免疫SOP：CA 15-3作業(yè)指導(dǎo)書

1、44文件編號(hào)：LABOPMY020第 頁(yè)，共 頁(yè) 版本：A/0生效日期：2008-02-01 Elecsys E 170/E 411糖類抗原15-3(CA 15-3)XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書 糖1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個(gè)過(guò)程18分鐘完成。 第1步：20l儀器自動(dòng)使用通用稀釋液預(yù)稀釋1：10的標(biāo)本、生物素化的抗CA 15-3特異性的單克隆抗體和釕（Ru）標(biāo)記的抗 CA 15-3特異性的單克隆抗體混勻，形成夾心復(fù)合物。 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過(guò)生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測(cè)量池中，微粒通過(guò)磁鐵

2、吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。儀器通過(guò)2點(diǎn)定標(biāo)曲線以及試劑條碼提供的母定標(biāo)曲線計(jì)算出結(jié)果。2. 標(biāo)本要求血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集。血漿：肝素鈉、鋰、銨和EDTA-K3抗凝。使用檸檬酸鈉結(jié)果會(huì)比使用以上抗凝劑低24。標(biāo)本在28度可穩(wěn)定5天，-20oC可穩(wěn)定3個(gè)月。不要使用加熱滅活的標(biāo)本。標(biāo)本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標(biāo)本、定標(biāo)液和質(zhì)控品在測(cè)定前應(yīng)預(yù)溫到室溫。3. 試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M： 鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml。含防腐劑。R1：生物素化的抗C

3、A 15-3單克隆抗體（灰蓋），1瓶，10ml，1.75mg/l，磷酸緩沖液20mmol/l，Ph 6.0；含防腐劑。R2：Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗CA 15-3單克隆抗體（黑蓋），1瓶，10ml。濃度10mg/l，磷酸緩沖液100mmol/l，pH 7.0含防腐劑。校準(zhǔn)品：Cal 1 陰性定標(biāo)液（白蓋），2瓶，1ml/瓶Cal 2 陽(yáng)性定標(biāo)液（黑蓋），2瓶，1ml/瓶?jī)蓚€(gè)定標(biāo)品的CA 15-3的濃度范圍約為15U/ml和100U/ml，以人血清為基質(zhì)。質(zhì)控品：Elecsys 腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）貨號(hào)11776452其他所需材料：E

4、lecsys E170/E411分析儀Elecsys 通用稀釋液貨號(hào)11732277 Elecsys E411分析儀 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell）貨號(hào)11662988 Elecsys 測(cè)量池清洗液（CleanCell）貨號(hào)11662970 Elecsys 添加劑液（SysWash）貨號(hào)11930346Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）貨號(hào)11298500 Elecsys 適配器 （Adapter for SysClean），貨號(hào)11933159, Elecsys 反應(yīng)杯（CUP），貨號(hào)11706829 Elecsys 加樣頭（TIP），貨號(hào)11706802 Elec

5、sys E170分析儀 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell）貨號(hào)04880340 Elecsys 測(cè)量池清洗液（CleanCell）貨號(hào)04880293 Elecsys 試劑針清洗液（ProbeWash）貨號(hào)03005712Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）貨號(hào)11298500 Elecsys PC/CC杯,貨號(hào)03023141 Elecsys 反應(yīng)杯/加針頭/廢物袋（CUP/TIP），貨號(hào)12102137 Elecsys 系統(tǒng)清洗適配器（SysClean Adapter M），貨號(hào)030276514. 儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)Elecsys 2010/E

6、170/E 411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀儀器校準(zhǔn)：每批 CA 15-3試劑盒必須用新鮮試劑和CA 15-3 Cal 1, Cal 2定標(biāo)一次。另外，以下情況需要再次定標(biāo)：Elecsys E170分析儀： 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒）各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進(jìn)行定標(biāo)：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)。5. 操作步驟（以E 170為例）5.1 校準(zhǔn)操作步驟：在編緝各項(xiàng)目的參數(shù)時(shí)，已經(jīng)在ApplicationCalib菜單中定義好了定標(biāo)類型和幾點(diǎn)定標(biāo)。因此在對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)時(shí)，只需在定標(biāo)菜單Calibration中進(jìn)行即可。進(jìn)入CalibrationStatus菜單，用

