AB液質(zhì)操作規(guī)程完整

1、第一部分開關(guān)機(jī)A A、開機(jī)1打開UPS電源，打開氮?dú)獍l(fā)生器（氣瓶），確認(rèn)Curtain gas的輸入壓力為0.4MPa, gas1/2為 0.7MPa，exhuast為 0.4MPa。2. 打開機(jī)械泵電源開關(guān)（5500系列直接打開質(zhì)譜主機(jī)電源，儀器自動(dòng)啟動(dòng)機(jī)械泵）3. 等機(jī)械泵工作至少30min5. 打開質(zhì)譜主機(jī)電源開關(guān)6. 過夜抽真空B B、關(guān)機(jī)1停止輸液：關(guān)停針泵或液相泵，或斷開輸液管線（一般質(zhì)譜主機(jī)Sta ndby后液相系統(tǒng)也自動(dòng)待機(jī)，輸液泵自動(dòng)關(guān)停，但建議操作人員再次確認(rèn)，必須保證沒有任何 液體再泵入質(zhì)譜）2使儀器待機(jī)，并滅活配置2關(guān)閉質(zhì)譜儀主機(jī)電源開關(guān)（5500系列只需按下電源開關(guān)旁

2、的VENT按鍵排放 真空）3機(jī)械泵繼續(xù)工作至少30min4關(guān)閉機(jī)械泵上的電源開關(guān)（5500系列會(huì)自動(dòng)關(guān)停機(jī)械泵，待機(jī)械泵停止后即可 關(guān)閉5500系列主機(jī)上的電源開關(guān)）5關(guān)閉氣體發(fā)生器或氣瓶第二部分調(diào)諧1、PPG就是正離子校正液，PPG3000負(fù)離子調(diào)諧液，本臺(tái)儀器只用兩瓶校正液，正離 子一瓶，負(fù)離子一瓶。洗液一瓶50%的甲醇水。調(diào)諧前先用洗液洗針兩次。吸校正液的時(shí)候慢慢吸，避免吸入氣泡，吸好以后將針泵卡住。再將高度調(diào)到5,將管路重新連接。不再連接六通閥，由質(zhì)譜直接進(jìn)樣，且將針泵的速度調(diào)到10卩L/ml。2、 調(diào)諧液弄好后在儀器面板工具欄上：TOOIt項(xiàng)目t創(chuàng)建項(xiàng)目。此項(xiàng)目為一個(gè)文件夾，文件夾里

3、面包括所有此次采集的信息，方法、序列等，且所有采集的項(xiàng)目都固定在一個(gè)文件夾下面：D:/Analyst Data/Project。新建項(xiàng)目的時(shí)候，彈出窗口中有個(gè)Add All，可以創(chuàng)建孫文件夾。3、 聯(lián)機(jī)：軟件打開后在左上方硬件配置（單機(jī)選中，雙擊打開）t只需選中儀器MA active profi le。圖標(biāo)變?yōu)榫G色，表示聯(lián)機(jī)成功。調(diào)諧只需要選中質(zhì)譜。儀器的實(shí)時(shí)狀態(tài) 可以點(diǎn)擊右下方的圖標(biāo)，質(zhì)譜和液相都是單獨(dú)觀察，質(zhì)譜要注意真空度，為0.5.4、 調(diào)諧t手動(dòng)調(diào)諧t項(xiàng)目（文件夾）選中下拉菜單中的（為系統(tǒng)默認(rèn)的調(diào)諧文件夾）， 先start syring pump （打開針泵）tstart （質(zhì)譜），開

4、始采集以后觀察基線是否平衡，若 等兩分鐘還未平衡好，則手動(dòng)將針泵往上抬。5、 平衡好后（基線平穩(wěn)則為平衡好），重新進(jìn)樣，重新點(diǎn)擊start syring pump o Resolution （分辨率）tadvaneed （高級(jí)選項(xiàng)）（看到結(jié)果后調(diào)節(jié)質(zhì)量軸和分辨率做準(zhǔn)備，只能先打開這個(gè)，再打開譜圖）t實(shí)時(shí)質(zhì)譜圖右鍵 topen file 極便點(diǎn)一個(gè)框t軟件上方的從譜圖校正t PPGPOS（正離子）t start岀現(xiàn)三行：（1、質(zhì)量軸。2、分辨率。3、兩次調(diào)諧的差異）t若質(zhì)量軸有差異 t右上角 tyesT若分辨率飛離出虛線 toffset （偏大調(diào)大，偏小調(diào)?。┹?入校正的數(shù)值，再重新進(jìn)樣，如此反

