乙型肝炎病毒抗體診斷膠體金法SOP標準操作程序

1、乙型肝炎病毒抗體診斷（膠體金法SOP）測定標準操作程序編寫者：宿金濤日期：2012年3月1日一.原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗體、e抗原、e抗體、核心抗體檢測試 劑盒（膠體金法）采用膠體金免疫層析分析技術(shù)、將五個診斷意義相關(guān)的試劑通過一個 包裝組合在一起，同時進行乙型肝炎病毒五項標志物的檢測， 在不影響各自性能的情況 下，便于客戶的儲存和使用。HBsAg檢測試劑采用雙抗體夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的抗體。測試時，標本滴入試劑加樣處，標本與預包被的膠體金顆粒結(jié)合的抗HBsAg抗體反應。然后，混合物隨之在毛細效應下向上層析。 如是陽性，膠體金抗體在層析過程中 先于標本中的HB

2、sAg結(jié)合，隨后家何物會被固定在膜上的抗 HBsAg抗體結(jié)合，在測 試區(qū)內(nèi)（T）會出現(xiàn)一條紫紅色帶。這條帶是 HBsAg抗體-HBsAg-HBsAg抗體金標粒 子的復合物在膜上結(jié)合形成的。如是陰性，則測試區(qū)內(nèi)（T ）將沒有紫紅色帶。無論HBsAg是否存在于標本中，一條紫紅色帶都會出現(xiàn)在指控內(nèi)（ C）。質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）所 顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標本， 層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑 的內(nèi)控標準。HBsAb檢測試劑雙抗原夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的乙肝表面抗體。測試時，標本滴入試劑加樣處，標本與預包被的膠體金顆粒結(jié)合的HBsAg反應。然后，混合物隨之在毛細效應下向

3、上層析。 如是陽性，膠體金抗體在層析過程中先于標 本中的HBsAg結(jié)合，隨后結(jié)合物會被固定在膜上的 HBsAg抗體結(jié)合，在測試區(qū)內(nèi)（T） 會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。這條帶是 HBsAg-HBsAb-HBsAg金標粒子的復合物在膜上結(jié) 合形成的。如果陰性，則測試區(qū)內(nèi)（T）將沒有紫紅色條帶。無論HBsAg是否存在于標本 中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）。質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定 是否有足夠標本，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控標準。HBeAg檢測試劑采用雙抗體夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的乙肝e抗體。測試時，標本滴入試劑加樣處，標本與預包被的膠體金顆

4、粒結(jié)合的HBeAg抗體反應。然后，混合物隨之在毛細效應下向上層析。 如是陽性，膠體金抗體在層析過程中先 于標本中的HBeAg結(jié)合，隨后結(jié)合物會被固定在膜上的 HBeAg抗體結(jié)合，在測試區(qū) 內(nèi)（T）會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。這條帶是HBeAg抗體-HBeAg-HBeAg抗體金標粒子的復 合物在膜上結(jié)合形成的。如果陰性，則測試區(qū)內(nèi)（T）將沒有紫紅色條帶。無論HBeAg抗 體是否存在于標本中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）。質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標本，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控 標準。HBeAb,HBcAb檢測試劑才有競爭抑制法，試劑含有被事先固定于膜

5、上測試區(qū)（T）的 抗體。測試時，血清或血漿標本滴入試劑加樣處，隨之標本在毛細效應下向上層析。如標本中含有相應的抗體，貝U同膜上測試區(qū)（T）的抗體競爭與預包被在金標粒子的相應抗體 反應。如果標本中沒有相應抗體，預包被在金標粒子的復合物的相應抗原則同膜上測試 區(qū)（T）的抗體全部結(jié)合。陽性標本，測試區(qū)內(nèi)（T）將沒有紫紅色條帶，陰性標本，測試區(qū) 內(nèi)（T）將會出現(xiàn)明顯的紫紅色條帶。無論相應的抗體是否存在于標本中，一條紫紅色條 帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）。質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標本， 層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控標準。二試劑：英科新創(chuàng)乙肝五項檢測卡（膠體金法）。規(guī)

