最終版PCR SOP體系文件-精編版

1、基因擴增實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件發(fā)放記錄發(fā)放號發(fā)放日期正本副本號發(fā)放專業(yè)組保管人文件修改記錄序號文件名稱頁數(shù)需更改內(nèi)容更改內(nèi)容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期目 錄PCR實驗室各區(qū)工作制度及程序【PCR(N)-SOP-001】1PCR實驗室人員配置及管理【PCR(N)-SOP-002】3PCR實驗室清潔程序【PCR(N)-SOP-003】4PCR實驗室廢棄物處理程序【PCR(N)-SOP-004】5PCR實驗室化學(xué)試劑配制程序【PCR(N)-SOP-005】6PCR實驗室應(yīng)急處理程序【PCR(N)-SOP-006】7PCR實驗室試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-007】9乙型肝炎病毒核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作

2、程序【PCR(N)-SOP-101】11丙型肝炎病毒核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-102】16人巨細胞病毒核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-103】20結(jié)核分枝桿菌核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-104】24人乳頭瘤病毒（6,11型）核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-105】28解脲脲原體核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-106】32肺炎支原體核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-107】36淋球菌核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-108】40沙眼衣原體核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-109】4

3、4單純皰疹病毒型核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-110】48EB病毒核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序【PCR(N)-SOP-111】52乙型肝炎病毒YMDD基因突變檢測操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-112】56ABI7500實時熒光定量PCR儀操作、維護及校準(zhǔn)操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-201】59恒溫金屬浴使用、維護、校準(zhǔn)操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-202】69移液器使用、維護、校準(zhǔn)操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-203】71臺式高速冷凍離心機使用、維護、校準(zhǔn)操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-204】73Thermo Forma 1149 B2生物安全柜操作及維護保養(yǎng)程序【P

4、CR(N)-SOP-205】75移動紫外線消毒車使用、維護、校準(zhǔn)操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-206】77冰箱操作維護規(guī)程【PCR(N)-SOP-207】79溫濕度表校準(zhǔn)程序【PCR(N)-SOP-208】80離心管抑制物質(zhì)檢試驗操作程序【PCR(N)-SOP-209】81離心管爆管試驗操作程序【PCR(N)-SOP-210】82標(biāo)本唯一性編號操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-211】83臨床標(biāo)本采集、接收、拒收操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-212】84臨床標(biāo)本保存操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-213】86室內(nèi)質(zhì)量控制操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-301】87室間質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程【P

5、CR(N)-SOP-302】89PCR室實驗室間比對標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程【PCR(N)-SOP-303】90XXXXXXX醫(yī)院檢驗科PCR實驗室平面圖92XXXXXXX醫(yī)院檢驗科組織結(jié)構(gòu)圖93PCR實驗室各區(qū)工作制度及程序發(fā)布部門:XXXXXX文件編號:PCR(N)-SOP-001分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: XX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXX實施日期: 2012年5月1日1 目的：實現(xiàn)PCR實驗室日常專人負責(zé)，確保實驗室操作的規(guī)范性。2 實驗室分區(qū)設(shè)置2.1.1 本院在檢驗科設(shè)置臨床基因擴增實驗室。2.1.2 按國家衛(wèi)生部醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增管理辦法以及上海市醫(yī)療機構(gòu)臨床基

6、因擴增檢驗技術(shù)審核辦法的要求，從房屋配置、裝修、采光、通風(fēng)、隔離等條件將實驗室設(shè)置分為試劑準(zhǔn)備、貯存區(qū)（第一區(qū)）、標(biāo)本制備區(qū)（第二區(qū)）及擴增和產(chǎn)物分析區(qū)（第三區(qū)）三個獨立區(qū)域。各區(qū)門前有醒目標(biāo)志，每個區(qū)都設(shè)置緩沖區(qū)，用于更換工作服、鞋套及維持空氣流向。進入各個工作區(qū)域工作時，必須嚴(yán)格遵守單一方向順序：即從第一區(qū)的試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)第二區(qū)的標(biāo)本制備區(qū)第三區(qū)的擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。嚴(yán)禁誤入和逆向進入各工作區(qū)。2.1.3 各區(qū)的實驗物品（含移液器、試管架、吸頭盒、記錄本、筆等），不得混用，須貼上不同標(biāo)簽予以區(qū)別。2.1.4 各區(qū)配有不同顏色工作服：第一區(qū)試劑準(zhǔn)備、貯存區(qū)為白色，第二區(qū)標(biāo)本制備區(qū)為藍色，第三

7、區(qū)擴增及產(chǎn)物分析區(qū)為粉紅色。進入各區(qū)實驗室，必須更換本室有顏色標(biāo)識的工作服，帶上手套。3 各分區(qū)工作制度3.1 試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)工作制度3.1.1 本區(qū)只進行如下工作：試劑的制備、分裝和反應(yīng)液的制備及試劑貯存；其它操作不得在此區(qū)進行。3.1.2 實驗人員進入該區(qū)須穿本區(qū)專用藍色工作服。實驗中須戴一次性手套。3.1.3 記錄實驗室溫濕度和冰箱的溫度。3.1.4 根據(jù)當(dāng)天所要檢測標(biāo)本的種類、數(shù)量，取出和配制當(dāng)天實驗所需的試劑，其余試劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。3.1.5 實驗中所使用的離心管、吸頭等需經(jīng)高壓滅菌處理，應(yīng)在消毒有效期內(nèi)使用。3.1.6 試劑準(zhǔn)備工作完成后，將使用過的離心管、吸頭置于盛20

