液相維護(hù)論壇資料

1、樣品處理時(shí)用95乙醇處理的，對(duì)照用色譜級(jí)乙醇配制的。因含量低復(fù)測(cè)，乙醇不夠，換了另一個(gè)廠家的，結(jié)果比原來的高2個(gè)百分點(diǎn)，排除對(duì)照誤差，排除系統(tǒng)誤差（重現(xiàn)性很好），稱量也在范圍內(nèi)，只有溶劑有差別，紫外掃了一下發(fā)現(xiàn)卻是有差別，含量低的，用的乙醇247nm吸收值為0.1多點(diǎn)，含量高的用的乙醇吸收值在0.05，跟色譜級(jí)的乙醇差不多。而且200-300nm的出峰情況也不一樣。后者跟色譜級(jí)的乙醇差不多（即做出來含量高的使用的乙醇）。我的疑問是1,溶劑有吸收對(duì)樣品的影響應(yīng)該是疊加還是消減?2,是溶劑在工作波長下有吸收，還是是溶劑本身帶入的雜質(zhì)對(duì)樣品影響的？【第二屆網(wǎng)絡(luò)原創(chuàng)參賽作品】HPLC維護(hù)全篇第一篇 基

2、礎(chǔ)篇液相色譜使用及維護(hù)相關(guān)知識(shí)HPLC系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成.有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、柱溫控制器等。一、輸液泵1.泵的構(gòu)造及原理目前高效液相輸液泵多用柱塞往復(fù)泵，一般都采用雙泵補(bǔ)償法。如圖所示： 泵1的缸體容量是泵2的兩倍，兩者的柱塞運(yùn)動(dòng)方向相反。泵1吸液時(shí)，泵2排液；泵1排液時(shí)，泵2吸取泵1輸出量的1/2，這樣往復(fù)運(yùn)動(dòng)，保證輸液的連續(xù)性。2.泵的使用及維護(hù)注意事項(xiàng)泵使用時(shí)要注意：a.防止固體微粒進(jìn)入泵體，泵的入口都連接有砂濾片（或棒），濾器要經(jīng)常清洗或更換。b.流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停

3、泵過夜或更長時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，會(huì)增加泵頭內(nèi)的寶石活塞桿和活塞的磨損。c.泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。d.流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性，如果有大量氣泡，泵就無法正常工作。泵的一般故障排除：a.沒有流動(dòng)相流出，又無壓力指示。原因可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時(shí)可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如3ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個(gè)針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。b.壓力和流量不穩(wěn)。原

4、因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯?，這時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。二進(jìn)樣器HPLC進(jìn)樣方式可分為：隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。1隔膜進(jìn)樣。用微量注射器將樣品注入專門設(shè)計(jì)的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi)，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心，死體積幾乎等于零，可以獲得最佳的柱效，且價(jià)格便宜，操作方便。但不能在高壓下使用（如10MPa以上）；此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng)，使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到12

5、%。2停流進(jìn)樣?？杀苊庠诟邏合逻M(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新啟動(dòng)時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)鬼峰；另一缺點(diǎn)是保留時(shí)間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號(hào)控制餾分收集的制備色譜中，效果較好。3閥進(jìn)樣。一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥 。 六通閥的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%（最多75），并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量一般定量環(huán)體積的35倍，這樣才能完全置換定量環(huán)內(nèi)的流動(dòng)相，消除管壁效應(yīng)，確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。六通閥使用和維護(hù)：樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45m濾膜過濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留

6、在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。三.色譜柱柱的使用和維護(hù):避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行。應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑直接改變?yōu)樗唷Ｒ话阏f來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

