益生菌對(duì)特應(yīng)性濕疹的控制作用

1、Probiotics in the management of atopic eczema益生菌對(duì)特應(yīng)性濕疹的控制作用作者：Isolauri1, T. Arvola2, Y. Stas1, E. Moilanen3, S.Salminen41圖爾庫(kù)大學(xué)兒科教研室，2坦佩雷大學(xué)醫(yī)院兒科部，3坦佩雷大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室/坦佩雷大學(xué)醫(yī)院臨床化學(xué)科，4生物化學(xué)與食品化學(xué)教研室，圖爾庫(kù)大學(xué)，芬蘭文章出處：臨床與實(shí)驗(yàn)變態(tài)反應(yīng)雜志，Vol.30, 16041610摘要背景： 近20年來(lái)，工業(yè)國(guó)家的過(guò)敏性疾病發(fā)病率顯著增加，因此迫切需要研制開(kāi)發(fā)新的治療方法。目的：經(jīng)隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照試驗(yàn)證實(shí)，益生素在早期炎癥

2、反應(yīng)有潛在的控制作用。方法：27名平均年齡4.6個(gè)月的嬰兒（母乳喂養(yǎng)，未曾接觸過(guò)其他嬰兒或其他配方奶粉）確診患有特應(yīng)性濕疹。患兒停止母乳喂養(yǎng)后分組，分別服用含益生菌雙歧桿菌（Bb-12）或乳酸桿菌LGG （ATCC 53103）或不含益生菌的完全水解乳清配方奶粉。本實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)了炎癥范圍和程度，嬰兒生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)情況，循環(huán)細(xì)胞因子/趨化因子濃度，血清中可溶性細(xì)胞表面粘附分子，甲基組胺和尿嗜酸粒細(xì)胞蛋白-X。結(jié)果：特應(yīng)性皮炎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（SCORAD評(píng)分）可顯示特應(yīng)性濕疹的范圍和嚴(yán)重程度，母乳喂養(yǎng)期，SCORAD指數(shù)為16（7-15），中位數(shù)（四分位差）。同服用未添加益生菌配方奶的患兒相比，兩個(gè)月后，服

3、用添加益生菌配方奶的患兒有明顯好轉(zhuǎn)；x2=12.27. P=0.002. 添加雙歧桿菌Bb-12組的患兒SCORAD評(píng)分降至0（0-3.8），乳酸桿菌組的 SCORAD降至1（0.1-8.7），與未添加組評(píng)分形成對(duì)比13.4（4.5-18.2），中位數(shù)（四分位差）。同時(shí)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)可溶性CD4的血清濃度和尿嗜酸性粒細(xì)胞蛋白X均降低。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)首次證明特異益生菌種對(duì)過(guò)敏炎癥反應(yīng)的幫助。數(shù)據(jù)進(jìn)一步說(shuō)明益生菌可能抵抗炎癥反應(yīng)的腸道環(huán)境。當(dāng)宿主體內(nèi)新產(chǎn)生的抗體敏感性不強(qiáng)時(shí)，這些益生菌株聯(lián)合作用，可幫助嬰兒度過(guò)斷奶期。因此益生菌為過(guò)敏治療和預(yù)防提供了食物治療的新方向。關(guān)鍵詞：過(guò)敏性炎癥反應(yīng)，特應(yīng)性，母乳喂

4、養(yǎng)，食物過(guò)敏，嬰兒，益生菌臨床與實(shí)驗(yàn)變態(tài)反應(yīng)雜志，Vol.30,pp.16041610。投稿時(shí)間：2000年1月26日；修改時(shí)間2000年4月13日；定稿日期：2000年4月27日前言益生菌是對(duì)身體有益的食物活性成分1，健康人體消化道正常的微生物群落，其中最常見(jiàn)的菌群是乳酸桿菌和雙歧桿菌。目前益生菌還是腹瀉的最佳治療方法2，3，其消化道屏障作用在臨床有顯著效果：降低小腸滲透性4、調(diào)節(jié)小腸菌落平衡5，從而提高小腸IgA反應(yīng)6。本實(shí)驗(yàn)所用的菌株雙歧桿菌Bb-12和乳酸桿菌LGG（ATCC53103）嬰兒均可安全服用2，3。近年來(lái)流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)了炎癥與特應(yīng)性的逆相關(guān)性以及它們與T輔助細(xì)胞表型