5、復(fù)，直到點(diǎn)落在虛線以內(nèi)，實(shí)線代表最合適。6、 校正好后儀器會(huì)自動(dòng)保存，直接關(guān)掉窗口即可。負(fù)離子調(diào)諧和正離子調(diào)諧步驟一樣，只是在選擇方法的時(shí)候要注意選擇負(fù)離子模式。還有看結(jié)果時(shí)要選擇PPG3000.此為負(fù)離子調(diào)諧液。調(diào)諧因針泵流速很小，10卩L/ml，所以不需要設(shè)定離子源溫度及輔助氣，直接設(shè)定噴霧器流速為50，就可以將樣品霧化，氣簾氣也不需要設(shè)置，因?yàn)闆]有多余的溶劑需要吹走。第三部分：方法優(yōu)化1. 在 Analyst 軟件 Tools 菜單中選擇 Project t Create Project在 Project name項(xiàng)下 輸入新建的Project名稱。注意，不要點(diǎn)選窗口中的其他按鈕！點(diǎn)擊

6、0K，確認(rèn)新 建 Project。2. 在Analyst軟件界面下，雙擊導(dǎo)航欄內(nèi) Hardware Configuration。在彈出窗口中 選擇MassO nl y,點(diǎn)擊Activate Profile，激活Mass On ly （只聯(lián)接質(zhì)譜主機(jī)）。3. 在導(dǎo)航欄內(nèi)單擊Tune and Calibrate進(jìn)入調(diào)諧模式。點(diǎn)擊上方工具條中的T鈕。 此時(shí)，應(yīng)注意到主機(jī)有 “撲”聲音，表明進(jìn)入調(diào)諧狀態(tài)。此時(shí)右下角質(zhì)譜狀態(tài)顯示 綠色。雙擊Manual Tuning,進(jìn)入質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置及運(yùn)行窗口。4. 使用 1mL 玻璃進(jìn)樣針吸取適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于進(jìn)樣針座上。點(diǎn)擊 MS Method 下拉菜單，選擇 Sy

7、ringe Pump Method,設(shè)定針泵流速 Flow Rate為10卩L/mirt5. 點(diǎn)擊Start Syringe Pump按鈕開針泵進(jìn)樣。6. 返回MS Method,選擇掃描模式 Scan Type為Q1 MS,設(shè)定掃描速度Scan Rate 為10Da/s,設(shè)定掃描范圍StartStop設(shè)定為50化合物分子量。DP預(yù)輸入 60。7. 點(diǎn)擊start開始采集數(shù)據(jù)。運(yùn)行穩(wěn)定后，注意觀察是否有預(yù)期的母離子出現(xiàn)，并 控制其響應(yīng)值在約E4以下。點(diǎn)擊stop,選擇第一個(gè)峰(后面是同位素峰)的平 穩(wěn)段，雙擊，選中母離子。點(diǎn)擊右鍵，選擇 Delete Pane。8. 設(shè)定Scan type為產(chǎn)

8、物離子掃描 Product Ion (Ms2),掃描速度200Da/s,選擇掃描正/負(fù)離子，輸入母離子(product of),設(shè)定掃描范圍startstop為50MW+20，覆蓋可能的子離子質(zhì)量范圍，點(diǎn)擊 compoud標(biāo)簽，設(shè)定(DP) 60，( CE) 5。9. 點(diǎn)擊start,開始采集數(shù)據(jù)，注意觀察是否有預(yù)期的母離子出現(xiàn)。手動(dòng)調(diào)節(jié)CE, 以 5eV 為步長(zhǎng)，逐漸增加。每次增加后稍作等待，直至目標(biāo)化合物的子離子清 晰看見。選擇平穩(wěn)的一段，雙擊，選擇子離子。10. 選擇Scan Type為MRM。設(shè)定參數(shù)表格中的Q1對(duì)應(yīng)的母離子，Q3對(duì)應(yīng)的子 離子，time (ms)為50, ID值設(shè)為

9、名稱1 (定量)，名稱2 (定性)。11點(diǎn)擊 Edit Ramp,在 Parameter下選擇 Collision Energy，點(diǎn)擊 OK。點(diǎn)擊 start 開始采集數(shù)據(jù)，記錄每個(gè) MRM 通道的最佳 CE 電壓。在 MRM 參數(shù)設(shè)定表中， 右鍵點(diǎn)擊。選擇 Collision Energy CE，調(diào)出表格中的CE列，輸入每個(gè) MRM通 道的最佳CE電壓值，精確到個(gè)位數(shù)。重復(fù)以上步驟，在Parameter項(xiàng)下選擇Declustering Potential,優(yōu)化并保存DP。完成后選擇菜單File/Save保存采樣方法， 文件名 .dam。第四部分：方法建立一、LCMS方法的建立：1、連接儀器：

