方法學(xué)驗(yàn)證指導(dǎo)原則

1、一、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指采用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率 表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定。1. 化學(xué)藥含量測定方法的準(zhǔn)確度原料藥采用對照品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與準(zhǔn)確度的另一個方法 測定的結(jié)果進(jìn)行比較。制劑可在處方量空白輔料中，參加量被測物對照品進(jìn) 行測定。如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測制劑中加人量的被測物 對照品進(jìn)行測定，或用所建立方法的測定結(jié)果與準(zhǔn)確度的另一種方法測定 結(jié)果進(jìn)行比較。準(zhǔn)確度也可由所測定的精密度、線性和專屬性推算出來。2. 化學(xué)藥雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度可向原料藥或制劑處方量空白輔料中加人量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物對照品，可用所

2、建立方法測定的結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過驗(yàn)證的方法。在不能測得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的校正因 子或不能測得對主成分的相對校正因子的情況下， 可用不加校正因子的主成分自 身對照法計(jì)算雜質(zhì)含量。應(yīng)明確說明單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比% 或面積比 。3. 中藥化學(xué)成分測定方法的準(zhǔn)確度可用對照品進(jìn)行加樣回收率測定，即向被測成分含量的供試品中再精密 加人一定量的被測成分對照品，依法測定。用實(shí)測值與供試品中含有量之差， 除 以參加對照品量計(jì)算回收率。在加樣回收試驗(yàn)中須注意對照品的加人量與供試品 中被測成分含有量之和必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)；參加對照品的量要適當(dāng)， 過小那么引起較

3、大的相對誤差 ，過大那么干擾成分相對減少，真實(shí)性差 ?；厥章剩?= C - A /S X 100%式中：A為供試品所含被測成分量；B為參加對照品量；C 為實(shí)測值。4. 校正因子的準(zhǔn)確度對色譜方法而言，絕對或定量 校正因子是指單位面積的色譜峰代表的待測物質(zhì)的量。待測定物質(zhì)與所選定的參照物質(zhì)的絕對校正因子之比，即為相對校正因子。相對校正因子計(jì)算法常應(yīng)用于化學(xué)藥有關(guān)物質(zhì)的測定、中藥材及其復(fù)方制劑中多指標(biāo)成分的測定。校正因子的表示方法很多，本指導(dǎo)原那么中的校正因 子是指氣相色譜法和髙效液相色譜法中的相對重量校正因子。相對校正因子可采用替代物對照品和被替代物待測物標(biāo)準(zhǔn)曲線斜比值進(jìn)行比較獲得；采用 紫 外

4、吸收檢測器時，可將替代物對照品和被替代物待測物在規(guī)定波長 和溶劑條件下的吸收系數(shù)比值進(jìn)行比較，計(jì)算獲得。5. 數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度相當(dāng)于100%&度水平的供試品，用至少測定6份樣品的結(jié)果進(jìn)行評價(jià)；或設(shè)計(jì)3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試 品溶液進(jìn)行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。對于化學(xué)藥品，一般中間濃 度參加量與所取供試品中待測定成分量之比控制在 1:1左右，建議高中、低濃 度對照品參加量與所取供試品中待測定成分量之比控制在：1,1: 1，: 1左右，應(yīng)報(bào)告參加量的回收率，或測定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間置信度一般為 95%。對于中藥，一般中間濃度

5、加人 量與所取供試品中待測定成分量之比控制在 1 : 1 左右，建議高、中、 低濃度對照品加人量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1 .5: 1, 1 : 1,:1左右，應(yīng)報(bào)告供試品取樣量、供試品中含有量、對照品參加量、測定結(jié)果和回 收率 計(jì)算值，以及回收率 的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%或置信區(qū)間。 對于校正因子，應(yīng)報(bào)告測定方法 、測定結(jié)果和 RSD%在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量 低于%及多成分等分析中，回收率限度可適當(dāng)放寬。二、精密度精密度系指在規(guī)定的條件下，同一份均勻供試品，經(jīng)屢次取樣測定所得結(jié)果 之間的接近程度。精密度一般用偏差 、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。在相同 條件下，由同一個分析人員測定所得

6、結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性；在同一個實(shí)驗(yàn)室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度； 在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果 之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。含量測定和雜質(zhì)的定量測定應(yīng)考察方法的精密度。1. 重復(fù)性在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度相當(dāng)于100%濃度水平的供試品，用至少測定6 份的結(jié)果進(jìn)行評價(jià)；或設(shè)計(jì)3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn) 行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。采用9份測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)時，對于 化學(xué)藥，一般中間濃度參加量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1 : 1左右，建議髙、中、低濃度對照品參加量與所取供試品中待測定成分量之比控制在：1，1 :

7、 1，: 1左右，對于中藥，一般中間濃度參加量與所取供試品中 待測定 成分量之比控制在1 : 1左右，建議高、中、低濃度對照品參加量與所 取供試品中待測定成分量之比控制在 ：1, 1 : 1，: 1 左右。2. 中間精密度考察隨機(jī)變動因素如不同日期、不同分析人員、不同儀器對精密度的影響， 應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。3. 重現(xiàn)性國家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法， 應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)，如通過不同實(shí)驗(yàn)室 檢驗(yàn)獲得重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用樣品質(zhì)量的一致性及貯存運(yùn)輸中的環(huán)境對該一致性的 影 響，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。4. 數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報(bào)告偏差、標(biāo)

