腫瘤學(xué)動物實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)

1、腫瘤學(xué)動物實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)腫瘤學(xué)動物實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)20152015年年7 7月月1313日日一、常用實(shí)驗(yàn)動物及選擇一、常用實(shí)驗(yàn)動物及選擇品系選擇品系選擇 名稱名稱毛色毛色免疫特性免疫特性適合實(shí)驗(yàn)適合實(shí)驗(yàn)BALB/cBALB/c白色野生型同基因型腫瘤實(shí)驗(yàn)C57BLC57BL黑色野生型同基因型腫瘤實(shí)驗(yàn)Nude BALB/c,Nude BALB/c,裸鼠裸鼠無毛胸腺缺陷，T細(xì)胞缺陷人移植瘤實(shí)驗(yàn)SCIDSCID白色T、B細(xì)胞減少，細(xì)胞免疫和體液免疫缺陷，巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞正常免疫功能重建，腫瘤學(xué)NOD/SCIDNOD/SCID白色與SCID相比，NK細(xì)胞減少免疫功能重建，腫瘤學(xué)NOG/NSGNOG/NSG白

2、色I(xiàn)L-2受體缺陷，與NOD/SCID相比，天然和獲得性免疫缺陷更高免疫功能重建，腫瘤細(xì)胞治療BALB/cC57BL裸鼠裸鼠SCIDNOD/SCIDNOG/NSG 成年動物的年齡、體重和壽命比較成年動物的年齡、體重和壽命比較 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 狗狗 成年日齡（天）成年日齡（天） 6590 85110 90120 120180 250360 成年體重（成年體重（g） 2028 200280 350600 20003500 800015000 平均壽命（年）平均壽命（年） 12 23 2 56 1317 最高壽命（年）最高壽命（年） 3 4 6 13 34 一、常用實(shí)驗(yàn)動物及選擇

3、一、常用實(shí)驗(yàn)動物及選擇年齡選擇年齡選擇 一般購買一般購買6-8周小鼠，用于實(shí)驗(yàn)周小鼠，用于實(shí)驗(yàn) 二、小鼠的飼養(yǎng)二、小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境環(huán)境 n 微生物控制等級選擇微生物控制等級選擇 v 普通級動物：示教、預(yù)實(shí)驗(yàn)普通級動物：示教、預(yù)實(shí)驗(yàn)v 清潔級動物：適用大多數(shù)科研。清潔級動物：適用大多數(shù)科研。v 無特定病原體動物（無特定病原體動物（SPFSPF）：為理想的健康）：為理想的健康動物，適用于所有科研、檢定。動物，適用于所有科研、檢定。v 無菌動物（無菌動物（GFGF）：適用于特殊研究。）：適用于特殊研究。 n 動物室環(huán)境控制要求值動物室環(huán)境控制要求值項(xiàng)目項(xiàng)目控制要求值控制要求值備注備注溫度溫度2127按

4、動物品種而有若干差別按動物品種而有若干差別濕度濕度4555%氣流速度氣流速度1025cm/秒秒避免直吹風(fēng)避免直吹風(fēng)換氣次數(shù)換氣次數(shù)815次次/小時(shí)小時(shí)100%新鮮空氣（如使用循環(huán)空氣，不新鮮空氣（如使用循環(huán)空氣，不應(yīng)超過總空氣量的應(yīng)超過總空氣量的1/3）照明照明75300lux定時(shí)人工照明（分置小瓦數(shù)日光燈）定時(shí)人工照明（分置小瓦數(shù)日光燈）氨濃度氨濃度20ppm以下以下噪音噪音50分貝以下分貝以下無動物時(shí)（有動物時(shí)，除狗居外，不高無動物時(shí)（有動物時(shí)，除狗居外，不高于于65分貝）分貝） 二、小鼠的飼養(yǎng)二、小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境環(huán)境 n 動物飼養(yǎng)密度動物飼養(yǎng)密度 動物飼養(yǎng)密度應(yīng)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，有一定的活動面

5、積，不動物飼養(yǎng)密度應(yīng)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，有一定的活動面積，不能過分擁擠。能過分擁擠。 各種動物所需籠具的面積和體積因飼養(yǎng)目的而異，哺乳各種動物所需籠具的面積和體積因飼養(yǎng)目的而異，哺乳期所需面積較大，期所需面積較大，一般小鼠一般小鼠4-6只只/籠籠。 二、小鼠的飼養(yǎng)二、小鼠的飼養(yǎng)密度密度 二、小鼠的飼養(yǎng)二、小鼠的飼養(yǎng)墊料、飼料、水墊料、飼料、水 n 墊料、飼料均需經(jīng)過輻照并密封包裝。墊料、飼料均需經(jīng)過輻照并密封包裝。n 水，自來水水，自來水121度高壓滅菌度高壓滅菌20min。n 飼料選擇營養(yǎng)均衡的配方飼料即可，特殊情況才選飼料選擇營養(yǎng)均衡的配方飼料即可，特殊情況才選 擇高蛋白，高脂肪飼料。擇高蛋白，