5、存在交叉調(diào)節(jié)關(guān)系7，8?？刂蒲装Y反應(yīng)（一種對(duì)特應(yīng)性疾病的過(guò)度敏感）還能在菌群與過(guò)敏性宿主之間產(chǎn)生良性反應(yīng)9，10。微生物抗原可與腸道固有菌群產(chǎn)生反應(yīng)，正常菌群作用于粘膜表面對(duì)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響11：早期持續(xù)的微生物刺激所產(chǎn)生的影響遠(yuǎn)超過(guò)偶發(fā)炎癥。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，特殊菌種對(duì)食物抗原引起的炎癥反應(yīng)有調(diào)節(jié)潛能，并能平衡促炎癥反應(yīng)、抗炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生12-14。胃腸道微生物群，作為一種內(nèi)源防御機(jī)制，有助于探索影響炎癥反應(yīng)方法，尤其在斷奶后新生抗原首次產(chǎn)生時(shí)。因此，為了評(píng)價(jià)文獻(xiàn)中闡述的益生菌是否具有免疫調(diào)節(jié)的臨床作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照試驗(yàn)評(píng)估了益生菌在特應(yīng)性濕疹患兒中的作用。特應(yīng)性濕疹是

6、常見(jiàn)的過(guò)敏首發(fā)癥狀。方法實(shí)驗(yàn)對(duì)象我們從100名早期特應(yīng)性濕疹患兒中選出27名，確診使用Hanifin兒童特異性皮炎診斷標(biāo)準(zhǔn)15。其他選擇標(biāo)準(zhǔn)包括患兒在母乳喂養(yǎng)時(shí)發(fā)生特應(yīng)性濕疹，患兒未曾接觸過(guò)其他嬰兒，入選前未食用其他配方奶粉，對(duì)本配方奶耐受。試驗(yàn)患兒中，平均1.6（1.3-2.0）月大時(shí)發(fā)生特應(yīng)性濕疹，（95% 置信區(qū)間CI）。15名患兒（56%）出現(xiàn)胃腸道癥狀包括嘔吐、溏便、腹瀉。多數(shù)患兒（82%）一級(jí)家庭成員有特應(yīng)性濕疹病史。患兒平均年齡4.6個(gè)月大，完全母乳喂養(yǎng)，參加實(shí)驗(yàn)后斷奶。參加實(shí)驗(yàn)時(shí)，血清總IgE濃度（phadebas IgE Prist，法瑪西亞公司，瑞典）為7（IQR-20）k

7、U/L?；純航?jīng)放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn)（法瑪西亞公司）測(cè)定雞蛋、牛奶、小麥反應(yīng)陽(yáng)性，分別為16%、11%、4%，皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)測(cè)定雞蛋、牛奶、小麥反應(yīng)陽(yáng)性，分別為15%、8%、15%。所有患兒家庭簽署書(shū)面知情同意書(shū)，同意參加實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)得到Tampere大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)為隨機(jī)雙盲試驗(yàn)，患兒平均分成三組：其中兩組斷奶，分別服用含益生菌（一組為雙歧桿菌Bb-12，一組為乳酸桿菌LGG）的徹底水解乳清嬰兒配方奶粉（Peptidi-Tutteli，Valio有限公司，芬蘭），一組斷奶，服用不含益生菌的徹底水解乳清嬰兒配方奶粉。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)記載雙歧桿菌Bb-12（Christian H

8、ansen A/S，赫斯霍爾姆，丹麥）和乳酸桿菌LGG（Valio 有限公司，赫爾辛基，芬蘭）安全并能有效治療新生兒急性腹瀉，故本實(shí)驗(yàn)選用這兩種益生菌。從以前臨床研究2，3和居民腹瀉研究，和腹瀉病人研究5，17可知益生菌的濃度范圍是310x（LGG）1109（Bb-12）集落形成單位(cfu)/g。一名微生物學(xué)家通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法獨(dú)立控制復(fù)方奶粉總各種微生物的含量。主要測(cè)量數(shù)據(jù)初級(jí)結(jié)果測(cè)量包括特應(yīng)性濕疹的范圍、程度和主觀癥狀（包括瘙癢、失眠）。刺激結(jié)果測(cè)量包括血清中可溶性細(xì)胞分子濃度、細(xì)胞因子/趨化因子濃度和尿液中甲基組胺濃度和嗜酸粒細(xì)胞蛋白-X（EPX）濃度。在所有測(cè)量單位中，粒巨嗜系集落刺