6、格為25人份/盒。產(chǎn)品標準編號：YZB/國 0378-2009。三.操作步驟：1將待測標本從儲存條件下取出，平衡至室溫（18-25 C）并編號。2、將膠體金測試卡從包裝盒中取出，打開鋁箔包裝袋，平置于臺面上。編號（與 樣品相對應）；3、用塑料滴管加2-3滴樣本血清或血漿，加入試劑板的五個加樣孔。4、等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結(jié)果應在測定開始后20分鐘開始讀取。30分鐘后 判斷無效。四參考范圍：正常人為陰性。五、結(jié)果判定HBsAg HBsAb HBeAg陽性：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。 陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。陰性：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色

7、條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。 陰性結(jié)果表明：標本中檢測不出待測物質(zhì)無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑已變質(zhì)損壞。 在此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試劑重新測試。如果問題仍然存在，應 立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓搪?lián)系。注意：測試區(qū)（T）內(nèi)的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀 察時間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應判定為陽性結(jié)果。HBeAb HBcAb陽性：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。 陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。陰性：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)

8、，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。 陰性結(jié)果表明：標本中檢測不出待測物質(zhì)。無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑已變質(zhì)損壞。在 此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試劑重新測試。如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓搪?lián)系序HBeMiHBcM出卿霄秤竄見楔式1*4FC）富性咼：惑毅越向恢晝；慢世明馬鮭撻苦者；隹染擺 芻即緒刪耳際三HI.Simt2+急性或慢性乙甦拝畑站 嗯不腳，復制.慣躬劉 即昭的30沁3-過去和現(xiàn)在未感染過HBV電”1換境期!懸鳩可乩抗-映木出酣朮圧往眩皿E攜帶著-Tio*5t+往感梁過金；急性HK感染恢復期：由）少數(shù)標本仍看傳塾性.KE

9、Y感染已過；抗KBs.M現(xiàn)前前蔚口期曠ox6*注射址乙肝吊自先疫；既往愿染；惻E性.T一急性冊逼后康復.6-m有L性垃寸畫卑：慢性腸M帶著；傳探由玉10*15*9+既往感翼，仍有免貶九測愿染，恢良須*無六. 臨床意義:乙肝肝炎病毒引起的感染帶來了嚴重的公共衛(wèi)生問題。母嬰傳播、性傳播和血液傳播是最主要的傳播途徑。盡早的發(fā)現(xiàn)感染可以有效的減少疾病的傳播。乙肝五項檢測卡（膠體金法）定性檢測人血清、血漿中的乙肝表面抗原、表面抗體、 e抗體、核心抗體、用于乙型肝炎病毒感染的輔助診斷。七. 病人及樣本要求：1 、本品適用于血清、血漿樣本，血漿樣本對臨床常用抗凝劑（EDTA肝素、枸椽酸鈉）無要求；樣本的采集

10、須遵循常規(guī)的醫(yī)療樣本的采集方法并遵守相關(guān)的醫(yī)學規(guī)定。2、采集靜脈血樣本必須在無菌條件下操作，并避免樣品溶血。3、如果血清和血漿樣品收集后 7天內(nèi)檢測，樣品須放在2-8 C保存；大于7天須 20 C以下冷凍保存。4、溶血、粘稠及高脂標本不適于本試劑。含特珠物質(zhì)（如強氧化劑）的標本可能 會導致檢測結(jié)果不穩(wěn)定，在檢測前須清除。八. 注意事項:1、 檢測必須符合實驗室管理規(guī)范和物物安全守則的規(guī)定，操作時必須戴手套、穿工 作服、嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。2、乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗體、 e抗原、e抗體、核心抗體檢測試劑盒（膠 體金法）適用于測試血清或血漿標本，其他標本或溶液進行檢測可能出現(xiàn)異常結(jié) 果。3、由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤， 同時也由于標本中存在干擾物質(zhì)， 檢測 結(jié)果有可能錯誤。4、請保證適量的標本用于檢測，過多或過少的標本量都有可能導致結(jié)果的偏差。5、測試結(jié)果應在測定開始后20分鐘讀取，30分鐘后判定無效。6本產(chǎn)品為目視讀取結(jié)果，為保證判定結(jié)果的正確，請勿在光線昏暗處對結(jié)果進行 判讀。7、試劑可在室溫下保