09游泳池水微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定操作規(guī)程[經(jīng)驗(yàn)相關(guān)]

1、1、目的： 游泳池水微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定。 2、適用范圍： 本標(biāo)準(zhǔn)適用于游泳池水細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定。 3、責(zé)任： 使操作者熟悉本規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。 4、內(nèi)容4.1定義 細(xì)菌總數(shù)：指水樣在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分和PH值、培養(yǎng)溫度和時(shí)間以及需氧性質(zhì)等），1ml檢樣中所含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫性需氧菌落總數(shù)。 細(xì)菌總數(shù)可作為判定游泳池水被污染程度的標(biāo)志，也可以為游泳池水消毒效果的判定和評(píng)價(jià)提供依據(jù)。 4.2儀器三角瓶。量筒。PH計(jì)或精密PH試紙。高壓消毒鍋。試管。滅菌平皿：直徑9cm。滅菌刻

2、度吸管：1mL、2ml、10mL。酒精燈。恒溫培養(yǎng)箱。放大鏡。4.3培養(yǎng)基和試劑4.3.1營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基4.3.1.1成分：蛋白胨 10g 牛肉浸膏 3g 氯化鈉 5g 瓊脂 1520g 蒸餾水 1000ml4.3.1.2制法：將上述各成分混合，加熱溶解，校正pH至7.4，過(guò)濾分裝，12120分鐘高壓滅菌，用自然沉降法測(cè)定時(shí)，傾注約15ml，于滅菌平皿內(nèi)，制成營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板。用撞擊法測(cè)定時(shí)，則參照采樣器采樣使用說(shuō)明制備營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板。4.3.2 10%（m/m）硫代硫酸鈉溶液，121高壓滅菌20min。4.5 操作步驟4.5.1 采樣瓶的要求和預(yù)處理：用于微生物分析的采樣瓶要無(wú)酸、無(wú)堿、無(wú)毒的玻璃

3、容器。采樣瓶在滅菌前加入足量的10%（m/m）硫代硫酸鈉（Na2S2O3）溶液.一般情況下125ml的采樣瓶加0.1ml，加完后121高壓滅菌20min。4.5.2 用滅菌吸管吸取均勻水樣1ml，注入到滅菌平皿內(nèi)，另取1ml注入另一滅菌平皿內(nèi)作平行接種。取1ml加到9ml無(wú)菌生理鹽水中作1：:10稀釋，混勻后取2ml分別加到兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)，每皿1ml。4.5.3 將溶化并冷卻至45的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿內(nèi)，每皿約15ml，另取一個(gè)不加樣品的平皿作空白對(duì)照。立即搖勻平皿，使水樣和培養(yǎng)基充分混勻。帶瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿，置361恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h。4.6 菌落計(jì)數(shù)方法先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后

4、再用放大510倍的放大鏡檢查，以防遺漏。記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí)，該平皿不宜計(jì)數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻時(shí)，則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘以2，所得結(jié)果代表全皿菌落數(shù)。4.7菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告4.7.1選擇平均菌落在30300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告（見(jiàn)表1中的例1）。4.7.2若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30300之間，則由兩菌落總數(shù)之比值來(lái)決定，若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2，則報(bào)告其中稀釋度較低的平皿菌落數(shù)（見(jiàn)表1中的例2、例3）。4.7.3若所有稀釋度的

5、平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告（見(jiàn)表1中的例4）。4.7.4若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告（見(jiàn)表1中的例5）。4.7.5若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，其中一個(gè)稀釋度平均菌落數(shù)大于300，而相鄰另一個(gè)稀釋度平均菌落數(shù)小于30，則以接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告（見(jiàn)表1中的例6）。4.7.6若所有稀釋度均無(wú)菌生長(zhǎng)，報(bào)告數(shù)為每毫升小于1cfu（見(jiàn)表1中的例7）。4.7.7菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)值報(bào)告；大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面零的個(gè)數(shù)，可用10的指數(shù)來(lái)表示（見(jiàn)表1中的報(bào)告方式欄）。在報(bào)告菌落數(shù)為“不可計(jì)”時(shí)，應(yīng)注明樣品的稀釋度。表1 細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果及報(bào)告方式例次不同稀釋度平均菌落數(shù)兩稀釋度菌落之比菌落總數(shù)cfu/ml報(bào)告方式cfu/ml10-110-210-3113651642016 40016 000或1.610422760295461.638 00038 000或3.810432890271602.227 10027 000或2.7104