神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、55文件編號(hào)：labopmy020第 頁(yè)，共 頁(yè) 版本：a/0生效日期：2008-02-01 elecsys e 170/e 411神經(jīng)元特異性烯醇化酶(nse)xxxxxx 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 糖1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個(gè)過(guò)程18分鐘完成。 第1步：20l標(biāo)本、生物素化的抗nse特異性的單克隆抗體和釕（ru）標(biāo)記的抗nse特異性的單克隆抗體混勻，形 成夾心復(fù)合物。 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過(guò)生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測(cè)量池中，微粒通過(guò)磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化

2、學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。儀器通過(guò)2點(diǎn)定標(biāo)曲線以及試劑條碼提供的母定標(biāo)曲線計(jì)算出結(jié)果。2. 標(biāo)本要求血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集。不要使用血漿。離心1小時(shí)。樣本1525度穩(wěn)定6小時(shí)，28度可穩(wěn)定24小時(shí)，-20oc可穩(wěn)定3個(gè)月。只能凍融一次。不要使用加熱滅活的標(biāo)本。標(biāo)本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標(biāo)本、定標(biāo)液和質(zhì)控品在測(cè)定前應(yīng)預(yù)溫到室溫。3. 試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：m： 鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml。含防腐劑。r1：生物素化的抗nse單克隆抗體（灰蓋），1瓶，10ml，1.0mg/l，磷酸緩沖液50mmol

3、/l，ph 7.2；含防腐劑。r2：ru(bpy)32+標(biāo)記的抗nse單克隆抗體（黑蓋），1瓶，10ml。濃度1.0mg/l，磷酸緩沖液50mmol/l，ph 7.2,含防腐劑。校準(zhǔn)品：cal 1 陰性定標(biāo)液（白蓋），2瓶，1ml/瓶cal 2 陽(yáng)性定標(biāo)液（黑蓋），2瓶，1ml/瓶?jī)蓚€(gè)定標(biāo)品的nse的濃度范圍約為0.5ng/ml和50ng/ml，以緩沖液/蛋白（小牛血清白蛋白）為基質(zhì)，含疊氮鈉1%(w/w)。質(zhì)控品：elecsys 腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品1和2 （precicontrol tumor marker）貨號(hào)11776452其他所需材料：elecsys e170/e411分析儀elecsy

4、s nse稀釋液貨號(hào)03004864 elecsys 系統(tǒng)清洗液（sysclean）貨號(hào)11298500 elecsys e411分析儀 elecsys 系統(tǒng)緩沖液（procell）貨號(hào)11662988 elecsys 測(cè)量池清洗液（cleancell）貨號(hào)11662970 elecsys 添加劑液（syswash）貨號(hào)11930346 elecsys 適配器 （adapter for sysclean），貨號(hào)11933159, elecsys 反應(yīng)杯（cup），貨號(hào)11706829 elecsys 加樣頭（tip），貨號(hào)11706802 elecsys e170分析儀 elecsys 系統(tǒng)緩

5、沖液（procell）貨號(hào)04880340 elecsys 測(cè)量池清洗液（cleancell）貨號(hào)04880293 elecsys 試劑針清洗液（probewash）貨號(hào)03005712 elecsys pc/cc杯,貨號(hào)03023141 elecsys 反應(yīng)杯/加針頭/廢物袋（cup/tip），貨號(hào)12102137 elecsys 系統(tǒng)清洗適配器（sysclean adapter m），貨號(hào)030276514. 儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)elecsys 2010/e 170/e 411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀儀器校準(zhǔn)：每批 nse試劑盒必須用新鮮試劑和nse cal 1,

6、 cal 2定標(biāo)一次。另外，以下情況需要再次定標(biāo)：elecsys e170分析儀： 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒）各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進(jìn)行定標(biāo)：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)。5. 操作步驟（以e 170為例）5.1 校準(zhǔn)操作步驟：在編緝各項(xiàng)目的參數(shù)時(shí)，已經(jīng)在applicationcalib菜單中定義好了定標(biāo)類(lèi)型和幾點(diǎn)定標(biāo)。因此在對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)時(shí)，只需在定標(biāo)菜單calibration中進(jìn)行即可。進(jìn)入calibrationstatus菜單，用鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的項(xiàng)目，再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)（blank鍵）或兩點(diǎn)定標(biāo)（two point鍵）、全點(diǎn)定標(biāo)（full鍵），再選擇其它

