維生素B1片含量測定的方法驗證

1、藥藥物分析物分析實驗實驗實驗八實驗八 維生素維生素B B1 1片含量測定的方法驗證片含量測定的方法驗證設(shè)計性實驗設(shè)計性實驗實驗原理實驗原理維生素維生素B B1 1又稱鹽酸硫胺又稱鹽酸硫胺 （thiamine hydrochloridethiamine hydrochloride），），化學(xué)名稱為氯化化學(xué)名稱為氯化4- 4-甲基甲基-3(2-3(2-甲基甲基- 4- 4-氨基氨基-5-5-嘧啶基嘧啶基)- )-甲基甲基-5-(2-5-(2-羥基乙基噻唑鎓鹽酸鹽羥基乙基噻唑鎓鹽酸鹽NNH2CN+CH2CH2OHCH3NH2H3CCl-HCl性性 質(zhì)質(zhì)溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶溶解性：

2、水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反應(yīng)：硫色素反應(yīng)：紫外吸收特性：紫外吸收特性：A Amaxmax=246nm=246nm與生物堿沉淀試劑反應(yīng)與生物堿沉淀試劑反應(yīng)氯化物特性：氯化物特性：原理原理特征性鑒別特征性鑒別硫色素反應(yīng)硫色素反應(yīng)維生素維生素B B1 1在在堿液堿液中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，色素轉(zhuǎn)溶于色素轉(zhuǎn)溶于正丁醇正丁醇( (或異丁醇、異戊醇或異丁醇、異戊醇) )中，顯現(xiàn)中，顯現(xiàn)于酸中消失的于酸中消失的藍色熒光藍色熒光。（見劉文英主編。（見劉文英主編藥物藥物分析分析第六版，第六版，P P258258）含量測定含量測定維生素維生素B B1 1有紫外吸收

3、，有紫外吸收，A Amaxmax=246nm=246nm，1%1421cmE鑒別鑒別反反應(yīng)應(yīng)取本品約取本品約5mg5mg，加氫氧化鈉試液，加氫氧化鈉試液2.5ml2.5ml使其溶解，使其溶解，加鐵氰化鉀試液加鐵氰化鉀試液0.5ml0.5ml與正丁醇與正丁醇5ml5ml，強力振搖，強力振搖2min2min，放置使成兩液層，上層醇液即顯強烈的，放置使成兩液層，上層醇液即顯強烈的藍色熒光，藍色熒光，加酸使成酸性熒光即消失加酸使成酸性熒光即消失，再加堿，再加堿使成堿性，則熒光復(fù)現(xiàn)。使成堿性，則熒光復(fù)現(xiàn)。含量測定含量測定 1.精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg，標(biāo)示量為每1g藥物中含有

4、0.164g維生素B1)，置100ml量瓶中 加鹽酸溶液（91000）約70ml，搖勻15分鐘使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻 干燥濾紙過濾精密量取續(xù)濾液5.0ml，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（91000）定容至刻度，搖勻 得到供示品溶液。含量測定含量測定2.2.精密稱取維生素取維生素B1B1對照品對照品25mg25mg，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（91000）定容至刻度，搖勻 得到對照品溶液。3.將2份溶液用紫外分光光度計在246nm處分別測定吸光度，計算即得。實驗內(nèi)容與要求實驗內(nèi)容與要求鑒別試驗鑒別試驗吸收波長選擇吸收波長選擇精密度試驗：用同一份樣品溶液測定精密度試驗：用同一份樣品

