1) 所有的血液、血清（血漿）均應(yīng)視為有潛在傳染性，都應(yīng)以安全的方式進(jìn)行操作。應(yīng)按操作未知的有傳染風(fēng)險樣品一樣，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的質(zhì)量控制和參考物質(zhì)。2) 接收樣本時，核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏，如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，若樣本外漏到標(biāo)本容器外面，應(yīng)立即用浸有5%含氯消毒液的多重軟布及擦拭標(biāo)本容器，必要時通知重新留取標(biāo)本。打開標(biāo)本容器時要小心，以防內(nèi)容物潑濺。廢棄的標(biāo)本視為高危物質(zhì)放置到高壓滅菌鍋內(nèi)消毒，同時立即更換污染的手套，污染的手套也應(yīng)放到高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。3) 在進(jìn)行操作時，若發(fā)生液體外濺，應(yīng)將被濺的地方用5%含氯消毒液浸泡的物質(zhì)覆蓋，待消毒液起作用10-15分鐘后清理該地方，移走吸水性物質(zhì)。所有實驗用品應(yīng)按污染物質(zhì)處理，放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。4) 在離心過程中，若發(fā)生離心管破裂及樣本外濺，應(yīng)立即停止離心，待離心機自動停止并發(fā)出提示信號30分鐘后，確保穿戴好一切防護(hù)用品后，方可打開離心機蓋，用止血鉗子夾出離心的碎片，被樣本污染的地方，防置浸泡有5%含氯消毒劑的吸水性物質(zhì)，待消毒劑起作用后10-15分鐘再清理污染處，移走吸水性物質(zhì)，并用0.5%含氯消毒劑或2%戊二醛多次消毒污染處所有消毒處理用過的物品應(yīng)按高危物質(zhì)處理，放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。4實驗室職業(yè)暴露后的立即處理職業(yè)暴露發(fā)生后，應(yīng)立即報告。盡快地使用HBIG、乙型肝炎疫苗。 1) 皮膚針刺傷或切割傷：立即用肥皂和大量流水沖洗，過程中擠壓傷口盡可能擠出損傷處的血液，持續(xù)1520min后并用75%酒精或者0.5%碘伏進(jìn)行消毒。2) 皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當(dāng)?shù)南緞┙?，?5%乙醇或其它皮膚消毒劑。3) 粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。4) 衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進(jìn)行消毒處理。5) 污染物潑濺：發(fā)生小范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理。發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即通知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人到達(dá)事故現(xiàn)場查清情況，確定消毒的程序。5.職業(yè)暴露后預(yù)防與管理5.1職業(yè)暴露后的預(yù)防應(yīng)考慮幾個因素：a.暴露源的HBsAg狀態(tài)、暴露者的乙型肝炎疫苗接種情況和疫苗反應(yīng)狀態(tài)。對未免疫接種的工作人員的血液或體液暴露，應(yīng)啟動乙型肝炎疫苗接種。并對暴露者的乙型肝炎疫苗接種情況和疫苗反應(yīng)狀態(tài)進(jìn)行評估。推薦預(yù)防方案見表1。表1 暴露于HBV的推薦方案暴露者的免疫接種和抗體反應(yīng)狀況處理暴露源HBsAg陽性暴露源HBsAg陰性暴露源不明確或未檢測未免疫接種注射乙型肝炎免疫球蛋白、乙型肝炎疫苗接種乙型肝炎疫苗接種乙型肝炎疫苗接種已免疫接種有反應(yīng)者不需處理不需處理不需處理已免疫接種但抗體反應(yīng)未知測試抗-HBs，如果有，不需處理；否則施與HBIG和疫苗增強不需處理測試抗-HBs，如果有，不需處理；否則施與疫苗增強和在12個月后再檢測抗體滴度* HBIG（乙型肝炎免疫球蛋白），劑量200U，肌肉注射。* 有反應(yīng)者為HBsAg血清表面抗體陽性的暴露者* 無反應(yīng)者為對免疫接種反應(yīng)不足的暴露者（檢測表面抗體為陰性）。當(dāng)需要應(yīng)用HBIG時，應(yīng)在暴露后盡可能快地使用（最好在24小時內(nèi)）。在暴露7天后HBIG的有效性不明確。當(dāng)需要應(yīng)用乙型肝炎疫苗時，也應(yīng)在暴露后盡可能快地使用（最好在24小時內(nèi)）；并且可與HBIG同時注射。乙型肝炎疫苗是安全的，接種乙型肝炎疫苗的最常見副反應(yīng)為注射點疼痛和輕度至中度發(fā)熱，嚴(yán)重副反應(yīng)的發(fā)生率非常低。對免疫球蛋白有過敏反應(yīng)史的暴露者不應(yīng)接受HBIG。妊娠和哺乳期婦女暴露者都可注射乙型肝炎疫苗接種和HBIG。5.2 職業(yè)暴露后的管理職業(yè)暴露事故的事故發(fā)生單位應(yīng)建立“醫(yī)務(wù)人員職業(yè)血液暴露登記表”，對職業(yè)暴露情況進(jìn)行登記、保存和上報。詳細(xì)記錄職業(yè)暴露發(fā)生的時間、地點及經(jīng)過；暴露方式；損傷的具體部位、程度；暴露物種類（血液、血清或血漿）；處理方法及處理經(jīng)過；是否采用暴露后預(yù)防藥物，并詳細(xì)記錄用藥情況、首次用藥時間、藥物毒副作用情況（包括肝腎功能化驗結(jié)果）、