6、高脂肪飼料。三、腫瘤建模三、腫瘤建模 n 腫瘤模型類型：腫瘤模型類型：皮下移植瘤、肺轉(zhuǎn)移模型、原位移植瘤；皮下移植瘤、肺轉(zhuǎn)移模型、原位移植瘤；n 查閱文獻(xiàn)確定細(xì)胞接種濃度：查閱文獻(xiàn)確定細(xì)胞接種濃度：一般一般1 1* *10106 6 個細(xì)胞左右；個細(xì)胞左右；n 預(yù)實(shí)驗(yàn)：預(yù)實(shí)驗(yàn)：以以2 2倍比例選擇三個細(xì)胞濃度開展預(yù)實(shí)驗(yàn)；倍比例選擇三個細(xì)胞濃度開展預(yù)實(shí)驗(yàn)；n 準(zhǔn)備細(xì)胞：準(zhǔn)備細(xì)胞：細(xì)胞重懸于細(xì)胞重懸于PBSPBS、生理鹽水或基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，定量；、生理鹽水或基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，定量； n 接種：接種：皮下接種可選擇乙醚麻醉，皮下接種可選擇乙醚麻醉，100 ul/100 ul/位點(diǎn)；肺轉(zhuǎn)移位點(diǎn)；肺轉(zhuǎn)移 尾靜

7、脈注射，用小鼠固定器，尾靜脈注射，用小鼠固定器，200ul/200ul/只；只；n 對于皮下移植瘤，如需細(xì)胞數(shù)量較大，可以接種組織塊兒；對于皮下移植瘤，如需細(xì)胞數(shù)量較大，可以接種組織塊兒；n 皮下接種部位：皮下接種部位：FlankFlank，背頸部，腋窩。，背頸部，腋窩。四、標(biāo)記與分組四、標(biāo)記與分組 四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組單色染色法單色染色法四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組單色染色法單色染色法四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組雙色染色法雙色染色法四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組雙色染色法雙色染色法四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組其他方法其他方法 四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組分組分組 n 一致性原則一致性原

8、則 n 差異是絕對的，一致是相對的差異是絕對的，一致是相對的 n 利用隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行隨機(jī)分組，最大限度避免人為因素利用隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行隨機(jī)分組，最大限度避免人為因素 五、治療、給藥五、治療、給藥 n 治療起點(diǎn)和途經(jīng)根據(jù)不同的腫瘤和治療藥物不同而定；治療起點(diǎn)和途經(jīng)根據(jù)不同的腫瘤和治療藥物不同而定；n 皮下移植瘤，尾靜脈給藥：皮下移植瘤，尾靜脈給藥：50 mm3,100 mm3；n 皮下移植瘤，瘤內(nèi)給藥：皮下移植瘤，瘤內(nèi)給藥：200-300 mm3；n 腹腔給藥。腹腔給藥。 六、腫瘤的測量六、腫瘤的測量 n 皮下移植瘤：皮下移植瘤：游標(biāo)卡尺測量，稱重，小動物活體成像；游標(biāo)卡尺測量，稱重，小動物活體成

9、像； n 肺轉(zhuǎn)移瘤：肺轉(zhuǎn)移瘤：肺表面結(jié)節(jié)數(shù)，小動物活體成像；肺表面結(jié)節(jié)數(shù)，小動物活體成像；n皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)：皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)：生存期較長，有如下情況者處死小鼠，生存期較長，有如下情況者處死小鼠， 記為死亡：記為死亡：l 腫瘤長徑達(dá)到腫瘤長徑達(dá)到2cm，或體積大于，或體積大于1cm3；l 蜷縮不動；蜷縮不動；l 毛發(fā)蓬松臟亂無光；毛發(fā)蓬松臟亂無光；l 對外界刺激無反應(yīng)；對外界刺激無反應(yīng)；l 體重明顯下降的（體重明顯下降的（24h內(nèi)下降內(nèi)下降2-3g）。）。 七、小鼠生存期統(tǒng)計(jì)七、小鼠生存期統(tǒng)計(jì)治療終點(diǎn)治療終點(diǎn) n 轉(zhuǎn)移瘤實(shí)驗(yàn)：轉(zhuǎn)移瘤實(shí)驗(yàn)：一般生存期較短；一般生存期較短； 八、動物組織標(biāo)本采集八、動物組織標(biāo)本采集 l 收集心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，福爾馬林固定，收集心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，福爾馬林固定， HE染色觀察治療毒性；染色觀察治療毒性；n 治療實(shí)驗(yàn)：治療實(shí)驗(yàn)：l 收集腫瘤組織，福爾馬林固定，觀察腫瘤指標(biāo)；收集腫瘤組織，福爾馬林固定，觀察腫瘤指標(biāo)；n 免疫熒光實(shí)驗(yàn)：免疫熒光實(shí)驗(yàn)：收集新鮮組織，做冰凍切片；收集新鮮組織，做冰凍切片； 九、動物實(shí)驗(yàn)倫理九、動物實(shí)驗(yàn)倫理 n 悉心照料動物，保證正常生存條件；悉心照料動物，保證正常生存條件；n 皮下移植瘤體積最大長至長徑皮下移植瘤體積最大長至長徑2cm或體積或體積1