9、激因子（GM-CSF），可溶性細(xì)胞間粘附分子1（slCAM-1），腫瘤壞死因子-（TNF）以測(cè)量炎癥狀態(tài)；可溶性CD4（sCD4）、可溶性CD8（sCD8）、IL-2可溶性受體（IL-2sR）以反映T細(xì)胞炎癥反應(yīng)18-21和RANTES（正常T淋巴細(xì)胞表達(dá)和分泌的活性調(diào)節(jié)蛋白)；單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）以衡量肥大細(xì)胞的循環(huán)活性；血清中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-1（TGF-1）和IL1 受體拮抗劑（IL-1ra）以衡量循環(huán)中抗炎活性；尿液EPX以驗(yàn)證嗜酸性炎癥的發(fā)生；尿液中組胺、甲基組胺代謝情況反應(yīng)早期抗原應(yīng)激反應(yīng)22，23。 特應(yīng)性濕疹評(píng)價(jià)特應(yīng)性濕疹的嚴(yán)重程度通過(guò)SCORAD評(píng)分來(lái)評(píng)價(jià)，該評(píng)分系

10、統(tǒng)是歐洲的特應(yīng)性皮炎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)24。分別在分組前，2個(gè)月、6個(gè)月后對(duì)濕疹評(píng)分。面積計(jì)算使用九分法，嚴(yán)重程度以紅斑、浮腫和/或丘疹、脫皮、苔蘚形成和干燥各級(jí)分?jǐn)?shù)的總和計(jì)算，主觀臨床表現(xiàn)包括瘙癢、失眠，主要由家長(zhǎng)估測(cè)評(píng)分。SCORAD評(píng)分由下述公式計(jì)算而得：面積/5+3.5嚴(yán)重程度+主觀評(píng)分。免疫評(píng)價(jià)分組前、實(shí)驗(yàn)開(kāi)始2個(gè)月后、6個(gè)月后分別采集靜脈血和尿液，并保存于-70等待檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒含有sCD4、sCD8、IL-2sR、sICAM-1、IL-1ra、RANTES、MCP-1：購(gòu)于R&D Systems公司，明尼阿波利斯，明尼蘇達(dá)州，美國(guó)；TNF-、GM-CSF、TGF-1：購(gòu)于

11、Genzyme公司，劍橋，馬薩諸塞州，美國(guó)；稀釋尿樣中甲基組胺和EPX濃度用放射免疫測(cè)定法測(cè)定，反應(yīng)試劑產(chǎn)于Pharmacia&Upjohn Diagnostics公司，烏普薩拉，瑞士，尿樣測(cè)驗(yàn)結(jié)果以甲基組胺/g或肌酐中EPX/mmol表示。生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)情況本實(shí)驗(yàn)參照其它文獻(xiàn)25評(píng)價(jià)了營(yíng)養(yǎng)攝入。家長(zhǎng)分別在干涉的前后3天連續(xù)記錄營(yíng)養(yǎng)攝入，固體和液體食品量經(jīng)家用儀器測(cè)量，用AIVO程序計(jì)算營(yíng)養(yǎng)攝入量，參照芬蘭營(yíng)養(yǎng)數(shù)據(jù)表和生產(chǎn)數(shù)據(jù)表26。定量測(cè)量嬰兒的母乳攝入量。體重和體長(zhǎng)用電子秤和嬰兒身長(zhǎng)量板分別在使用徹底水解配方奶粉前，試驗(yàn)2個(gè)月，6個(gè)月時(shí)測(cè)量。其他營(yíng)養(yǎng)參數(shù)如血清中白蛋白濃度、前白蛋白濃度、尿素濃