8、00mg/L有效氯消毒液的廢物盒中，消毒清潔實驗臺面。3.1.7 將準(zhǔn)備好的試劑放入一區(qū)到二區(qū)的傳遞窗。（注：傳遞窗的兩扇門不能同時開啟）；3.1.8 其他區(qū)的用品不得帶入本區(qū)。3.1.9 作好每次實驗記錄，書寫工整詳細，使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識的記錄本和筆。3.1.10 實驗完畢打開紫外燈消毒3060分鐘，記錄紫外燈使用情況。3.2 標(biāo)本制備區(qū)工作制度3.2.1 本區(qū)只進行如下工作：臨床標(biāo)本的保存，核酸提取、貯存及加樣至擴增反應(yīng)管，RNA檢測逆轉(zhuǎn)錄（RT）合成cDNA；其它操作不得在此區(qū)進行。3.2.2 實驗人員進入該區(qū)須穿本室專用白色工作服。實驗中須使用一次性手套，手套需常更換。3.2

9、.3 從傳遞窗中取出試劑放入冰箱冷凍室試劑存放專區(qū)暫存。3.2.4 記錄實驗室溫濕度和冰箱的溫度。3.2.5 核對標(biāo)本的編號、類型和標(biāo)本數(shù)量。3.2.6 按操作規(guī)程在生物安全柜內(nèi)進行標(biāo)本的裂解、提取和加樣，加樣后，將其放入二區(qū)到三區(qū)的傳遞窗。（注：傳遞窗的兩扇門不能同時開啟）；3.2.7 使用帶有本室專用標(biāo)志的加樣器以及經(jīng)過消毒處理的離心管和帶濾芯的一次性吸頭。3.2.8 使用過的離心管、吸頭須置于盛有2000mg/L有效氯消毒液的廢物盒中。3.2.9 污染的處理：實驗中若在操作臺面上發(fā)生液體外泄，應(yīng)立即用浸有2000mg/L有效氯溶液的濾紙覆蓋發(fā)生污染處半小時，然后用酒精擦洗，并開啟紫外燈消

10、毒。3.2.10 作好每次實驗記錄，書寫工整詳細，使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識的記錄本和筆。3.2.11 標(biāo)本處理完成后，關(guān)閉所有儀器，記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。3.2.12 其他區(qū)的用品不得帶入本室。3.2.13 實驗完畢要開啟紫外燈消毒3060分鐘，記錄紫外燈使用情況。3.3 擴增及產(chǎn)物分析區(qū)工作制度3.3.1 本區(qū)只進行如下工作：DNA或cDNA的擴增、實時熒光PCR擴增產(chǎn)物的分析、結(jié)果判斷、記錄結(jié)果和生成檢測報告等；其它操作不得在此區(qū)進行。3.3.2 實驗人員進入該區(qū)須穿本區(qū)專用粉紅色工作服。實驗中須使用一次性手套，手套需常更換。3.3.3 記錄實驗室溫濕度。3.3.4 將從傳遞窗接

11、收來的加好樣離心后的反應(yīng)管上機擴增。3.3.5 擴增結(jié)束后，關(guān)掉擴增儀。記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。3.3.6 擴增結(jié)果分析完后，在工作清單中填入檢測結(jié)果。3.3.7 得到當(dāng)天室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果后，輸入質(zhì)控軟件。3.3.8 作好每次實驗記錄，書寫工整詳細，使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識的記錄本和筆。3.3.9 實驗完畢要打開紫外燈消毒3060分鐘，記錄紫外燈使用情況。4 批準(zhǔn)記錄批準(zhǔn)人批準(zhǔn)時間有效期1年；其他：1年；其他：1年；其他：1年；其他：1年；其他：PCR實驗室人員配置及管理發(fā)布部門:XXXXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N)-SOP-002分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編

12、寫者: XX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XX實施日期: 2012年5月1日1 目的：保證實驗室有足夠數(shù)量的合格的具備開展該類實驗?zāi)芰Φ膶嶒炄藛T。2 適用范圍：適用于實驗室人員配置、管理、培訓(xùn)及考核。3 細則：3.1 人員要求3.1.1 本實驗室工作人員應(yīng)為醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，具有初級以上技術(shù)職稱或?qū)？埔陨蠈W(xué)歷。3.1.2 實驗室工作人員應(yīng)參加上海市臨床檢驗中心舉辦的PCR技術(shù)培訓(xùn)，并取得臨床基因擴增檢驗技術(shù)上崗證。3.1.3 對于新進入本室的人員，如尚未取得PCR技術(shù)培訓(xùn)合格證，應(yīng)在實驗室有培訓(xùn)合格證的上級技術(shù)人員的指導(dǎo)下進行實驗工作，實驗報告由有資格人員出具，并應(yīng)盡快取得上崗培訓(xùn)合格證。3

13、.2 人員配置3.2.1 實驗室應(yīng)根據(jù)工作需要配備足夠的工作人員，目前實驗室有主管技師2人、技師3人，5人都已獲得培訓(xùn)合格證，視工作量的增加和業(yè)務(wù)發(fā)展需要，會適當(dāng)增加工作人員。3.2.2 各級技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)。3.3 人員培訓(xùn)及考核3.3.1 實驗室工作人員每12年至少參加1次PCR技術(shù)的省級或國家級繼續(xù)教育項目，參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會議。3.3.2 安排未取得上崗培訓(xùn)合格證的工作人員在合適的時間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。3.3.3 科室每周組織實驗室內(nèi)部實驗人員進行業(yè)務(wù)小講課、PCR實驗室人員每月進行本小組內(nèi)核酸擴增方面的相關(guān)培訓(xùn)，提升自身的理論學(xué)習(xí)水平。3.3.4 本實驗室工作人員每年至少進行

