纖維素CMC酶、FPA酶和半纖維素酶測定

1、纖維素CMC酶、FPA酶和半纖維素酶測定1. 纖維素CMC酶1.0標題用3.5 一二硝基水楊酸法測定纖維素CMC酶活性單位。2.0范圍生產(chǎn)分析和質量控制部門適用。3.0原理纖維素CMCB（ EC3.2.1.4 ）水解羧基纖維素分子中 3 - 1.4葡萄糖苷鍵，釋放岀的還原糖（以 葡萄糖計）與3.5二硝基水楊酸（DNS）反應，產(chǎn)生顏色變化，這種顏色變化與釋放還原糖 （以葡萄糖 計）的量成正比關系，即與酶樣品中的酶活性成正比。通過在550nm的光吸收值查對標準曲線 （以葡萄糖為標準物）可以確定還原糖產(chǎn)生的量，從而確定岀酶的活力單位。4.0試劑4.1無水醋酸鈉（分析純）4.2冰醋酸（分析純）4.3

2、3.5二硝基水楊酸4.4無水葡萄糖4.5四水酒石酸鉀鈉（分析純）4.6氫氧化鈉（分析純）4.7重蒸苯酚（分析純）4.8無水亞硫酸鈉（分析純）4.9疊氮化鈉（分析純）4.10羧甲基纖維素鈉5.0儀器5.1水浴鍋（恒溫）50 士 1C5.2電熱干燥箱80士 1C5.3 722型分光光度機計5.4分析天平感量 0.1 mg5.5 一級玻璃制品5.6電冰箱6. 0試劑的準備6. 1乙酸乙酸鈉緩沖溶液（PH=4.8）溶液A:量取冰醋酸6ml，定容至1000ml，制成0.1M醋酸鈉溶液。溶液B:稱取8.2g醋酸鈉，溶解后容至1000ml，制成0.1M醋酸鈉溶液。以A: B=4: 6的比例混合，低溫冷藏備用

3、。6.2 DNS 試劑：溶液A:稱分析純NaOH 104g溶于1300ml水中，加入30g分析純3.5 一二硝基水楊酸。溶液B:稱分析純酒石酸鉀鈉 910g，溶于2500ml熱水中，再稱取25g重蒸苯酚和25g無水亞硫酸鈉 加入酒石酸鉀鈉溶液。將A、B溶液混合，定容至5000ml，貯存于棕色瓶中，暗處放置一星期后可使用。6.3 CMC溶液：用羧甲基纖維素鈉（ CMC以PH4.8醋酸緩沖液配成1%的溶液。7. 0標準曲線制作：7.1無水葡萄糖80C烘干至恒重。7.2準確稱取1.000g溶于1000ml水中，加10mg疊氮化鈉防腐，4C冷藏備用。7.3標準葡萄糖曲線制作取 1mg/ml 標準葡萄糖

4、液各 0, 0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml補加水至 2.0ml,加入 2.0mlDNS 試劑，具塞，沸水浴中加熱10分鐘，冷卻后定容至15ml,分光光度計550nm波長下測OD直,3次重復實 驗的均值用最小乘法相擬合 Y=ax+b 元線性方程。由光密度值引得 葡萄糖量。8.0 CMC酶活性測定。8.1活性定義：1g酶粉（1ml酶液）于50C PH4.8條件下，每分鐘水解1%CM溶液產(chǎn)生1池 還原糖（以葡萄糖 計）的酶量定義為1個CMC酶活力單位。8.2分析程序：取三支15ml刻度試管分別加入 0.2ml稀釋酶液，在分別吸取 1.8mlCMC溶液,50 C水浴保溫30 分鐘，

5、空白樣用0.2ml稀釋酶液，加入1.8ml醋酸緩沖液，同樣50C水浴30分鐘，再吸取DNS2m搖勻 后，具塞，沸水浴反應10分鐘，冷卻后，補加水至15ml,輕輕上下?lián)u勻，用空白調(diào)零點，于550nm下測 OD值。9.0計算活力單位AX DX 5X 1000CMC酶活力=卩/g（ml）30A: OD值在標準曲線上對應的葡萄糖量（）D:酶粉（液）稀釋倍數(shù)2.FPA 酶FPA酶水解濾紙中的纖維素,即濾紙酶，即以濾紙作為底物，因濾紙中的纖維素含量較高, 釋放岀的還原糖與3.5-乙硝基水揚酸（DNS反應，產(chǎn)生顏色變化，這種顏色變化與釋放的還原550N M的光吸收值查對標準曲線，可 纖維素酶活的一個重要指標