7、選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱與預(yù)柱填料相似。經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積至少應(yīng)是柱體積的5倍以上。四.檢測(cè)器UV檢測(cè)器是HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器，主要性能指標(biāo): 1）噪音和漂移：在儀器穩(wěn)定之后，記錄基線1小時(shí)，基線帶寬為噪音，基線在1小時(shí)內(nèi)的變化為漂移。它們反映檢測(cè)器電子元件的穩(wěn)定性，及其受溫度和電源變化的影響，如果有流動(dòng)相從色譜柱流入檢測(cè)器，那么它們還反映流速（泵的脈動(dòng)）和溶劑（純度、含有氣泡、固定相流失）的影響。2）靈敏度(

8、sensitivity)：表示一定量的樣品物質(zhì)通過檢測(cè)器時(shí)所給出的信號(hào)大小。3）檢測(cè)限.檢測(cè)器靈敏度的高低，并不等于它檢測(cè)最小樣品量或最低樣品濃度能力的高低，因?yàn)樵诙x靈敏度時(shí)，沒有考慮噪聲的大小，而檢測(cè)限與噪聲的大小是直接有關(guān)的。檢測(cè)限是檢測(cè)器的一個(gè)主要性能指標(biāo)，其數(shù)值越小，檢測(cè)器性能越好。檢測(cè)器的故障及排除1）流動(dòng)池內(nèi)有氣泡如果有氣泡連續(xù)不斷地通過流動(dòng)池，將使噪音增大，如果氣泡較大，則會(huì)在基線上出現(xiàn)許多線狀峰，這是由于系統(tǒng)內(nèi)有氣泡，需要對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行充分的除氣。2）流動(dòng)池被污染無論參比池或樣品池被污染，都可能產(chǎn)生噪音或基線漂移。可以使用適當(dāng)溶劑清洗檢測(cè)池，要注意溶劑的互溶性；如果污染嚴(yán)重，就

9、需要依次采用1mol/L硝酸、水和新鮮溶劑沖洗，或者取出池體進(jìn)行清洗。檢測(cè)器對(duì)溫度有一定的敏感度。紫外檢測(cè)器一般在溫度波動(dòng)超過0.5時(shí)，就會(huì)造成基線漂移起伏。流動(dòng)相：理想的液相色譜流動(dòng)相溶劑應(yīng)具有低粘度、與檢測(cè)器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。反相色譜的流動(dòng)相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇、乙腈、四氫呋喃等。極性調(diào)整劑的性質(zhì)及其所占比例對(duì)溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影響。一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求，且流動(dòng)相粘度小、價(jià)格低，是反相色譜最常用的流動(dòng)相。但現(xiàn)在多采用乙腈-水系統(tǒng)做初始實(shí)驗(yàn)，因?yàn)榕c甲醇相比，乙腈的溶劑強(qiáng)度較高且粘度較小，

10、并可滿足在紫外185205nm處檢測(cè)的要求。溶劑的截止波長：將溶劑裝入1cm的比色皿，以空氣為參比，逐漸降低入射波長，溶劑的吸光度A1時(shí)的波長稱為溶劑的截止波長。也稱極限波長。第二篇 常見問題高效液相色譜儀的幾個(gè)使用問題1. 色譜柱中的流動(dòng)相會(huì)排干嗎？不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過這樣的情形：不慎未及時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會(huì)損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動(dòng)相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì)造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會(huì)將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。相

11、比之下，另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。2. 使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什么問

12、題？如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會(huì)非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無需工具，手?jǐn)Q即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。使用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對(duì)鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會(huì)變脆。另一個(gè)西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會(huì)超過3000psi）。使用PEEK接頭時(shí)則無需擔(dān)心接頭耐溶劑性能，因?yàn)榻宇^幾乎或很少與溶劑直