14、考核一次。3.4 人員管理實驗室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學(xué)歷、任職資格、發(fā)表論文、研究成果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件。PCR實驗室清潔程序發(fā)布部門:XXXXXXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N)-SOP-003分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: XXXX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXXX實施日期: 2012年5月1日1 目的：保證實驗室環(huán)境的整潔，防止污染。2 適用范圍：適于實驗室工作環(huán)境、實驗臺面、工作服、移液器等的清潔消毒工作。3 細則：3.1 實驗室地面必須平整、干凈，通道要利于通行，沒有無用的物品阻礙。3.2 合理規(guī)劃實驗室內(nèi)物品，做到擺放整齊、有序，無用的或

15、使用效率低的物品放置到儲存處，常用的物品要容易尋找到。3.3 抽屜、柜子、文件類物品要作好標(biāo)記，以方便識別。3.4 實驗結(jié)束后清潔臺面，并用移動紫外燈進行消毒。3.5 每周對使用過的移液器用75%酒精進行擦拭，若使用過程中發(fā)生污染應(yīng)隨時移液器咀進行75%酒精浸泡15分鐘左右。3.6 實驗過程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用浸有2000mg/L有效氯溶液濾紙蓋上半小時，然后用酒精擦洗，并用移動紫外燈消毒。3.7 每天實驗前開啟各區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)，各區(qū)實驗結(jié)束后，分別打開傳遞窗紫外燈、移動紫外燈（對實驗臺面消毒）、天花板紫外燈消毒實驗室，每次開啟 3060分鐘。3.8 待紫外燈消毒時間足夠后，依次關(guān)閉

16、各區(qū)紫外燈并記錄。3.9 依次清潔三個區(qū)的實驗臺面和地面，各區(qū)清潔消毒工具均專用，不可混用，注意按照單一方向流程的原則來進行清潔。3.10 處理好各區(qū)廢棄物，交醫(yī)院集中處理。3.11 每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實驗區(qū)的工作服隔開洗滌。目的：保證實驗室、實驗人員和外部環(huán)境的安全。適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室常用化學(xué)試劑（NaOH、EDTA、乙醇、生理鹽水等）、實驗室廢棄物的處理；細則：1. 科室職責(zé)應(yīng)對本室工作人員講明本程序在預(yù)防交叉、實驗室污染及切斷傳播途徑中的重要性，并要求嚴(yán)格執(zhí)行。2. 實驗室所有垃圾，裝入專用污物袋內(nèi)，各區(qū)備有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黃色）。3

17、. 使用過的一次性消耗品(如試管、吸頭、離心管、等)，置于盛2000mg/L有效氯消毒液的廢物盒中，使用過的手套、鞋套等直接放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。4. 廢棄標(biāo)本及其容器裝入黃色垃圾袋內(nèi)、封閉，交本科室廢棄物處理室預(yù)處理，然后交醫(yī)院污物處理中心處理。5. 日常生活垃圾如紙屑等按一般垃圾交醫(yī)院處理。PCR實驗室廢棄物處理程序發(fā)布部門:XXXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N)-SOP-004分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: XXX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXX實施日期: 2012年5月1日PCR實驗室化學(xué)試劑配制程序發(fā)布部門:XXXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N

18、)-SOP-005分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: XXXX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXX實施日期: 2012年5月1日目的：保證實驗中用到的各種溶液符合實驗要求。適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室常用溶液：4%NaOH溶液、75%酒精、2000mg/L有效氯溶液等。程序：1 用具：干燥潔凈的250ml量桶一只，三角燒瓶，天平一架，100ml試劑瓶。2 配制步驟：2.1 配制4%NaOH溶液:a) 用天平稱取4克分析純的NaOH固體，置于一只三角燒瓶中。b) 用250ml量桶準(zhǔn)確取100ml水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。c) 搖蕩三角燒瓶使NaOH固體充分溶解。

19、d) 然后緩緩傾倒入100ml試劑瓶中密封保存?zhèn)溆谩?.2 配制2000mg/L有效氯溶液消毒劑: 本室采用片劑配制有效氯溶液，根據(jù)實際配制液體體積加入適當(dāng)數(shù)量片劑。2.3 75%酒精溶液: 由醫(yī)院庫房直接領(lǐng)取。PCR實驗室應(yīng)急處理程序發(fā)布部門:XXXXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N)-SOP-006分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: XXXX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXX實施日期: 2012年5月1日1.目的：在實際工作中，儀器設(shè)備發(fā)生故障、試劑盒發(fā)生質(zhì)量問題時，為保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、及時，應(yīng)正確采取應(yīng)急措施，最大程度上避免或減輕不利影響。2適用范圍：適用于滿足核酸

20、擴增熒光檢測實驗室檢測需要并可能對檢驗結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備和試劑盒。3負責(zé)人： XXXX4細則：41 核酸擴增熒光檢測實驗室工作人員在職責(zé)范圍內(nèi)均有責(zé)任熟悉各種儀器和相關(guān)設(shè)備的性能、要求、維護和保養(yǎng)、常見故障的排除、尤其要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。42 工作人員在職責(zé)范圍內(nèi)均有責(zé)任有意識地注意以求及時發(fā)現(xiàn)并報告儀器設(shè)備和試劑盒的異常情況。43 作為應(yīng)急處理，潛在著一定的可能影響檢測質(zhì)量的不確定因素。室負責(zé)人負責(zé)在第一時間檢查核實應(yīng)急措施的有效性。44 儀器設(shè)備故障441 室負責(zé)人接到異常情況報警后，立即現(xiàn)場確認異常情況的性質(zhì)：觀察有無誤操作、偶發(fā)現(xiàn)象或確屬不能立即排除的故障。442 用紅牌故障標(biāo)