5、溶液測定6 6次，計算次，計算RSD%RSD%重復(fù)性試驗：引用其他組同學(xué)數(shù)據(jù)（稱樣量，吸光重復(fù)性試驗：引用其他組同學(xué)數(shù)據(jù)（稱樣量，吸光度）計算標(biāo)示量度）計算標(biāo)示量%，計算，計算RSD%RSD%穩(wěn)定性試驗：考察樣品溶液穩(wěn)定性試驗：考察樣品溶液30min30min內(nèi)的穩(wěn)定性，計算內(nèi)的穩(wěn)定性，計算RSD%RSD%加樣回收率試驗：根據(jù)重復(fù)性試驗的結(jié)果，設(shè)計加加樣回收率試驗：根據(jù)重復(fù)性試驗的結(jié)果，設(shè)計加樣回收率試驗樣回收率試驗含量測定：根據(jù)測定結(jié)果計算含量，標(biāo)示量含量測定：根據(jù)測定結(jié)果計算含量，標(biāo)示量%。 線線性性關(guān)關(guān)系和范系和范圍圍分析方法的分析方法的驗證驗證1 精密度精密度試驗試驗2 重重現(xiàn)現(xiàn)性性試

6、驗試驗3 加加樣樣回收回收試驗試驗4 穩(wěn)穩(wěn)定性定性試驗試驗5精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg)，置100ml量瓶中 加鹽酸溶液（91000）少量，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻 分別取上述溶液3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加鹽酸溶液（91000）至刻度，搖勻?qū)⑵渲糜谧贤夥止夤舛扔嬛性?46nm處測量并用C做A的回歸曲線。線線性性關(guān)關(guān)系系穩(wěn)定性試驗穩(wěn)定性試驗精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg)，置100ml量瓶中 加鹽酸溶液（91000）少量，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻 將其置于紫

7、外分光光度計中在246nm處測量在在0 0、1515、3030、4545、60min60min時間點分別測定樣品的時間點分別測定樣品的A A246246在在0 0、1 1、2 2、4 4、8 8、12h12h分別測定樣品的峰面積分別測定樣品的峰面積. .則說明樣品溶液在多少時間內(nèi)穩(wěn)定；則說明樣品溶液在多少時間內(nèi)穩(wěn)定；則需要重新選取時間點進行計算，直到則需要重新選取時間點進行計算，直到RSD 2.0%RSD 2.0%，否則要盡快測定，否則要盡快測定精密度試驗精密度試驗?zāi)康哪康臋z測儀器、試劑、操作人員、實驗條件等的可檢測儀器、試劑、操作人員、實驗條件等的可信程度信程度要求要求用對照品按樣品溶液的制

8、備方法制備對照品溶用對照品按樣品溶液的制備方法制備對照品溶液，同濃度至少平行操作液，同濃度至少平行操作6 6份，份，濃度與信號值要濃度與信號值要在線性范圍內(nèi)在線性范圍內(nèi)RSD 2.0% RSD 2.0% 儀器分析儀器分析 同批、同法同批、同法穩(wěn)穩(wěn)定性定性試驗試驗重現(xiàn)性試驗重現(xiàn)性試驗?zāi)康哪康目疾鞓悠啡芤褐苽浞椒ǖ目煽砍潭瓤疾鞓悠啡芤褐苽浞椒ǖ目煽砍潭纫笠笸鷺悠钒聪嗤椒ㄖ苽錁悠啡芤海镣鷺悠钒聪嗤椒ㄖ苽錁悠啡芤?，至少? 6份份, ,濃度與信號值均要在線性范圍內(nèi)濃度與信號值均要在線性范圍內(nèi)RSD 2.0%RSD 2.0% 儀器分析儀器分析重重現(xiàn)現(xiàn)性性試驗試驗(示例示例)精密度精密度試驗試驗（示例（示例 ）加樣回收率試驗加樣回收率試驗?zāi)康哪康目疾鞙?zhǔn)確度，即用該方法測定的結(jié)果與真實值考察準(zhǔn)確度，即用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度或參考值接近的程度要求要求設(shè)計高、中、低三個濃度，每個濃度各分別制設(shè)計高、中、低三個濃度，每個濃度各分別制備三份供試品溶液進行測試，計算回收率備三份供試品溶液進行測試，計算回收率RSD 2.0%RSD 2.0%加加樣樣回收回收試驗試驗取含量測定時一半的稱樣量，取含量測定時一半的稱樣量，0.5g/20.5g/298102%98102%撰寫方法學(xué)驗證論文撰寫方法學(xué)驗證論文線性與范圍線性與范圍: : 設(shè)計對照品溶液