10、打開HPLC質(zhì)譜電源，將HPLC系統(tǒng)接上柱子，將6號(hào)出口管線與離子源連好。調(diào)離子源噴霧針位置到2mm處，雙擊HardwareCon figure，在硬件配置菜單下單擊LCMS （液相與質(zhì)譜聯(lián)用），單擊Activate profile激活儀器，會(huì)聽到笛的一聲，說明儀器已經(jīng)連接上。2、 確認(rèn)液質(zhì)同步：選擇項(xiàng)目（之前優(yōu)化方法的時(shí)候已經(jīng)建立的項(xiàng)目）；雙擊 Build acquisition method新建方法，彈出新建方法模板。在模板左側(cè)點(diǎn)擊 acquisition method, 模板右邊顯示對(duì)應(yīng)的參數(shù)，確認(rèn) synchronization mode選擇 LC Sync,表示液質(zhì)同步。3、 設(shè)置M

11、RM參數(shù)：點(diǎn)擊方法模板左側(cè)的 MRM ,在模板右側(cè)Scan Type 下選擇 MRM ； 在 polarity下選擇化合物極性：Positive（正離子）、Negative （負(fù) 離子）；Duration為15min （與液相分離相同的時(shí)間）；表格中Q1:母離子分子量， Q3（Da）:子離子分子量，Time（ msec）: 50，ID欄：化合物名稱（離子對(duì)名稱 后空格加1為定量，空格加2為定性），在表格中右鍵分別單擊 DP、CE，點(diǎn)擊 工具欄的OPEN打開之前優(yōu)化的方法參數(shù)，調(diào)出DP,CE值，選中整行，Ctrl+c （復(fù) 制）參數(shù)，關(guān)閉窗口，再Ctrl+v （粘貼）參數(shù)）；最后點(diǎn)擊Edit p

12、arameter設(shè)置離子 源參數(shù)：Source/Gas項(xiàng)用以下推薦值：CUR 35 , IS:5500（正離子）或-4500 （負(fù)離 子），TEM 600，GS1 60，GS2 70,點(diǎn)擊 OK。4、設(shè)置液相參數(shù)：點(diǎn)擊模板左邊的shimadzu LC system，在右邊的pumps 欄下，設(shè)置stop time （運(yùn)行時(shí)間）為15min， flow流速為1mL/min，A為水 相設(shè)為95%, B為有機(jī)相設(shè)為5% （設(shè)置時(shí)改B，A自動(dòng)），泵最大壓力為50； 點(diǎn)擊time program設(shè)置液相梯度：例咪唑類梯度設(shè)置：Time(mi n)AB95%5%55%95%105%95%10.195%5%

13、1595%5%接著在右邊的Auto sampler欄下，設(shè)置清洗時(shí)間，在Rinse mode下選擇Before and after （前后都洗），并設(shè)置清洗時(shí)間為5s,清洗液用50%甲醇水。最后點(diǎn)擊保 存按鈕，在保存窗口輸入該方法的名稱。二、建立批處理：1、雙擊Build acquisition batch，在右邊窗口 set欄為批處理保存的文件夾 命名以便識(shí)別，再點(diǎn)擊add set，最后點(diǎn)擊add sample，再選擇之前建立的LC-MS 方法，在彈出的窗口內(nèi)的number（進(jìn)樣樣品數(shù)）處填入需要進(jìn)樣的 樣品個(gè)數(shù)， 點(diǎn)擊OK。2、在加入的樣品列表內(nèi)依次填寫 sample name （樣品名稱

14、）、via position （樣 品瓶的位置）、inj.volunme （進(jìn)樣體積：一般5微升或10微升）。3、在submit項(xiàng)下點(diǎn)擊submit按鈕以提交樣品序列。4、點(diǎn)擊工具條上左上角的view queue按鈕，可查看已提交的樣品。此時(shí)將儀器從校正狀態(tài)退出，進(jìn)入分析模式。確認(rèn)泵已打開，首次進(jìn)樣液相 先排氣，再平衡儀器：先點(diǎn)擊工具條上的equilibrate平衡按鈕，在彈出的平衡 窗口中輸入平衡時(shí)間10min，點(diǎn)擊ok。右下角圖標(biāo)會(huì)變黃，待平衡結(jié)束后此處 圖標(biāo)會(huì)變成綠色，此時(shí)即可點(diǎn)擊start sample按鈕采集樣品信息，儀器會(huì)自動(dòng)對(duì) 已提交的全部樣品進(jìn)行采集。第五部分?jǐn)?shù)據(jù)處理1. 雙擊