21、志標(biāo)示故障儀器，以防被錯誤使用。443有滿足要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備（準(zhǔn)用儀器）。借用其他部門儀器設(shè)備時，及時聯(lián)系借用并核實該設(shè)備的使用狀態(tài)。替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同時，必須同時滿足實驗室管理措施（特別是防污染）的要求。444不能解決的問題，應(yīng)及時與供應(yīng)方會同解決。根據(jù)雙方合同約定，及時通知供應(yīng)方。供應(yīng)方技術(shù)支持人員將在規(guī)定的時間內(nèi)隨身攜帶備用設(shè)備到達現(xiàn)場。445儀器維修后，必須經(jīng)驗收合格并供需雙方簽字，調(diào)試實驗通過后才能重新啟用。取下紅色故障標(biāo)示（暫停使用），換上綠色正常標(biāo)示（正常使用）。446 室主任須檢查并隨時跟蹤所采取措施的有效性。447對未能及時排除故障時，

22、必須及時上報科室，在科主任批準(zhǔn)下，應(yīng)積極聯(lián)系附近的其他已得到上海市臨檢中心認證的臨床基因擴增檢驗實驗室檢驗，以滿足患者和臨床需求。45 試劑盒質(zhì)量發(fā)生問題，經(jīng)核實后，及時通知供貨商迅速更換另一批次試劑，使用前需先作質(zhì)量檢測，合格后方可使用。46 儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問題不能得到解決，預(yù)期將會影響到檢測報告的及時發(fā)出，可將標(biāo)本送至其它已得到上海市臨檢中心認證的臨床基因擴增檢驗實驗室檢查；如已影響到報告的及時發(fā)出，應(yīng)在門診取報告處向病人公告或向相關(guān)病區(qū)公告，取得病人的諒解。47 影響到檢測報告發(fā)出的情況，應(yīng)在應(yīng)急處理記錄表作記錄。5 相關(guān)表格應(yīng)急處理記錄表，編號PCR(N)-SOP-006-01

23、。PCR實驗室試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序發(fā)布部門:XXXXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N)-SOP-007分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: XXX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXX實施日期: 2012年5月1日1目的：保證每批用于臨床實驗的試劑的質(zhì)量良好，符合要求。2適用范圍：各種用于臨床實驗的核酸擴增熒光檢測試劑。3負責(zé)人：XXXX4程序：41 收到試劑后，目測試劑是否處在凍存狀態(tài)。42 核對試劑品種和數(shù)量并檢查包裝：外包裝（廠名廠址、批準(zhǔn)文號、批號和有效期等）；內(nèi)包裝（試劑瓶完整性、試劑配備品種完整性、使用說明書有否等）。43 及時將試劑轉(zhuǎn)入20冰箱保存。將上述檢測核對情況

24、在記錄表上登記。44 最遲在前批次試劑存量尚可維持常規(guī)實驗一周時，按如下要求對新批號試劑進行效驗實驗。45 效驗實驗：451 要求設(shè)置：空白對照、陰性對照、陽性對照、室內(nèi)質(zhì)控各一，陽性標(biāo)準(zhǔn)品梯度（104、105、106、107）。452 出現(xiàn)如下情況中任何一種的，判斷為試劑不合格，不能用于臨床檢測：a）空白對照出現(xiàn)擴增。如擴增曲線CT值大于25，需重復(fù)實驗確證試劑污染。b）陽性對照和陽性標(biāo)準(zhǔn)品均未檢出，或陽性對照未檢出而陽性標(biāo)準(zhǔn)品檢出率大幅下降，表示試劑失效或檢測靈敏度大幅下降。453 陽性對照未檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品檢測正常，提示樣品提取液可能存在問題。重復(fù)新舊提取液陽性對照實驗，確定提取液失效問

25、題。更換提取液后該批試劑方可使用。454 空白對照無擴增，陰性對照有擴增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。單獨用提取液點樣上機，出現(xiàn)擴增，需更換提取液后方可使用該批試劑。455 陽性對照檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品未檢出或擴增曲線明顯系統(tǒng)性CT值偏大5個循環(huán)以上。提示陽性標(biāo)準(zhǔn)品存在問題。更換陽性標(biāo)準(zhǔn)品后該批試劑方可投入使用。456空白對照、陰性對照無擴增，陽性對照正常檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品導(dǎo)出的標(biāo)準(zhǔn)曲線之斜率（2.93.9）、截距（2634）、相關(guān)性（0.99）均在使用范圍內(nèi)，表明該批試劑良好，可以投入臨床使用。46 將實驗結(jié)果歸入記錄。6 相關(guān)表格試劑入庫使用記錄表，編號PCR(N)-SOP-007

26、-01。試劑質(zhì)檢記錄表，編號PCR(N)-SOP-007-02。乙型肝炎病毒核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序發(fā)布部門:XXXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N)-SOP-101分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: XXX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXX實施日期: 2012年5月1日7 項目名稱乙型肝炎病毒核酸定量檢測8 檢驗方法名稱TaqMan熒光定量檢測9 方法學(xué)原理PCR擴增時加入一對乙型肝炎病毒DNA特異性引物，同時加入一個特異性的、能與PCR產(chǎn)物雜交的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個熒光報告基團（R）和一個熒光淬滅基團（Q）。探針完整時，R基團發(fā)射的熒光信號被Q基

