分析方法驗證與確認管理規(guī)程

1、3 定義3.1 檢驗方法驗證：證明采用的方法適用于相應檢測要求。 3.2 檢驗方法確認：證明使用法定方法在目前實驗室條件下是否能獲得可靠結果，是否適用于相應的檢測工作。在本質(zhì)上和驗證一樣，但不一定是驗證項目的全部。3.3 藥典方法：經(jīng)過國家藥監(jiān)部門批準的藥典收載的質(zhì)量標準和檢驗方法3.4 法定方法：法定方法包括藥典方法、國標方法等。3.5 準確度：是指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率表示。3.6 精密度：是指在規(guī)定的測試條件下同一個均勻供試品經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。3.7 重復性：在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度稱為重復性。3.8 中間

2、精密度：在同一個試驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果之間的精密度稱為中間精密度。3.9 重現(xiàn)性：在不同實驗室由不同分析人員測定結果之間的精密度稱為重現(xiàn)性。3.10 專屬性：是指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物質(zhì)的特性。3.11 檢測限：是指供試品中被測物能被檢出的最低量。3.12 定量限：是指供試品中被測物能被定量測定的最低量。3.13 線性：是指在設計范圍內(nèi)，測試結果與試樣中被測物濃度直接成正比關系的程度。3.14 范圍：是指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低濃度或量的區(qū)間。3.15 耐用性：是指在測定條件有小的變動時

3、，測定結果不受影響的承受程度。4 職責4.1 標準驗證崗4.1.1 提升現(xiàn)行質(zhì)量標準工作時，對研究后確定的標準草案進行檢驗方法驗證工作，以確保檢驗方法的適用性、科學性。4.1.2 對技術部移交的新品質(zhì)量標準草案進行確認，以確保檢驗方法適用性、科學性。4.1.3 對技術部移交的新品應研究建立設備清潔驗證殘留物檢驗方法，并進行方法學驗證。4.2 理化檢驗崗4.2.1 對首次采用的藥典或國標檢驗方法，進行檢驗方法確認工作，以證明檢驗方法的適用性，確保檢驗數(shù)據(jù)準確、可靠。4.2.2 對標準驗證崗研究后確定的質(zhì)量標準草案中變更后的檢驗方法進行確認。4.3 微生物崗4.3.1 凡有國家檢測機構對成品或中間

4、體微生物限度檢驗方法進行確認過的，則該方法可直接用于檢驗，否則需要按照藥典附錄要求進行方法學驗證。4.3.2 建立產(chǎn)品的微生物限度檢查時，應進行細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證和控制菌檢查方法的驗證，以確認所采用的方法適合于細菌、霉菌及酵母菌數(shù)和控制菌的測定。5 規(guī)程內(nèi)容5.1 檢驗方法驗證的基本原則用于檢驗的分析方法符合下列情形之一但不限于以下情況的，應當對檢驗方法進行驗證：5.1.1 新建的檢驗方法，包括新建的產(chǎn)品檢驗方法和設備清潔驗證殘留物檢驗方法等。5.1.2 檢驗方法需變更的。5.1.3 采用中華人民共和國藥典及其他法定標準未收載的檢驗方法。5.1.4 法規(guī)規(guī)定的其他需要驗證的檢驗方

5、法。5.1.5 將法定方法用于測定新藥，或將某一品種的法定測定方法用于另一品種。5.1.6 檢驗用設備主要部分改變。5.1.7 藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更。5.1.8 檢驗條件發(fā)生改變可能影響到檢驗結果時，方法應重新驗證。5.2 需要驗證的分析項目有：5.2.1 理化檢驗方法：鑒別試驗、雜質(zhì)定量檢查或限度檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分（如防腐劑等）的測定。藥品溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等的測試方法也應做必要的驗證。5.2.2 微生物檢驗方法：細菌、霉菌和酵母菌的定量檢查，控制菌的定性檢查。5.3 檢驗方法驗證內(nèi)容有：5.3.1 理化檢驗方法：準確度、精密度

6、（包括重復性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。視具體方法擬定方案。5.2項下列出的分析項目和相應的驗證內(nèi)容可供參考。5.3.2 微生物限度檢驗方法：微生物限度檢驗方法：細菌、霉菌和酵母菌數(shù)的計數(shù)方法驗證（菌液回收率），控制菌的專屬性的驗證。5.4 檢驗方法應有詳細說明，并提供足夠的信息，能使經(jīng)過正確培訓的檢驗人員可靠的進行檢驗。5.4.1 理化檢驗方法要說明的內(nèi)容至少應包括檢測條件（如色譜檢測器）、所需試劑、對照品、結果計算的公式和系統(tǒng)適用性試驗。5.4.2 微生物檢驗方法要說明的內(nèi)容至少應包括使用的菌種、菌液含量、所需培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、計數(shù)方法、結果