7、項(xiàng)目進(jìn)行相應(yīng)選擇，最后點(diǎn)save，將定標(biāo)物放入在calibrationcalibrator中定義好的位置，點(diǎn)start，再點(diǎn)start，儀器開(kāi)始定標(biāo)。 在calibrationstatus菜單中看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)calibration result鍵看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)reaction monitor鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反應(yīng)曲線。5.2 樣本檢測(cè)程序： 單個(gè)樣本輸入，在主菜單下選擇workplace- testslection，在sequence no欄輸入標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)save鍵，樣本號(hào)自動(dòng)累加。批量常規(guī)標(biāo)本的輸入，在主菜單下選擇workplace- testslec

8、tion，在sequence no欄輸入起始標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)repeat，輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào)，點(diǎn)ok即可。進(jìn)樣分析，將標(biāo)本按在workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好，放入進(jìn)樣盤(pán)內(nèi),按start鍵，輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào)，再點(diǎn)start鍵，儀器自動(dòng)開(kāi)始推架檢測(cè)標(biāo)本。6. 質(zhì)量控制用elecsys腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品1和2 （precicontrol tumor marker）。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措

9、施。7. 計(jì)算方法儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算標(biāo)本的濃度（ng/ml或者ug/l）。8. 參考范圍德國(guó)3家臨床中心和羅氏內(nèi)部總計(jì)547例健康人群結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下：16.3ng/ml（95%的范圍），15.7-17.0ng/ml（95可信區(qū)間）9. 分析性能9.1精密度10. 干擾因素 測(cè)定結(jié)果不受黃疸 (膽紅素 72mg/dl), 高脂血癥 (脂肪乳劑 2000 mg/dl) 和生物素（ 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集標(biāo)本。濃度達(dá)1500u/ml的風(fēng)濕因子對(duì)測(cè)定無(wú)影響。體外對(duì)21種常用藥物進(jìn)行試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測(cè)結(jié)果。高達(dá)100000ng/ml大劑量不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)。由于檢測(cè)試劑中含有單克隆抗

10、體，因此某些接受單克隆鼠抗體治療或診斷的患者標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果可能有誤。elecsys nse試劑盒附帶有試劑添加劑以減少以上不良影響。少數(shù)病例中極高濃度的鏈霉抗生物素蛋白和釕抗體會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。nse濃度升高也見(jiàn)于良性肺部疾病和惡性神經(jīng)內(nèi)分泌疾病，如良性腫瘤，髓性甲狀腺癌，皮膚merkel細(xì)胞腫瘤和胰腺及腎上腺癌15-17。必須結(jié)合患者病史，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢查及其它臨床資料來(lái)綜合評(píng)估測(cè)定結(jié)果。11. 臨床意義 糖分解烯醇酶(2-phospho-d-glycerate hydrolase. ec 4.2.4.11 ，分子量約為80kd)有多種二聚異構(gòu)體，由三種亞 單位、 和組成。烯醇酶亞單位見(jiàn)于哺乳動(dòng)物

11、多種類(lèi)型組織中，而亞單位則主要見(jiàn)于心臟和肌肉組織。和 酶異構(gòu)體稱(chēng)為神經(jīng)元特異烯醇化酶（nse）或酶，高濃度存在于神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞以及這些細(xì)胞所引發(fā) 的腫瘤細(xì)胞中1。肺癌：nse可作為檢測(cè)小細(xì)胞肺癌首選標(biāo)志物1，而cyfra 21-1在非小細(xì)胞肺癌檢測(cè)中優(yōu)于nse2,3,9。60- 81小細(xì)胞肺癌病例nse濃度升高1,7。盡管nse濃度與轉(zhuǎn)移部位或腦部轉(zhuǎn)移沒(méi)有相關(guān)性，但是與臨床分期如疾病進(jìn)展有很 好的相關(guān)性1。首個(gè)化療周期開(kāi)始后24-72小時(shí)nse濃度有短暫的升高，原因是腫瘤細(xì)胞溶解1。這種nse濃度升高可持續(xù)1周 或首個(gè)化療周期結(jié)束時(shí)血清濃度迅速下降（治療前濃度增加）。相反地，對(duì)化療無(wú)