27、團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5-3外切酶活性將探針酶切降解，使R熒光基團和Q熒光基團分離，Q基團對R基團的抑制吸收作用消失，熒光監(jiān)測系統(tǒng)就可接收到R基團的熒光信號。每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成。被切割產(chǎn)生的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成比例，這樣就實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。因此根據(jù)PCR反應(yīng)液的熒光強度即可計算出初始模板的數(shù)量。10 標(biāo)本要求10.1 血清：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2毫升，注入無抗凝劑普通試管，待凝固后1500r/min離心5分鐘，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5ml滅菌離心管；10.2 血漿：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2毫升，注

28、入EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的試管，輕輕顛倒混勻510次，使抗凝劑與靜脈充分混勻，510分鐘后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至1.5ml滅菌離心管；10.3 標(biāo)本保存：標(biāo)本可立即用于測試，也可以保存于-20待測，保存期為6個月。11 試劑11.1 試劑名稱：乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）11.2 生產(chǎn)廠家：中山大學(xué)達安基因股份有限公司；11.3 試劑貨號：#DA-B051；11.4 包裝規(guī)格：20人份/盒；11.5 試劑成份:組成部分?jǐn)?shù)量主要組成成份DNA濃縮液（2000l/管）1管PEG6000、NaClDNA提取液（500l/管）2管NaOH、Tris-HCl、（PH8.0）、T

29、ritonX-100、NP-40、Chelex-100、EDTA（PH8.0）HBV PCR反應(yīng)液（400l/管）2管PCR反應(yīng)緩沖液、上下游引物、熒光探針Taq酶（60l/管）1管Taq酶原液、dNTPsHBV臨界陽性質(zhì)控品（200l/管）1管滅活的HBV陽性血清（1104IU/ml）HBV強陽性質(zhì)控品（200l/管）1管滅活的HBV陽性血清（1107IU/ml）陰性質(zhì)控品（250l/管）1管HBV陰性血清HBV陽性定量參考品（1.0104IU/ml）10l/管 紫色1管含有HBV擴展目的基因片斷的重組質(zhì)粒（1.0104IU/ml）HBV陽性定量參考品（1.0105IU/ml）10l/管 黃

30、色1管含有HBV擴展目的基因片斷的重組質(zhì)粒（1.0105IU/ml）HBV陽性定量參考品（1.0106IU/ml）10l/管 藍色1管含有HBV擴展目的基因片斷的重組質(zhì)粒（1.0106IU/ml）HBV陽性定量參考品（1.0107IU/ml）10l/管 綠色1管含有HBV擴展目的基因片斷的重組質(zhì)粒（1.0107IU/ml）11.6 試劑儲存條件：保存于20，有效期6個月。12 儀器ABI 7500全自動基因擴增檢測儀13 操作步驟13.1 DNA提取13.1.1 標(biāo)本處理（血清和血漿標(biāo)本處理相同，在樣本處理區(qū)操作）13.1.1.1 取100l血清加入等量DNA，振蕩器振蕩混勻5秒；13.1.1

31、.2 12000r/min離心10min；13.1.1.3 去上清，沉淀中加入30l DNA提取液，振蕩器劇烈振蕩混勻510秒，瞬時離心數(shù)秒，100恒溫處理101分鐘；13.1.1.4 12000r/min離心5min，備用。13.1.2 陰性質(zhì)控品處理取出陰性質(zhì)控品，8000rpm離心數(shù)秒，吸50l至0.5ml滅菌離心管中，加入50l DNA提取液充分混勻，100恒溫處理101分鐘；12000r/min離心5min，備用。13.1.3 HBV臨界陽性質(zhì)控品處理（同陰性質(zhì)控品）；13.1.4 HBV強陽性質(zhì)控品處理（同陰性質(zhì)控品）；13.1.5 HBV陽性定量參考品處理：8000rpm離心數(shù)秒

32、，備用；13.2 PCR擴增13.2.1 試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)操作）：按比例（HBV PCR反應(yīng)液40l/人份+ Taq酶3l/人份）取相應(yīng)量的PCR反應(yīng)液及Taq酶，充分混勻后按43l/管分裝至0.2ml離心管中備用。13.2.2 加樣：向準(zhǔn)備好試劑的0.2ml離心管中，分別加入處理后的樣品（包括樣本、陰性質(zhì)控品、臨界陽性質(zhì)控品和強陽性質(zhì)控品）上清液2l，或直接加入陽性定量參考品2l，8000rpm離心數(shù)秒，放入儀器樣品槽。13.2.3 設(shè)置PCR循環(huán)擴增程序如下93 2分鐘 預(yù)變性；93 45秒 55 60秒 10個循環(huán)93 30秒 55 45秒 30個循環(huán)14 結(jié)果判斷：14.1.1

33、在Results/Amplification 頁面查看反應(yīng)曲線，分析結(jié)果時，基線（baseline）取為12-18個循環(huán)的熒光信號，此時的閾值（threshold）約為400。14.1.2 4管陽性標(biāo)準(zhǔn)管、臨界陽性對照管的熒光強度對應(yīng)反應(yīng)循環(huán)數(shù)曲線（Rn vs. Cycle）應(yīng)呈較典型的S型曲線，陰性對照管則無此特征，否則實驗視為無效。14.1.3 根據(jù)預(yù)先輸入的5個陽性參考品濃度，儀器自動以陽性參考品基因拷貝濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以其實際測得的Ct值為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于等于0.990，否則應(yīng)視為實驗無效。14.1.4 定量結(jié)果分析：質(zhì)控、標(biāo)準(zhǔn)曲線均滿足要求時，可對樣品進行定量