7、計算的公式。5.5 檢驗方法驗證應該依據(jù)驗證方案執(zhí)行。方案應該包括所有項目的檢測方法和接受標準。驗證結果應如實填寫，準確完整記錄在驗證報告中。5.6 理化檢驗方法驗證的分析項目 項目內(nèi)容鑒別限量檢查含量測定及溶出量測定定量限度準確性+重復性+中間精密度+重現(xiàn)性+專屬性+檢測限+定量限+線性+范圍+耐用性+注：已有重現(xiàn)性驗證，不需要驗證中間精密度。重現(xiàn)性只有在該分析方法將被法定標準采用時做。如有一種方法不夠專屬，可用其他分析方法予以補充。以上表中列舉了在不同類型的分析方法驗證中被認為是最重要的項目，“”表示通常不需要驗證的項目，“+”表示通常需要驗證的項目，如遇特殊情況，仍應根據(jù)具體分析對象和情

8、況而定。5.7 檢驗方法確認的基本原則5.7.1 法定方法中的鑒別試驗、雜質(zhì)定量檢查或限度檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測定需要酌情考慮進行方法確認，其余方法不需要進行確認。5.7.2 從一個實驗室到另一個實驗室的檢驗方法轉移，可采用對照試驗法，即取同一批樣品，按此法在兩實驗室分別進行實驗，將結果進行比較。5.7.3 檢驗方法確認內(nèi)容有：準確度、精密度（包括重復性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性、定量限。視具體方法擬定方案。5.8項下列出的分析項目和相應的確認內(nèi)容可供參考。5.7.4 檢驗方法確認應依據(jù)確認方案執(zhí)行。方案應該包括所有項目的檢測方法和接受標準。確認結果應如實填寫，準確完整記錄在確認

9、報告中。5.8 理化檢驗方法確認的分析項目原料藥理化檢驗方法確認的項目項目內(nèi)容鑒別有關物質(zhì)檢查含量測定滴定法HPLC準確度精密度視情況而定視情況而定視情況而定專屬性視情況而定+視情況而定檢測限定量限+制劑理化檢驗方法確認的項目項目內(nèi)容鑒別檢查（不溶性微粒檢查、含量均勻度、溶出度檢查）雜質(zhì)（有關物質(zhì)、殘留溶劑）含量測定準確度視情況而定視情況而定視情況而定精密度+專屬性+檢測限定量限視情況而定+注：以上表中列舉了在不同類型的檢驗方法確認中被認為是最重要的項目，“”表示通常不需要確認的項目；“+”表示通常需要確認的項目；如遇特殊情況，仍應根據(jù)具體分析對象和情況而定。5.9 理化檢驗方法驗證各分析項目

10、的內(nèi)容描述5.9.1 準確度：用于定量測定的分析方法均需做準確度驗證。準確度一般用回收率表示，應在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。5.9.1.1 可用已知純度的做加樣回收測定，即于已知被測成分含量的供試品中再加入一定量的已知純度的被測成分對照品，依法測定。用實際值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計算回收率。 公式中：A表示供試品所含被測成分量，一般是采用重復性結果的均值。B表示加入對照品量 C表示實測值5.9.1.2 數(shù)據(jù)要求：a）在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個測定結果進行評價，加入的的量與所取供試品含量之比控制在1：1左右；b）或設計3不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液進行測定，用

11、9個測定結果進行評價，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在1：1左右。5.9.1.3 記錄結果：應報告供試品取樣量、供試品中含有量、對照品加入量、測定結果和回收率（%）計算值，以及回收率（%）的相對平均偏差（RSD%）。5.9.2 精密度：5.9.2.1 精密度包括重復性、中間精密度和重現(xiàn)性。一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差來表示。5.9.2.2 重復性：在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個測定結果進行評價；或者設計3不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液進行測定,用9個測定結果進行評價。5.9.2.3 中間精密度：是同一實驗室的變化（通常是不同日期，不同分析人員、不同的設備

12、等），測定結果之間的精密度。如果進行重現(xiàn)性評價，中間精密度就不需要了。5.9.2.4 重現(xiàn)性：不同實驗室、不同分析人員檢驗相同產(chǎn)品的結果應平行，樣品批數(shù)至少是3批。5.9.3 專屬性：5.9.3.1 應該在鑒別試驗，限度檢查、含量測定等方法均應考察其專屬性。5.9.3.2 鑒別試驗：以不含被測成分的供試品（除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬方），不得干擾測定，以說明方法的專屬性。應附加相應的代表性圖像或圖譜。5.9.3.3 含量測定和限量檢查：以不含被測成分的供試品（除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬方），不得干擾測定，以說明方法的專屬性。色譜法、光譜法等應附代表性圖譜，并表明相關成分

13、在圖中的位置，色譜中的分離度應符合要求。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進行峰純度檢查。5.9.4 檢測限：確定檢測限的常用方法如下：5.9.4.1 直觀法：用一系列已知濃度的供試品進行分析，試驗出能被可靠的檢測的最低濃度或量。5.9.4.2 信噪比法：僅適用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度供試品的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1或2：1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。根據(jù)響應值的標準差和斜率：檢測限度其中S：校正曲線的斜率，S值是被分析物的校正曲線的斜率。：響應值的標準差，值可根據(jù)空白的標準差：通過分析11份空白樣