12、反應(yīng)的患者nse濃度持續(xù)升高或沒(méi)有下 將到參考范圍1,8。病情緩解期間，80-96患者nse濃度正常，而病情復(fù)發(fā)時(shí)nse濃度升高。一些病例其1-4月潛伏期中nse 濃度升高，常為指數(shù)式升高（10-94天濃度翻倍），這與生存期有關(guān)1。nse可用于評(píng)估小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后情況、治療有 效性和相關(guān)病因：診斷靈敏度93，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值921,7,8。神經(jīng)母細(xì)胞瘤：62患兒nse血清濃度高于30ng/ml，升高值 與疾病進(jìn)展有關(guān)。異常nse值大小或頻率與疾病嚴(yán)重程度有明顯的相關(guān)性；與無(wú)病生存期呈負(fù)相關(guān)性1。apudoma神經(jīng)內(nèi)分 泌腫瘤：34患者血清nse濃度升高（12.5ng/ml）1,4。精原細(xì)胞瘤：臨床

13、上68-73患者有明顯的nse濃度增加1，與疾 病臨床分期有關(guān)。其他腫瘤：22非肺部惡性疾病患者（任何期別腫瘤）nse濃度高于25ng/ml。腦部腫瘤如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、 腦脊膜瘤、纖維神經(jīng)瘤和神經(jīng)瘤僅偶爾有血清nse值升高。在原發(fā)腦瘤或腦轉(zhuǎn)移性瘤10和惡性黑色素瘤及腎上腺嗜鉻細(xì)胞 瘤（pc）患者中，可發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)cns的nse值升高1。14%器官排斥和46轉(zhuǎn)移性腎癌患者nse濃度升高，與病情有關(guān)， 可作為一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因子1,12。良性疾?。毫夹苑尾亢湍X部疾病nse濃度略有升高（12ng/ml），主要見(jiàn)于csf中，包括下列疾病患者：腦脊膜炎、彌漫性腦膜炎、脊髓與小腦退化、腦梗塞、腦血腫、蛛網(wǎng)膜

14、下出血、腦外傷、腦炎、器質(zhì)性癲癇、精神分裂癥和jakob-creutzfeld病1,5,6。12參考文獻(xiàn)1. lamerz r. nse (neuronen-spezifische enolase), -enolase. in: thomas l (ed.). clinical laboratory diagnosis, th-books, frankfurt, 1st english edition 1998: 979-981, 5. deutsche auflage 1998:1000-1003.2. ebert w, dienemann h, fateh-moghadam a, sche

15、ulen m, konietzko n, schleich t, bombardieri e. cytokeration 19 fragment cyfra 21-1 compared with carcinoembryonic antigen, squamous cell carcinoma antigen and neuron-specific enolase in lung cancer. eur j clin chem clin biochem 1994;32(3):189-199.3. vinolas n, molina r, galn mc, casas f, callejas m

16、a, filella x, et al. tumor markers in response monitoring and prognosis of non-small cell lung cancer: preliminary report. anticancer res 1998;18:631-634.4. ebert w, muley th, drings p. does the assessment of serum makers in patients with lung cancer aid in the clinical decision making process? anti

17、cancer res 1996;16(4b):2161-2168.5. ebert w, hoppe m, muley th, drings p. monitoring of therapy in inoperable lung cancer patients by measurement of cyfra 21-1, tpa-tp, cea and nse. anticancer res 1997(4b);17:2875-2878.6. martens p. serum neuron-specific enolase as a prognostic marker for irreversib

18、le brain damage in comatose cardiac arrest survivors. acad emerg med 1996;3(2):126-131.7. fizazi k, cojean i, pignon jp, rixe o, gatineau m, hadef s, et al. normal serum neuron specific enolase (nse) value after the first cycle of chemotherapy. cancer 1998;82(6):1049-1055.8. kintzel k, sonntag j, st

19、rau e, obladen m. neuron-specific enolase: reference values in cord blood. clin chem lab med 1998;36(4):245-247.9. jacobi c, reiber h. clinical relevance of increased neuron-specific enolase in cerebrospinal fluid. clin chim acta 1988;177(1):49-54.10. rasmussen t, grankvist k, ljungberg b. serum gam

20、ma-enolase and prognosis of patients with renal cell carcinoma. cancer 1993;72:1324-1328. 11. butterworth rj, wassif ws, sherwood ra, gerges a, poyser kh, garthwaite j, et al. serum neuron-specific enolase, carnosinase and their ratio in acute stroke. stroke 1996;27:2064-2068. 12. cunningham rt, wat

21、t m, winder j, mckinstry s, lawson jt, johnston cf, et al. serum neurone-specific enolase as an indicator of stroke volume. eur j clin invest 1996;26(4):298-303. 13. wolter w, luppa p, breul j, fink u, hanauske ar, pruer hw, et al. humorale tumormarker: praxis-orientierte vorschlge fr ihren effizienten einsatz. dtsch rztebl 1996;93(50):c2333-c2339