34、分析。分析數(shù)據(jù)時，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線自動計算未知標(biāo)本的相應(yīng)基因拷貝濃度。14.1.5 如果增長曲線不呈S型或Ct值=30，則判樣品的HBV DNA總含量小于檢測極限。14.1.6 如果增長曲線呈S型曲線且Ct值1.00E+008，則樣品HBV DNA總含量1.0108 IU/ml。如果需要精確定量結(jié)果，可將提取后的樣品稀釋至線性范圍內(nèi)再檢測；ii. C1.00E+002，則樣品的HBV DNA總量為C IU/ml，定量數(shù)值供參考。15 質(zhì)控a ) 陰性質(zhì)控品：增長曲線不呈S型曲線或Ct值=30；b ) 陽性質(zhì)控品：增長曲線呈S型曲線，且強陽性質(zhì)控品定量參考值在1.0106IU/ml2.0107IU/

35、ml范圍，臨界陽性質(zhì)控品定量參考值在2.0102IU/ml2.0104IU/ml范圍；（參考值為儀器自動分析計算出的數(shù)值）；c ) 陽性定量參考品：全部陽性，且線性相關(guān)系數(shù)0.97|r|1；d ) 以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進行。16 參考范圍低于檢測下限17 性能指標(biāo)檢測限：1.0102IU/ml線性范圍：1.0102IU/ml1.0108IU/ml18 臨床意義18.1 觀察抗病毒藥物療效，指導(dǎo)用藥血循環(huán)中HBV DNA水平與HBV感染者病情和預(yù)后的關(guān)系密切，尤其是急性和慢性乙型肝炎患者。研究發(fā)現(xiàn)HBV DNA一直保持較高水平的急性肝炎患者易慢性化，而HB

36、V復(fù)制水平較高的慢性肝炎患者不僅對干擾素治療的反應(yīng)性差，而且肝組織炎癥反應(yīng)更明顯，病情更重，更易發(fā)生肝硬化和肝癌。根據(jù)2000 年拉米夫定臨床應(yīng)用指導(dǎo)意見，中國慢性乙型肝炎病人治療的目的主要就是降低血清HBV DNA，誘導(dǎo)HBeAg血清轉(zhuǎn)換，使ALT正?；?，改善肝臟組織學(xué)病變，改善疾病癥狀、體征，提高生活質(zhì)量，降低肝硬化和肝癌的發(fā)生率。同時血清的HBV DNA滴度的動態(tài)變化還可在臨床上對用藥的劑量、用藥時間以及是否需要聯(lián)合用藥等提供參考。18.2 器官移植中的作用肝臟器官移植是目前肝硬化晚期治療的唯一方法，但有約86%以上既往HBsAg攜帶者術(shù)后HBsAg重新出現(xiàn)。檢測HBV DNA 可用于觀

37、察免疫受損患者的HBV感染狀況。肝移植后乙肝主要是復(fù)發(fā)，再感染為次要因素。特別是移植前HBV復(fù)制水平高者，復(fù)發(fā)的幾率更高。定量檢測HBV DNA對肝移植術(shù)后的跟蹤觀測具有較好的臨床價值。18.3 對阻斷母嬰傳播的監(jiān)測聯(lián)合應(yīng)用高放價免疫球蛋白和乙肝疫苗時有效地阻斷母嬰傳播，但仍有一些嬰兒對疫苗呈低反應(yīng)，檢測嬰兒血循環(huán)中HBV DNA可對此進行監(jiān)測，分析阻斷失敗的原因。19 注意事項19.1 實驗室管理應(yīng)嚴(yán)格按照PCR基因擴增實驗室的管理規(guī)范，實驗人員必須進行專業(yè)培訓(xùn)，實驗過程嚴(yán)格分區(qū)進行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)），所用消耗品應(yīng)滅菌后一次性使用，實驗操作的每個階段使用專用的儀器和

38、設(shè)備，各區(qū)各階段用品不能交叉使用；19.2 為試劑和標(biāo)本制備階段提供生物安全柜，實驗過程中穿工作服，帶一次性手套，使用自卸管移液器；19.3 對每次實驗進行質(zhì)量控制；19.4 試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融；19.5 試劑盒DNA提取液內(nèi)含不溶于水的物質(zhì)，取樣時需用加樣器充分混勻后吸取。如出現(xiàn)因吸頭嘴部太細不能吸取或取樣后堵塞吸頭現(xiàn)象，可先用潔凈無污染的剪刀將吸頭嘴部剪去一截；19.6 提取的DNA可于20保存6個月；19.7 “C”表示樣品的濃度或含量；19.8 標(biāo)本制備區(qū)所用過的吸頭請打入盛有消毒劑的容器，并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄；19.9 實驗完畢用10%次氯酸或75%酒精或

39、紫外燈處理工作臺和移液器；19.10 所有檢測樣品應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求：衛(wèi)生部微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準(zhǔn)則和醫(yī)療廢物管理條例。20 參考文獻中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編全國臨床檢驗操作規(guī)程(第三版) 南京：東南大學(xué)出版社，2006乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR熒光探針法）說明書.2009年7月，第一版/0批準(zhǔn)記錄批準(zhǔn)人批準(zhǔn)時間有效期1年；其他：1年；其他：1年；其他：1年；其他：1年；其他：丙型肝炎病毒核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序發(fā)布部門:XXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N)-SOP-102分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: X