13、接接觸。但手?jǐn)Q固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時(shí)，可能會(huì)使接頭在管路上滑動(dòng)而產(chǎn)生死體積或漏液。3. 如何預(yù)防液相泵的故障:要保持泵的良好操作性能,必須維護(hù)系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過濾和脫氣.下面列出預(yù)防泵故障的幾項(xiàng)措施:1).用高質(zhì)量試劑和HPLC級(jí)溶劑；2）、過濾流動(dòng)相和溶劑；3）、脫氣；4）、每天開始使用時(shí)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；5）、不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中；6）、定期更換墊圈；7）、需要時(shí)加潤滑油；8）、查閱有關(guān)泵操作手冊(cè)中的其它建議。 處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時(shí)間的重復(fù)性好。在等度洗脫時(shí)壓力波動(dòng)小于

14、2%。梯度洗脫時(shí)壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。 為了使故障發(fā)生后盡快排除，平時(shí)應(yīng)常備密封、單向閥（入口與出口）、泵頭裝置、各式接頭、保險(xiǎn)絲等部件，以及更換工具。第三篇 故障排除HPLC故障及排除方法診狀 可能的原因 解 決 方 法 (一)保留時(shí)間變化1.柱溫變化柱恒溫2.等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱3.緩沖液容量不夠用25mmol/L的緩沖液4.柱污染每天沖洗柱5.柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相6.柱快達(dá)到壽命采用保護(hù)柱(二)保留時(shí)間縮短1.流速增加檢查泵,重新設(shè)定流速2.樣品超載降低樣品量3.鍵合相流失流動(dòng)相PH值保持在37.5檢查柱的方向4.流動(dòng)相組成變化防止

15、流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀5.溫度增加柱恒溫(三)保留時(shí)間延長1.流速下降管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱3.鍵合相流失同前(二)34.流動(dòng)相組成變化同前(二)45.溫度降低同前(二)5(四) 出現(xiàn)肩峰或分叉1.樣品體積過大用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%2.樣品溶劑過強(qiáng)采用較弱的樣品溶劑3.柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品5.進(jìn)樣器損壞更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子(五)鬼峰1.進(jìn)樣閥殘余峰每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗2.樣品中未知物處理樣品3.

16、柱未平衡重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)每天新配,用抗氧化劑5.水污染(反相)通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水(六) 基線噪聲1.氣泡(尖銳峰)流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓2.污染(隨機(jī)噪聲)清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲更換氘燈4.電干擾(偶然噪聲)采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)5.檢測(cè)器中有氣泡流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓(七)峰拖尾1.柱超載降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相2.峰干擾清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相3.硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品4.同前

17、(四)4同前(四)45.同前(四)35.同前(四)36.死體積或柱外體積過大連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管7.柱效下降用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱(八)峰展寬1.進(jìn)樣體積過大同(四)12.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過大設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%5.流動(dòng)相粘度過高增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相6.檢測(cè)池體積過大用小體積池,卸下熱交換器7.保留時(shí)間過長等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫8.柱外體積過大將連接管徑和連接管長度降至最小9.樣品過載進(jìn)小濃度小體積樣品

18、第四篇 壓力異常解決壓 力 異 常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。A、 沒有壓力顯示，沒有流動(dòng)相流動(dòng)原 因解決方法1、電源問題1、接通電源，開機(jī)2、保險(xiǎn)絲被燒壞2、更換保險(xiǎn)絲3、控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗3、a、采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定b、修理或更換控制器4、柱塞桿折斷4、更換柱塞桿5、泵頭內(nèi)有空氣5、溶劑脫氣、啟動(dòng)泵抽出空氣6、流動(dòng)相不足6、a、補(bǔ)充流動(dòng)相b、更換入口濾頭7、單向閥損壞7、更換單向閥8、漏液8、擰緊或更換手緊接頭B、 流動(dòng)相流動(dòng)正常，但沒有壓力顯示原 因解決方法1、儀表損壞1、更換儀表2、壓力傳感器損壞2、更換壓力傳感器C