15、打開Multiquilt，選擇項(xiàng)目，點(diǎn)擊File下的熒光棒型圖標(biāo)，點(diǎn)擊 sample, 選擇需要的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊 next，create new method為方法命名， 點(diǎn)擊next，選擇一個(gè)有代表性的樣品（一般選擇濃度較大的標(biāo)品數(shù)據(jù)），設(shè)置 分組（同一物質(zhì)定量離子和定性離子設(shè)置為一組），并指定內(nèi)標(biāo)，n ext，對(duì)每 個(gè)物質(zhì)進(jìn)行積分。2. 設(shè)置積分參數(shù)：a、 Causian Smoth （平滑）：一般是0，如有毛刺可改成1或2；b、Expeceted Time （保留時(shí)間）：一般不動(dòng)c、Expected time范圍：一般30s，表示在保留時(shí)間 5s范圍d、最小峰寬e、最小峰高f、背

16、景噪音扣除： 可調(diào)整目標(biāo)峰基線以下被積分的面積， 比例越高積分越往 下，必要時(shí)調(diào)整。g、分峰因子 ：峰有分叉時(shí)設(shè)置，如有兩個(gè)分叉，設(shè)置為 2，峰分叉不能大 于2h、單位：設(shè)置單位，勾選 Apply units to all 可將此單位用于所有化合物 點(diǎn)擊next，點(diǎn)擊finish。在新跳出窗口內(nèi)將標(biāo)準(zhǔn)品選定，輸入濃度。查看各化合 物積分是否正常，點(diǎn)擊第三個(gè)圖標(biāo)查看標(biāo)準(zhǔn)曲線。報(bào)告打?。狐c(diǎn)擊 File，create report Report template （選擇報(bào)告模板，一般用 samplel 和標(biāo)線，內(nèi)標(biāo)報(bào)告只能用sample1,2,3）,命名，選擇存儲(chǔ)報(bào)告位置，點(diǎn) ok。信噪比：選擇項(xiàng)目

17、，雙擊open date file,點(diǎn)擊sample,選擇低濃度樣品，點(diǎn)擊 ok，點(diǎn)擊 XIC，選擇定量離子，點(diǎn)擊ok,選中峰，按住shift，選峰附近的一段時(shí)間，點(diǎn) Script，點(diǎn)擊S-To NScript，即可得到結(jié)果。第六部分： LC-MS 離子阱原理及其應(yīng)用原理：在進(jìn)行多級(jí)質(zhì)譜分析（MS-MS）時(shí)，首先限定目標(biāo)質(zhì)量的離子。通過調(diào)整交 變電壓，將大于以及小于目標(biāo)質(zhì)量的離子射出， 從而使得僅有一個(gè)質(zhì)量的離子存 在于離子阱中并將其富集。目標(biāo)質(zhì)量的范圍被稱為Isolation Width。之后通過向離子阱內(nèi)注入氣體（通常為氦氣或氮?dú)猓?，與離子發(fā)生碰撞使其被打成碎片。 操作方法：首先在 An

18、alyst 中打開一個(gè)成熟的 MRM 采樣方法，然后右鍵單擊Acquisition Method 中的 MRM，在彈出菜單中選擇 Add IDA Criteria Level。在新增的 IDA-First Level Criteria 頁面中設(shè)置相關(guān)邏輯選項(xiàng)（其中四項(xiàng)尤為重要）1）Select“ X” to “ Y” most in tense表示k多個(gè)組分色譜共流出時(shí)，指定觸發(fā)最強(qiáng)的若干個(gè)母離子， “1 to 2表”示最強(qiáng)和次強(qiáng)的兩個(gè)母離子， “1 to 3 表”示最強(qiáng)和次強(qiáng)和第三位三個(gè)母離子，以此類推。請(qǐng)注意，如果 選擇了 “ 1 to 2或“ 1 to 3,則后續(xù)的EPI個(gè)數(shù)應(yīng)調(diào)整為對(duì)應(yīng)的兩個(gè)或三 個(gè)。（一般選擇兩個(gè)以下）2) After Dynamic Background Subtraction of Survey Scan 表示執(zhí)行動(dòng)態(tài)背景扣除，使得感興趣的母離子都盡可能的獲得觸發(fā)EPI的機(jī)會(huì)。該選項(xiàng)尤為重要，為必選項(xiàng)。3）Exclude former target ions在某些情況下，一次數(shù)據(jù)