40、XX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXX實施日期: 2012年5月1日1 項目名稱丙型肝炎病毒核酸檢測2 檢驗方法名稱TaqMan熒光定性檢測3 方法學(xué)原理對丙肝病毒進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)生成cDNA，PCR擴增時加入一對丙型肝炎病毒cDNA特異性引物，同時加入一個特異性的、能與PCR產(chǎn)物雜交的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個熒光報告基團（R）和一個熒光淬滅基團（Q）。探針完整時，R基團發(fā)射的熒光信號被Q基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5-3外切酶活性將探針酶切降解，使R熒光基團和Q熒光基團分離，Q基團對R基團的抑制吸收作用消失，熒光監(jiān)測系統(tǒng)就可接收到R基團的熒光信號。每擴增一條DNA鏈，就有

41、一個熒光分子形成。被切割產(chǎn)生的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成比例，這樣就實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。因此根據(jù)PCR反應(yīng)液的熒光強度即可計算出初始模板的數(shù)量。4 標(biāo)本要求4.1 血清：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2毫升，注入無抗凝劑普通試管，待凝固后1500r/min離心5分鐘，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5ml滅菌離心管；4.2 血漿：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2毫升，注入EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的試管，輕輕顛倒混勻510次，使抗凝劑與靜脈充分混勻，510分鐘后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至1.5ml滅菌離心管；4.3 標(biāo)本保存：分離后的血清或血漿在28條件下保持不應(yīng)超過7

42、2小時；-20可保存1個月；要長期保存的，需分裝后儲存于-70。5 試劑5.1 試劑名稱：丙型肝炎病毒核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）5.2 生產(chǎn)廠家：XXXXXXX5.3 試劑貨號：#DA-B070；5.4 包裝規(guī)格：10人份/盒；5.5 試劑成份:組成部分?jǐn)?shù)量主要組成成份RNA提取液A（100l/管）1管二氧化硅、DEPC水（pH2.0）RNA提取液B（4000l/管）1管GuSCN、Tris-HCl（pH6.4）、EDTA（pH8.0）、Triton-100HCV PCR反應(yīng)液（180l/管）1管引物、dNTPs、5逆轉(zhuǎn)錄緩沖液逆轉(zhuǎn)錄酶系（20l/管）1管mMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNasi

43、nHCV PCR反應(yīng)液（400l/管）1管上下游引物、熒光探針、dNTPs、5PCR反應(yīng)緩沖液、雙蒸水Taq酶（30l/管）1管Taq酶原液、Tris-HCl（pH8.0）、KCl、EDTA（pH8.0）、DTT、丙三醇DEPC H2O（200l/管）1管DEPC H2O陰性質(zhì)控品（250l/管）1管HCV陰性血清HCV臨界陽性質(zhì)控品（200l/管）1管HCV強陽性血漿（2107IU/ml）稀釋1600倍制成HCV強陽性質(zhì)控品（200l/管）1管HCV強陽性血漿（2107IU/ml）稀釋16倍制成HCV陽性定量參考品（1.0105IU/ml）10l/管 紅色1管含有HCV擴展目的基因片斷的重組

44、質(zhì)粒（1.0105IU/ml）HCV陽性定量參考品（1.0106IU/ml）10l/管 黃色1管含有HCV擴展目的基因片斷的重組質(zhì)粒（1.0106IU/ml）HCV陽性定量參考品（1.0107IU/ml）10l/管 藍色1管含有HCV擴展目的基因片斷的重組質(zhì)粒（1.0107IU/ml）HCV陽性定量參考品（1.0108IU/ml）10l/管 綠色1管含有HCV擴展目的基因片斷的重組質(zhì)粒（1.0108IU/ml）5.6 試劑儲存條件：保存于20，有效期6個月。6 儀器ABI 7500全自動基因擴增檢測儀7 操作步驟7.1 RNA提取7.1.1 陰性質(zhì)控品處理7.1.1.1 取出陰性質(zhì)控品，800

45、0rpm離心數(shù)秒；7.1.1.2 取滅菌的0.5ml離心管加入10lRNA提取液A（充分混勻后吸取），加入100l陰性質(zhì)控品，再加入200lRNA提取液B，振蕩混勻，室溫放置5分鐘，8000rpm離心1分鐘，小心吸去上清；7.1.1.3 加200lRNA提取液B，充分混勻（用移液器吹打），000rpm離心1分鐘，小心吸去上清；7.1.1.4 加預(yù)冷的75%乙醇400l，充分混勻，8000rpm離心1分鐘，小心吸去上清；7.1.1.5 加預(yù)冷的75%乙醇400l，充分混勻，8000rpm離心1分鐘，小心吸去上清；7.1.1.6 打開管蓋，65干燥10分鐘，蓋上管蓋待用于逆轉(zhuǎn)錄。7.1.2 標(biāo)本處

46、理（血清和血漿標(biāo)本處理相同）7.1.2.1 取滅菌的1.5ml離心管加入10l RNA提取液A（充分混勻后吸取），加100l血清，再加入200l RNA提取液B，振蕩混勻，室溫放置5分鐘，8000rpm離心1分鐘，小心吸去上清；7.1.2.2 一下步驟同“陰性質(zhì)控品處理”的7.1.1.37.1.1.6.7.1.3 HCV臨界陽性質(zhì)控品處理（同陰性質(zhì)控品）；7.1.4 HCV強陽性質(zhì)控品處理（同陰性質(zhì)控品）；7.1.5 HCV陽性定量參考品處理：8000rpm離心數(shù)秒，備用；7.2 逆轉(zhuǎn)錄7.2.1 向干燥后的沉淀管加入18l PCR反應(yīng)液打勻，再加逆轉(zhuǎn)錄酶系2l，振蕩混勻；7.2.2 37放置