19、、 壓力持續(xù)偏高原 因解決方法1、流速設(shè)定過高1、調(diào)整流速設(shè)定2、柱前篩板堵塞2、a、在允許情況下反沖色譜柱b、更換篩板c、更換色譜柱3、流動(dòng)相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相b、沖洗色譜柱4、色譜柱選擇不當(dāng)4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱5、進(jìn)樣閥損壞5、清洗或更換進(jìn)樣閥6、柱溫過低6、提高溫度7、控制器失常7、修理或更換控制器8、保護(hù)柱阻塞8、清洗或更換保護(hù)柱9、在線過濾器阻塞9、清洗或更換在線過濾器D、 壓力持續(xù)偏低原 因解決方法1、流速設(shè)定過低1、調(diào)整流速2、系統(tǒng)漏液2、確定漏液位置并維修3、色譜柱選擇不當(dāng)3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱4、柱溫過高4、降低溫度5、控制器失常5、維修或更換控

20、制器E、 壓力不斷上升原 因解決方法1、見列表C1、見列表CF、 壓力降為零原 因解決方法1、見列表A、B1、見列表A、BG、 壓力不斷下降，但不回零原 因解決方法1、見列表D1、見列表DH、 壓力波動(dòng)原 因解決方法1、泵中有氣體1、a、溶劑脫氣b、從泵中除去氣體2、單向閥損壞2、更換單向閥3、泵密封損壞3、更換泵密封4、脫氣不充分4、a、溶劑脫氣b、改變脫氣方法（使用在線脫氣法等）5、系統(tǒng)漏液5、確定漏液位置并維修6、使用梯度洗脫6、由于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng) 漏 液通?？梢酝ㄟ^擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍

21、微擰緊接頭不能解決漏液的問題，就必須將接頭取下，檢查是否損壞（例如，卡套損壞、密封表面有雜質(zhì)）；損壞的接頭應(yīng)該更換掉。A、 接頭處漏液原 因解決方法1、接頭松動(dòng)1、擰緊2、接頭磨損2、更換3、接頭過緊3、a、擰松，再重新擰緊b、更換4、接頭被污染4、a、拆下清洗b、更換5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件B、 泵漏液原 因解決方法1、單向閥松動(dòng)1、a、擰緊單向閥（不必?cái)Q的過緊）b、更換單向閥2、接頭松動(dòng)2、擰緊接頭（不必?cái)Q的過緊）3、混合器密封損壞3、a、更換混合器密封b、更換混合器4、泵密封損壞4、維修或更換泵密封件5、壓力傳感器損壞5、維修或更換壓力傳感器6、脈沖阻尼器損壞6、更換脈沖阻尼

22、器7、比例閥損壞7、a、檢查隔膜，如果漏液立即更換b、檢查手緊接頭，損壞的立即更換8、放空閥的損壞8、a、擰緊放空閥b、更換放空閥C、 進(jìn)樣閥漏液原 因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥2、定量環(huán)阻塞2、更換定量環(huán)3、進(jìn)樣口密封松動(dòng)3、調(diào)整4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適4、使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針5、廢液管中產(chǎn)生虹吸5、保持廢液管高于廢液液面6、廢液管阻塞6、更換或疏通廢液管D、 色譜柱漏液原 因解決方法1、尾端接頭松動(dòng)1、擰緊接頭2、卡套內(nèi)有填料2、拆下、清洗卡套、重新安裝3、篩板厚度不合適3、使用合適的篩板（參考下表）篩板選擇指導(dǎo)物質(zhì)粒徑篩板孔徑3-4u0.5u5-20u2uE、 檢測(cè)器漏液

23、原 因解決方法1、流通池墊片損壞1、a、避免過大的背景壓力（壓力降）b、更換墊片2、流通池窗破碎2、更換窗口3、手緊接頭漏液3、擰緊或更換4、廢液管阻塞4、更換廢液管5、流通池阻塞5、重新安裝或更換液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。A、 峰拖尾原 因解決方法1、篩板阻塞1、a、反沖色譜柱b、更換進(jìn)口篩板c、更換色譜柱2、色譜柱塌陷2、填充色譜柱3、干擾峰3、a、使用更長的色譜柱b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤4、調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化