12、度和堿性磷酸酶后續(xù)進(jìn)行了測(cè)量。數(shù)據(jù)分析測(cè)量數(shù)據(jù)取平均值為（95%的置信區(qū)間 CI）的中間值和四分位值（IQR），并用檢驗(yàn)法比較實(shí)驗(yàn)組的SCORAD評(píng)分，以避免重復(fù)配對(duì)實(shí)驗(yàn)，同時(shí)用以比較各組之間免疫變量基線的改變。經(jīng)威氏符號(hào)秩次檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ANOVA用以比較配方奶粉攝入和各組間營(yíng)養(yǎng)變量，x2試驗(yàn)以比較三組嬰兒臨床癥狀的改善情況。斯皮爾曼等級(jí)相關(guān)以測(cè)定尿樣甲基組胺和EPX濃度與特應(yīng)性濕疹之間相關(guān)性，從而顯示特應(yīng)性濕疹的嚴(yán)重程度。（SCORAD評(píng)分）。結(jié)果益生菌對(duì)特應(yīng)性濕疹的作用母乳喂養(yǎng)期，SCORAD評(píng)分為16（7-25），中間數(shù)（IQR）。斷奶服用完全水解配方奶粉后，患兒評(píng)分降低，

13、顯示情況明顯緩解（創(chuàng)面、程度、主觀評(píng)定），但反應(yīng)程度各組不同（圖1）。2個(gè)月后SCORAD評(píng)分顯示，僅服用益生菌的組中出現(xiàn)病情好轉(zhuǎn)，LGG組9/9的患兒病情緩解，未添加益生菌組4/9患兒病情緩解：P=0.002。Bb-12組評(píng)分降至0（0-3.8），LGG組評(píng)分為1（0.1-8.7），未添加組評(píng)分13.4（4.5-18.2）。6個(gè)月后三組SCORAD評(píng)分接近，中位數(shù)（四分位值）為0（0-6.6）。圖1. SCORAD評(píng)分，中間值（四分位值）。特應(yīng)性濕疹創(chuàng)面、嚴(yán)重程度的評(píng)價(jià)和癥狀（瘙癢、失眠）隨機(jī)分組前及試驗(yàn)2個(gè)月后的評(píng)估，（空白柱表示未添加益生菌組，密集斜線柱表示Bb-12添加組，斜線柱表示L

14、GG添加組）小圖：分組前和試驗(yàn)2個(gè)月后尿樣嗜酸性粒蛋白X在不同組中的濃度益生菌對(duì)免疫參數(shù)的影響服用益生菌的患兒組試驗(yàn)2個(gè)月后血清sCD4降低（表1）；H檢驗(yàn)法顯示三組的顯著不同（P=0.005）?；純菏秤门浞侥谭酆?，三組血清sCD8和IL2sR均降低。血清TGF-1受益生菌調(diào)節(jié)（P=0.007，H檢驗(yàn)法），但因益生菌群不同，調(diào)節(jié)作用不同：Bb-12添加組降低（P=0.04），LGG添加組升高（P=0.07）.而IL-1ra、TNF、GM-CSF、slCAM-1、RANTES和MCP-1的血清濃度不收益生菌影響。表1 三組患兒（完全水解配方奶粉EHF未添加益生菌組、Bb-12添加組、LGG添加組

15、）sCD4、sCD8、IL2sR和TGF-1在試驗(yàn)前（前），2個(gè)月后（后）的血清濃度變化。EHF+EHF+EHFBb-12LGG前后前后前后sCD4511844655601140455404458g/mL（47355555）（34825235）（50926189）（10211635）(51516484)(35074601)sCD815101211118Ng/mL（1017）（912）（1117）（912）(813)(711)IL2sR430736053605325146183739g/mL（37894429）（29273981）（29274885）（30193387）(36055554）(35

16、275161)TGF-1757576465468ng/mL（6382）（6787）（7582）（3955）（5062）（5682）*P0.05 對(duì)比基線測(cè)量（各組間經(jīng)H檢驗(yàn)法測(cè)定在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異）試驗(yàn)前母乳喂養(yǎng)時(shí)，尿樣EXP濃度與SCORAD評(píng)分密切相關(guān)（rho=0.53，P=0.01），甲基組胺尿樣濃度與之無(wú)相關(guān)性（rho=0.24，P=0.27）。益生菌添加組中，尿樣EPX明顯減少，Bb-12添加組P=0.01，LGG添加組（P=0.04）：圖1小圖生長(zhǎng)與營(yíng)養(yǎng)狀況參加實(shí)驗(yàn)時(shí)，母乳喂養(yǎng)包含的營(yíng)養(yǎng)：108（97-120）mL/kg，平均值為（95%的置信區(qū)間 CI）。2個(gè)月后，各組在配方奶