14、品的分析，測出分析背景響應值的大小，然后計算這些響應值的標準偏差。5.9.4.3 數(shù)據(jù)要求：應附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結果。5.9.5 定量限：確定檢測限的常用方法如下：5.9.5.1 信噪比法：僅適用于能顯示基線噪音的分析方法。一般以信噪比為10：1時相應濃度或注入儀器的量確定定量限。根據(jù)響應值的標準差和斜率：定量限度。S：校正曲線的斜率 ：響應值的標準差S值是被分析物的校正曲線的斜率。值可根據(jù)空白的標準差：通過分析11份空白樣品的分析，測出分析背景響應值的大小，然后計算這些響應值的標準偏差。5.9.5.2 數(shù)據(jù)要求：應附測試圖譜，說明測試過程和定量限結果。5.9.6 線性：5.9.

15、6.1 可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試品的方法進行測定，至少制備6個濃度的供試品。5.9.6.2 以測得的相應信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。數(shù)據(jù)要求：應列出回歸方程、相關系數(shù)和線性圖。5.9.7 范圍：應依據(jù)分析方法的具體應用和線性、準確度、精密度結果及要求確定。無特殊要求時，通常采用以下標準。5.9.7.1 原料藥和制劑的含量測定，范圍應為測試濃度的80%120%。5.9.7.2 制劑含量均勻度檢查，范圍應為測試濃度70%130%，根據(jù)劑型特點，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當放寬。5.9.7.3 溶出度應為測試或釋放度的溶出量

16、測定，范圍應為限度的20%；如果規(guī)定了限度范圍，則應為下限的20%至上限的+20%。5.9.7.4 如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時測定，用面積歸一化法，則線性范圍應為雜質(zhì)規(guī)定限度的20%至含量限度（或上限）的+20%。5.9.7.5 雜質(zhì)測定，范圍應根據(jù)初步實測，擬定出規(guī)定的限度的+20%。5.9.7.6 對于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應大于限定含量的區(qū)間。5.9.8 耐用性：試驗說明小的變動能否通過設計的系統(tǒng)適用性試驗，以確保方法有效。如果測試條件要求苛刻，則應在方法中寫明。5.9.8.1 液相色譜法中變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時間，流動相的組成比例或pH值，不

17、同廠牌或批號的同類型色譜柱，柱溫，流速及檢測波長等。5.9.8.2 氣相色譜法變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時間，不同廠牌或批號的同類型色譜柱，柱溫，固定相，不同類型的擔體，柱溫，進樣口和檢測器溫度等。5.9.8.3 薄層色譜的變動因素有：不同廠牌的薄層板，點樣方式及薄層展開時溫度及相對濕度等。5.10 微生物檢驗方法驗證的內(nèi)容計數(shù)方法的驗證：細菌、霉菌和酵母菌的定量檢測5.10.1 各試驗組制備方法：5.10.1.1試驗組：a） 平皿法計數(shù)時，取試驗可能用的最低稀釋級供試液1ml 和50100cfu 試驗菌，按平皿法測定其菌數(shù)。b）薄膜過濾法計數(shù)時，取規(guī)定量試驗可能用的最低稀釋

18、級供試液，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50100cfu 試驗菌，過濾，按薄膜過濾法測定其菌數(shù)。5.10.1.2 菌液組：測定所加的試驗菌數(shù)，菌液含量在50100cfu。5.10.1.3 供試品對照組：取規(guī)定量供試液，按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)，供試品對照組含菌量不能超過10 cfu/ml。5.10.1.4 稀釋劑對照組：若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗時，可用相應的稀釋液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml 供試液含50100cfu，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定

19、其菌數(shù)。5.10.2 計數(shù)方法檢測：計數(shù)方法包括平皿法、薄膜過濾法、培養(yǎng)基稀釋法及中和法。驗證試驗至少應進行3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。菌液回收率%=5.10.3 結果判斷：在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率（稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應均不低于70%。若試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數(shù)減去供試品對照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）均不低于70%，照該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌數(shù)，驗證通過；若任一次試驗中試驗組的菌回收率低于70%，應采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和

20、法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進行方法驗證。5.10.4 報告：供試品制備方法、菌液組平均菌落數(shù)、供試品中菌液加入量、試驗組的平均菌落數(shù)、供試品對照組平均菌落數(shù)、測定結果和菌液回收率（%）計。5.11 控制菌檢查方法的驗證：5.11.1 依各品種項下微生物限度標準中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應驗證的菌株。驗證大腸菌群檢查法時，應采用大腸埃希菌作為驗證菌株。5.11.2 驗證方法：5.11.2.1 取規(guī)定量供試液及10100cfu試驗菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應控制菌檢查法進行下一步生化反應等檢查。5.11.2.2 當采用薄膜過濾法時，取規(guī)定量供試液，過濾，沖洗，試驗菌應加在最后一次沖洗液中，過濾后，注入增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中，依相應控制菌檢查法進行下一步生化反應等檢查。5.11.2.3 驗證中設陰性對照和陽性對照。5.11.3