24、合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱峰5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)圖5、a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、更改色譜柱B、 峰前延原 因解決方法1、柱溫低1、升高柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑3、樣品過載3、降低樣品含量4、色譜柱損壞4、見A1、A2C、 峰分叉原 因解決方法1、 保護(hù)柱或分析柱污染圖1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧Ｈ绻麊栴}仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。D

25、、 峰變形原 因解決方法1、樣品過載1、減少樣品載量E、 早出的峰變形原 因解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)1、a、減少進(jìn)樣體積b、運(yùn)用低極性樣品溶劑F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因解決方法1、柱外效應(yīng)1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）b、使用小體積的流通池G、 K增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重原 因解決方法1、二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）d、更換一支柱子2、二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）c、加入水（或多官能團(tuán)化合物）d、試用另一種方法3、二級(jí)保留效應(yīng)

26、，離子對(duì)3、加入三乙胺（或堿性樣品）H、 酸性或堿性化合物的峰拖尾原 因解決方法1、緩沖不合適1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液I、 額外的峰原 因解決方法1、樣品中有其他組份1、正常2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、檢查流動(dòng)相是否純凈b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑c、減少進(jìn)樣體積J、 保留時(shí)間波動(dòng)原 因解決方法1、溫控不當(dāng)1、調(diào)好柱溫2、流動(dòng)相組分變化2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）3、色譜柱沒有平衡3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱K、 保留時(shí)間不斷變化原 因解決方法1、流速變化1、重新設(shè)定流

27、速2、泵中有氣泡2、從泵中除去氣泡3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng)3、a、更換合適的流動(dòng)相b、選擇合適的混合流動(dòng)相L、 基線漂移原 因解決方法1、柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。）1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器圖2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。）2、使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）4、檢測(cè)器出口阻塞。（

28、高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。8、使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)

29、整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。10、檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。10、將波長調(diào)整至最大吸收波長處M、 基線噪音（規(guī)則的）原 因解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。2、漏液圖2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、流動(dòng)相混合不完全3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響（柱溫過高，檢測(cè)器未加熱）4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。6、泵振動(dòng)6、

30、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器N、 基線噪音（不規(guī)則的）原 因解決方法1、 漏液圖1、見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動(dòng)相的組成。3、流動(dòng)相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動(dòng)相4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問題4、斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡6、清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、檢測(cè)器燈能量不足8、更換燈9、色譜柱填料

31、流失或阻塞9、更換色譜柱10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置O、 寬峰原 因解決方法1、流動(dòng)相組成變化1、重新制備新的流動(dòng)相2、流動(dòng)相流速太低2、調(diào)節(jié)流速3、漏液（特別是在柱子和檢測(cè)器之間）3、見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。4、檢測(cè)器設(shè)定不正確4、調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響a、柱子過載b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長圖5、a、 小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：1

32、00的比例稀釋樣品b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路d、減少響應(yīng)時(shí)間6、緩沖液濃度太低6、增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效7、更換保護(hù)柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷9、打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果11、柱溫過低11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過7512、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)P、 分離度降低原 因解決方法1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化）1、

33、重新配置流動(dòng)相2、保護(hù)柱或分析柱阻塞圖2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉Ｈ绻麊栴}仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。Q、 所有的峰面積都太小原 因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過高1、減少衰減的設(shè)定2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)3、進(jìn)樣量太少3、增大進(jìn)樣量4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接R、 所有的峰面積都太大原 因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過低1、采取較大的衰減2、進(jìn)樣過多2、減少進(jìn)樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀以下問題在使用進(jìn)樣閥