17、粉的營(yíng)養(yǎng)方面相當(dāng)，平均值為（95%的置信區(qū)間 CI）：未添加益生菌組75（63-88）mL/kg，Bb-12添加組73（63-88）mL/kg，LGG添加組76（70-82）mL/kg；P=0.96。每組患兒能量消耗分別占各自攝取總量的53（38-68）%，52（42-62）%和56（50-62）%，P=0.85。6個(gè)月后，消耗量下降至63（56-69）mL/kg, 例如：42(37-47) kcal/kg 177(156-199) kJ/kg，但固體食物攝入量同比增加：64(59-70)kcal/kg 270(245-294)kJ/kg，相當(dāng)于總能量攝取的60(56-65)%。試驗(yàn)后6個(gè)月后

18、隨訪時(shí)，平均益生菌攝入量為3-81010cfu/d。配方奶粉儲(chǔ)藏時(shí)基本無(wú)益生菌數(shù)量減少。隨訪期間所有患兒生長(zhǎng)發(fā)育正常。平均值為95%置信區(qū)間的年齡別身高標(biāo)準(zhǔn)差在試驗(yàn)前、2個(gè)月后、6個(gè)月后分別為-0.04（-0.410.33）、-0.11（-0.460.22）、0.0（-0.430.42）。試驗(yàn)前，平均值為95%的置信區(qū)間所取的血清白蛋白、前白蛋白、堿性磷酸酶濃度均在正常范圍：41（4042）g/L，0.14（0.140.15）g/L，672（564780）U/L，并且后期隨訪中無(wú)變化。血清尿素濃度在母乳喂養(yǎng)期稍低，僅1.98（1.792.16）mmol/L，平均值為95%置信區(qū)間的取值：正常范

19、圍2.06.0mmol/L，益生菌添加劑組在2個(gè)月后隨訪中顯示該營(yíng)養(yǎng)參數(shù)提高：Bb-12添加組4.1（3.44.7），LGG添加組3.3（2.73.7）。對(duì)比非益生菌添加組2.9（2.13.7）mmol/L，平均值為95%置信區(qū)間取值：P=0.02。6個(gè)月后三組濃度正常均近似與4.0（3.54.4）mmol/L。討論人類(lèi)腸道菌落是復(fù)雜的代謝活性生態(tài)系，早年逐步生成27。腸道菌落的生成初期至關(guān)重要，任何抗體的免疫應(yīng)答都在該階段產(chǎn)生。因此，微生物群，主要是益生菌，可能在新生兒免疫系統(tǒng)的生成階段起作用，這一理念在近年來(lái)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到了證實(shí)，消化道相關(guān)的淋巴組織參與微生物集群現(xiàn)象28。胃腸道可產(chǎn)生Ig

20、A-分泌細(xì)胞，大大增強(qiáng)了小腸抗原尤其是微生物群落的刺激作用29。并且微生物集群現(xiàn)象強(qiáng)制性出現(xiàn)在口服免疫耐受人群而非食物致敏人群30，因此消化道菌群的組成差異將直接影響宿主的免疫自穩(wěn)性。益生菌的標(biāo)準(zhǔn)是：菌種于人類(lèi)同源，在人體中宿生與膽汁酸共存，粘附于小腸粘膜1。Genera 本實(shí)驗(yàn)所用菌屬乳酸桿菌和雙歧桿菌，研究表明與人類(lèi)嘴唇、胃腸道和泌尿生殖道粘膜表層同源。益生菌已證實(shí)可增強(qiáng)宿主的小腸抵御機(jī)制1-6，因此可幫助控制治療早期過(guò)敏反應(yīng)，是預(yù)防特異性疾病惡化的關(guān)鍵。該疾病治療的重要性還在于嬰兒雖然易發(fā)生多種食物過(guò)敏25和哮喘31 ，但其免疫記憶尚不完善7，因此，在健康人體消化道特異微生物消耗的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)提出特應(yīng)性疾病免疫應(yīng)答存在微生物抗原的反作用7，8，另外新近流行病學(xué)調(diào)查顯示早期炎癥反應(yīng)和后期特應(yīng)性疾病之間存在逆關(guān)聯(lián)32，33也支持本文觀點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)表明益生菌能減少嬰兒特應(yīng)性濕疹的創(chuàng)面，緩解癥狀。未添加益生菌的試驗(yàn)對(duì)照組6個(gè)月后病情得以