47、45分鐘，95加熱3分鐘。8000rpm離心1分鐘，待用。7.3 PCR擴增7.3.1 試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)操作）：按比例（HCV PCR反應(yīng)液40l/人份+ Taq酶3l/人份）取相應(yīng)量的PCR反應(yīng)液及Taq酶，充分混勻后按43l/管分裝至0.2ml離心管中備用。7.3.2 加樣：向準(zhǔn)備好試劑的0.2ml離心管中，分別加入逆轉(zhuǎn)錄后的樣品（包括樣本、陰性質(zhì)控品、臨界陽性質(zhì)控品和強陽性質(zhì)控品）上清液5l，或直接加入陽性定量參考品5l，8000rpm離心數(shù)秒，放入儀器樣品槽。7.3.3 設(shè)置PCR循環(huán)擴增程序如下93 2分鐘 預(yù)變性；93 45秒 55 60秒 10個循環(huán)93 30秒 55 45

48、秒 30個循環(huán)8 結(jié)果判斷：8.1 如果增長曲線不呈S型或Ct值=30，則判樣品的HCV RNA總含量小于檢測極限。8.2 如果增長曲線呈S型曲線且Ct值30，則按以下方法判斷：a ) 若樣品的C1.00E+003，則樣品HCV RNA總含量1.00E+008，則樣品HCV RNA總含量1.0108 IU/ml。如果需要精確定量結(jié)果，可將提取后的樣品稀釋至線性范圍內(nèi)再檢測；9 質(zhì)控a ) 陰性質(zhì)控品：增長曲線不呈S型曲線或Ct值=30；b ) 陽性質(zhì)控品：增長曲線呈S型曲線，且強陽性質(zhì)控品定量參考值在5.0106IU/ml5.0108IU/ml范圍，臨界陽性質(zhì)控品定量參考值在2.0103IU/

49、ml5.0105IU/ml范圍；（參考值為儀器自動分析計算出的數(shù)值）；c ) 陽性定量參考品：增長曲線呈S型曲線，Ct值27，且線性相關(guān)系數(shù)0.97|r|1；d ) 以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進行。10 參考范圍低于檢測下限11 性能指標(biāo)檢測限：1.0103IU/ml線性范圍：1.0103IU/ml1.0108IU/ml12 臨床意義HCV是引起輸血后肝炎的主要因素，其在血中的含量極低，僅為HBV的1%，其免疫學(xué)標(biāo)志只有抗-HCV 和核心抗原兩項，且至今病毒分離尚未成功，所以HCV的檢測存在一些問題，因此，RT-PCR技術(shù)在HCV的檢測中非常重要。由于個體間免

50、疫功能的差異，部分患者出現(xiàn)抗-HCV較晚，免疫功能低下者和經(jīng)免疫抑制治療者甚至可能不產(chǎn)生抗-HCV，因此HCV-RNA是HCV感染的確診標(biāo)志。即使在“窗口期”，也可檢測出HCV RNA。13 注意事項13.1 實驗室管理應(yīng)嚴(yán)格按照PCR基因擴增實驗室的管理規(guī)范，實驗人員必須進行專業(yè)培訓(xùn)，實驗過程嚴(yán)格分區(qū)進行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)），所用消耗品應(yīng)滅菌后一次性使用，實驗操作的每個階段使用專用的儀器和設(shè)備，各區(qū)各階段用品不能交叉使用；13.2 為試劑和標(biāo)本制備階段提供生物安全柜，實驗過程中穿工作服，帶一次性手套，使用自卸管移液器；13.3 對每次實驗進行質(zhì)量控制；13.4 由于涉

51、及RNA操作，應(yīng)嚴(yán)防RNase的污染；13.5 試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融；13.6 反應(yīng)管中加入RNA模板后，應(yīng)盡快完成熒光測定，開始PCR反應(yīng)；13.7 標(biāo)本制備區(qū)所用過的吸頭請打入盛有消毒劑的容器，并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄；13.8 實驗完畢用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；13.9 所有檢測樣品應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求：衛(wèi)生部微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準(zhǔn)則和醫(yī)療廢物管理條例。14 參考文獻中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編全國臨床檢驗操作規(guī)程(第三版) 南京：東南大學(xué)出版社，2006中山大學(xué)達安基因股份有限公司.丙型肝炎病

52、毒核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）說明書.2009年7月，第一版/0批準(zhǔn)記錄批準(zhǔn)人批準(zhǔn)時間有效期1年；其他：1年；其他：1年；其他：1年；其他：1年；其他：人巨細胞病毒核酸定量檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序發(fā)布部門:XXXXXX醫(yī)院檢驗科文件編號:PCR(N)-SOP-103分發(fā)范圍: 檢驗科PCR室版本/修訂號: A/0編寫者: XXX審核者:XXX批準(zhǔn)者:XXX實施日期: 2012年5月1日1 項目名稱人巨細胞病毒核酸定量檢測2 檢驗方法名稱TaqMan熒光定量檢測3 方法學(xué)原理選用人巨細胞病毒株（即人皰疹病毒5型）-AD169基因組中編碼即刻早期轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白的IE1基因的一高度保守的非編碼區(qū)為擴增靶區(qū)域，設(shè)計一對針對該區(qū)域的特異性引物，同時加入一個特異性的、能與PCR產(chǎn)物雜交的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別