34、過程中有可能發(fā)生。A、 手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動(dòng)不靈原 因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、 手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難原 因解決方法1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)1、重新安裝2、定量環(huán)阻塞2、清洗或更換定量環(huán)3、進(jìn)樣器污染3、清洗或更換進(jìn)樣器4、管路阻塞4、清洗或更換管路C、 自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動(dòng)原 因解決方法1、無壓力（或電源）1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)3、重新安裝D、 自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問題原 因解決方法1、阻塞1、清洗或更換阻塞部件2、機(jī)械故障2、見隨機(jī)維修手冊(cè)3、控制器故障3、維修或更換控制器由氣味、景象和聲音可以

35、發(fā)現(xiàn)的問題你需要運(yùn)用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。你最好養(yǎng)成習(xí)慣，每天花上幾分鐘運(yùn)用你的感官（除了味覺）來“感覺”你的液相色譜是否存在問題，這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。A、 溶劑的氣味原 因解決方法1、漏液1、見section 32、濺出2、a、檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、 熱氣味原 因解決方法1、儀器過熱1、a、檢查并調(diào)節(jié)通風(fēng)設(shè)施b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定c、關(guān)掉儀器，查找維修手冊(cè)C、 讀數(shù)不正常原 因解決方法1、壓力不正常1、見section 22、柱溫箱問題2、a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定b、

36、參照用戶手冊(cè)3、檢測(cè)器燈失效3、更換燈D、 燈警告原 因解決方法1、壓力超出極限值1、a、檢查是否阻塞b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定2、其它警示燈2、見用戶手冊(cè)E、 警告音原 因解決方法1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決2、其它警告音2、見用戶手冊(cè)F、 刺耳的短音或長音原 因解決方法1、軸承失效1、見用戶手冊(cè)2、潤滑不夠2、進(jìn)行恰當(dāng)?shù)臐櫥?、機(jī)械故障3、見用戶手冊(cè)常見故障及日常維護(hù)下表中列出了液相色譜常見的一些問題，右側(cè)中則列出的日常維護(hù)的方法可以減少問題出現(xiàn)的頻率。括號(hào)中的數(shù)字是建議進(jìn)行維護(hù)的時(shí)間間隔。用戶手冊(cè)則提供您更多的維護(hù)方法。溶劑瓶問 題維 護(hù)1、進(jìn)口篩板阻塞1、a、更換（3-6個(gè)月）b、

37、過濾流動(dòng)相，0.5u濾膜2、氣泡2、流動(dòng)相脫氣泵問 題維 護(hù)1、氣泡1、流動(dòng)相脫氣2、泵密封損壞2、更換（3個(gè)月）3、單向閥損壞3、過濾流動(dòng)相，運(yùn)用在線過濾，準(zhǔn)備備用單向閥進(jìn)樣閥問 題維 護(hù)1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、a、不要擰的過緊b、過濾樣品 第五篇 常見問題解決 關(guān)于HPLC的常見問題及解答一、問:用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？答:關(guān)于漂移問題：1 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定2 流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等3 柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長時(shí)間的平衡關(guān)于快速變化問題1 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)

38、定流速，使之保持穩(wěn)定2 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。3 流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合二、問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？答: 1 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。2 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子三、問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法答: 1 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量2 樣品未從柱子中流出。可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子3 樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測(cè)器4 檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。5 檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決

39、辦法為降低時(shí)間參數(shù)6 檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。7 檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。8 記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。9 流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。10 檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。四、問：做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？答：原因可能有：1 泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理；2 比例閥失效，更換比例閥即可；3 泵密封墊損壞，更換密封墊即可；4 溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；5 系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；6 梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。五、問：我購買的

40、HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過高，請(qǐng)問為什么？答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。1 拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；2 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；3 將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；4 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。 一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne 7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。第六篇 清洗總結(jié)HPLC系統(tǒng)的酸清洗和鈍化30磷酸水溶液通過酸反應(yīng)和強(qiáng)表面活性劑洗滌劑的共同作用，可以有效地清潔不銹鋼及其它潤濕的部件。這一方法比更常用的硝酸“鈍化”絕對(duì)更有效、且較少損害(特別是對(duì)日