8、準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間。在基質(zhì)復(fù)雜、含量低 于及多成分等分析中，精密度接受范圍可適當(dāng)放寬。三、專屬性專屬性系指在其他成分如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等存在下，采用的析方法 能正確測定被測物的能力。鑒別反響、雜質(zhì)檢查和含量測定方法，均應(yīng)考察其專 屬性。如方法專屬性不強(qiáng)，應(yīng)采用多種不同原理的方法予以補(bǔ)充。1. 鑒別反響應(yīng)能區(qū)分可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物。不含被測成分的供試品，以及 結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈陰性反響。2. 含量測定和雜質(zhì)測定采用色譜法和其他別離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應(yīng) 標(biāo)明各成分在圖中的位置，色譜法中的別離度應(yīng)符合要求。在雜質(zhì)對照品可獲得的情況

9、下，對于含量測定，試樣中可參加雜質(zhì)或輔料， 考察測定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測定結(jié)果。 對于雜 質(zhì)檢查，也可向試樣中參加一定量的雜質(zhì)，考察各成分包括雜質(zhì)之間能否得到分 離。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行 測定，與另一個經(jīng)驗(yàn)證了的方法或藥典方法 比較結(jié)果。也可用強(qiáng)光照射、高溫、 高濕、酸堿水解或氧化等方法進(jìn)行加速破壞，以研究可能存在的降解產(chǎn)物和降 解途徑對含量測定和雜質(zhì)測定的影響。 含量測定方法應(yīng)比對兩種方法的結(jié)果， 雜 質(zhì)檢查應(yīng)比對檢出的雜質(zhì)個數(shù)，必要時可采用光二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測， 進(jìn) 行峰純度檢查。四、檢測限檢測限系指試樣中被測

10、物能被檢測出的最低量。 藥品的鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)檢査 方法，均應(yīng)通過測試確定方法的檢測限。檢測限僅作為限度試驗(yàn)指標(biāo)和定性鑒別 的依據(jù)，沒有定量意義。常用的方法如下。1. 直觀法用濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。2. 信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把巳知低濃度試樣測出的信號與空白樣 品測出的信號進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地 檢測出的被測物質(zhì)最低濃度或量。 一般以信噪比為3 :1或2 : 1 時相應(yīng)濃度或注人儀器的量確定檢測限。3. 數(shù)據(jù)要求上述計(jì)算方法獲得的檢測限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進(jìn)行驗(yàn)證。應(yīng)附測定圖譜，說明試驗(yàn)過程和檢測限結(jié)果。五、定量限定量限系指試樣中被測物能被定

11、量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度 和精密度要求。對微量或痕量藥物分析、定 量測定藥物雜質(zhì)和降解產(chǎn)物時，應(yīng) 確定方法的定量限。常用的方法如下 。1. 直觀法用濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地定量測定的最低濃度或量。2. 信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把低濃度試樣測出的信號與空白樣 品測出的信號進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地 定量的被測物質(zhì)的最低濃度或量。 一般以信噪比為10 :1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。3. 數(shù)據(jù)要求上述計(jì)算方法獲得的定量限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進(jìn)行驗(yàn)證。應(yīng)附測定圖譜，說明測試過程和定量限結(jié)果，包括準(zhǔn)確度和精密度驗(yàn)證數(shù)據(jù)。六、線性線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測定

12、響應(yīng)值與試樣中被測物濃度呈比例關(guān)系的程 度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎猛粚φ掌焚A備液經(jīng)精密稀釋， 或分 別精密稱取對照品，制備一系列對照品溶液的方法進(jìn)行測定，至少制備5份不同濃度的對照品溶液。以測得的響應(yīng)信號對被測物的濃度作圖，觀察是否呈線性， 再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回 歸計(jì)算。或者可采用描述濃度響應(yīng)關(guān)系的非線性模型。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖或其他數(shù)學(xué)模型。七、范圍范圍系指分析方法能到達(dá)一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時的上下限濃度或 量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑

13、含量測定，范圍一般為測定濃度的 80呀120%;制劑含量均勻度檢 査，范圍一般為測定濃度的70% 130%特殊劑型，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可 適當(dāng)放寬；溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍一般為限度的土30%如規(guī)定了限度范圍，那么應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%;雜質(zhì)測定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)際 測定數(shù)據(jù)，擬訂為規(guī)定限度的土 20%如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時進(jìn)行，用峰 面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算，那么線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含量限度或上 限的+20%。在中藥分析中，范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性 、準(zhǔn)確度、精密度 結(jié)果及要求確定。對于有毒的、具特殊成效或藥理作用的成分， 其驗(yàn)證范圍應(yīng)大 于被限定含量的區(qū)間。校正因子測定時，范圍一般應(yīng)根據(jù)其應(yīng)用對象的測定范圍確定。八、耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為所 建立的方法用于日常檢驗(yàn)提供依據(jù)。開始研究分析方法時，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測定條件要求苛刻，那么應(yīng)在方法中寫明，并注明可以接受變動的范圍，可