6、。糖量成正比關系，即與酶樣品的酶活性成正比關系。通過在 以確定還原糖產(chǎn)生的量，從而確定酶活力單位，它也是恒量3.半纖維素酶：1.0標題用3.5 一二硝基水楊酸測定半 纖維素酶 活性單位2.0范圍生產(chǎn)分析和質量控制部門適用3.0原理半纖維素酶水解木聚糖，釋放岀的還原糖（以木糖計）與3.5 一二硝基水楊酸（DNS反應，產(chǎn)生顏色變化，這種顏色變化與釋放的還原性糖（以木糖計）的量成正比關系，即與酶樣品中的酶活性成正比。通過在 550nm的光吸收值查對標準曲線（以木糖為標準物）可以確定還原糖產(chǎn)生 的量，從而確定岀酶的活力單位。4.0單位定義一個半纖維素酶 單位定義為；1g酶粉（或1ml酶液）于50C P

7、H4.8條件下，每分鐘分解1%木聚糖溶液產(chǎn)生一微克還原糖（以木糖）的酶量定義為一個半纖維素酶活力單位。5.0試劑5.1無水醋酸鈉（分析純）5.2冰醋酸（分析純）5.3 3.5 二硝基水楊酸（分析純）5.4木糖（分析純）5.5四水酒石酸鉀鈉（分析純）5.6氫氧化鈉（分析純）5.7重蒸苯酚（分析純）5.8無水亞硫酸鈉（分析純）5.9疊氮化鈉（分析純）5.10木聚糖（分析純）6.0儀器6.1水浴鍋（恒溫）50 1C6.2電熱干燥箱80士 1C6.3 772型分光光度計6.4分析天平感量 0.16.5 一級玻璃制品6.6電冰箱7.0試劑的制備：7.1乙酸乙酸鈉緩沖溶液（PH=4.8）溶液A:量取冰醋酸

8、 6ml，定容至1000ml配成0.1MNaNC溶液。溶液B:稱取8.2gNaAC,溶解后容至1000ml，制成0.1MNaAC溶液。使用溶液以A: B=4: 6的比例混合，低溫冷藏備用。7.2 DNS試劑溶液A:稱分析純NaoH104g,溶于1300ml水中，加入30g分析純3.5 一二硝基水楊酸。B:稱分析 純酒石酸鉀鈉910g溶于2500ml水中，再稱取25g重蒸苯酚和25g無水亞硫酸鉀鈉加入酒石酸鉀鈉 溶液，將A、B溶液混合加入1200ml中，儲存于棕色瓶中，暗處放置一星期后可使用。7.3木聚糖溶液：用木聚糖以PH4.8醋酸緩沖液配成1%溶液。8.0標準曲線制作：8.1木糖80 C烘干

9、至恒重。8.2標準稱取1.000g木糖以溶于1000ml水中，加10ml疊氮化鈉防腐，4C冷藏備用。8.3標準木糖曲線制作取 1mg/ml 標準木糖液各 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 補加水至 2.0ml，加入 2.0mlDNS 試劑，具塞、沸水浴中加熱10分鐘，冷卻后定容至15ml，分光光度計550nm波長下測OD值，3次 重復試驗的均值用最小二乘法相擬合Y=ax+b 元線性方程，由光密度值引得木糖量。9.0半纖維素酶 活性測定；15ml刻度試管中加入稀釋酶液 0.2ml （三支平行樣），再各吸取1.8ml1%的木聚糖溶液，搖勻， 50C水溶60分鐘，取岀后，再吸取 2mlDNS試劑搖勻，具塞，立即沸水浴反應 10分鐘，冷卻后， 補加水定容到15ml，輕輕上下?lián)u勻