7、鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的項(xiàng)目，再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)（BLANK鍵）或兩點(diǎn)定標(biāo)（TWO POINT鍵）、全點(diǎn)定標(biāo)（FULL鍵），再選擇其它項(xiàng)目進(jìn)行相應(yīng)選擇，最后點(diǎn)SAVE，將定標(biāo)物放入在CalibrationCalibrator中定義好的位置，點(diǎn)Start，再點(diǎn)Start，儀器開始定標(biāo)。 在CalibrationStatus菜單中看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Calibration Result鍵看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Reaction Monitor鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反應(yīng)曲線。5.2 樣本檢測(cè)程序： 單個(gè)樣本輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所

8、需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)SAVE鍵，樣本號(hào)自動(dòng)累加。批量常規(guī)標(biāo)本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入起始標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)REPEAT，輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào)，點(diǎn)OK即可。進(jìn)樣分析，將標(biāo)本按在Workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好，放入進(jìn)樣盤內(nèi),按START鍵，輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào)，再點(diǎn)START鍵，儀器自動(dòng)開始推架檢測(cè)標(biāo)本。6. 質(zhì)量控制用Elecsys腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小

9、時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計(jì)算方法儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算標(biāo)本的濃度（U/ml或者kU/l）。8. 參考范圍在美國(guó)、西班牙和德國(guó)多個(gè)臨床中心的檢測(cè)結(jié)果如下：健康人群：272例健康人群中95的范圍25U/ml。9. 分析性能9.1精密度10. 干擾因素 該方法不受黃疸（膽紅素65mg/dl）、溶血（血紅蛋白3.0g/dl）、脂血（脂質(zhì)1500mg/dl）和生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時(shí)后才能采血。不受類風(fēng)濕因子干擾（1500U/ml）。28種常用藥物經(jīng)試驗(yàn)對(duì)本測(cè)定

10、無(wú)干擾。CA 15-3濃度高達(dá)20000U/ml也不出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。接受過(guò)小鼠單抗治療或體內(nèi)診斷的病人可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。Elecsys CA 15-3 II測(cè)定結(jié)果應(yīng)結(jié)合病人病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來(lái)進(jìn)行診斷。11. 臨床意義 CA15-3測(cè)定值由夾心法中所用的二種單克隆抗體（MAb）115D8和DF3決定。115D8特異性針對(duì)人乳脂球膜，而DF3特異性針對(duì)人轉(zhuǎn)移性乳腺癌的膜提取成份。能與115D8和DF3反應(yīng)的決定簇存在于一種稱為MAM-6的糖蛋白分子上，該種抗原屬于唾液酸化的糖蛋白亞類，又稱多態(tài)性上皮粘蛋白(PEM)。正常情況下，PEM只存在于腺體細(xì)胞腔的分泌物中，不出現(xiàn)在血循環(huán)中。

11、當(dāng)細(xì)胞惡變時(shí)，基底細(xì)胞膜滲透性增強(qiáng)，PEM可在血清中由CA15-3方法檢測(cè)出來(lái)。12參考文獻(xiàn)1. Hilkens J, et al. Monoclonal antibodies against human milkfat globule membranes detecting differentiation antigens of the mammary gland. Prot Biol Fluids 1982;29:813-816.2. Hilkens J, et al. Monoclonal antibodies against human milkfat globule membrane

12、s detecting differentiation antigens of the mammary gland and its tumors. Int J Cancer 1984;34:197-206.3. Kufe D, et al. Differential reactivity of a novel monoclonal antibody (DF3) with human malignant versus benign Breast tumor. Hybridoma 3 1984;(3):223-232.4. Sekine H, et al. Purification and characterization of a high molecular weight glycoprotein detectable in human milk and breast carcinomas.J Immunology 1985;135(5):3610-3615.5. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical Variables. Brochure in: Samples: From the Patient to the Lab