(完整版)植物組織培養(yǎng)試題及答案總結(jié)

1、緒論復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空： 1、根據(jù)培養(yǎng)的材料，植物組織培養(yǎng)分：愈傷組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、 細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)等類型。2、 植物組織培養(yǎng)的發(fā)展分為三個(gè)階段：萌芽階段、奠基階段 和快速發(fā)展和應(yīng)用階段。3、 1902 年，Haberlandt 提出了植物細(xì)胞 全能性”學(xué)說 ，1934 年，White 出版了植物組織培養(yǎng)手冊(cè)從而使植物組織培養(yǎng)為一門新興學(xué)科。二、名詞解釋： 1、植物組織培養(yǎng)（plant tissue culture）:是指通過無菌和人工控制的環(huán)境條件下，利用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，對(duì)離體的植物器官、組織、細(xì)胞及原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，使其再生細(xì)胞或完整植株的技術(shù)。由于培養(yǎng)材料已脫離了

2、母體，又稱為植物離體培養(yǎng)（Plant culture in vitro ）。2、 脫分化（dedifferentiation）:由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物 細(xì)胞的脫分化。3、 再分化（redifferentiation）:脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)又可以重新分化成根或芽等器官， 這一過程稱為植物細(xì)胞的再分化。 4、外植體（explant）:由活體（in vivo）植物體上切取下來的，用于組織培養(yǎng)的各種接種材料。包括各 種器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等 5、愈傷組織（callus）:原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團(tuán)薄壁細(xì)胞，在組培中則指在離體培 養(yǎng)過程

3、中形成的具有分生能力的一團(tuán)不規(guī)則的薄壁細(xì)胞，多在植物體切面上產(chǎn)生。三、問答題：1、簡述植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)？植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是細(xì)胞全能性學(xué)說，即植物體的每一個(gè)細(xì)胞都攜帶有一套完整的基因組，并 具有發(fā)育成為完整植株的潛在能力。 2、植物組織培養(yǎng)有哪些特點(diǎn)？（1） 培養(yǎng)條件可以人為控制（2） 生長周期短，繁殖率高：（3） 管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制： 3、植物組織培養(yǎng)的分類？（1） 根據(jù)培養(yǎng)對(duì)象不同：組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等；（2） 根據(jù)培養(yǎng)物培養(yǎng)過程：初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)；（3） 根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)：固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)。 4、植物組織培養(yǎng)主要應(yīng)用于

4、哪些方面？（1 ）快速繁殖運(yùn)用組織培養(yǎng)的途徑，一個(gè)單株一年可以繁殖幾萬到幾百萬個(gè)植株；（2 ）種苗脫毒針對(duì)病毒對(duì)農(nóng)作物造成的嚴(yán)重危害，通過組織培養(yǎng)可以有效地培育出大量的無病毒種苗；（3）培育和創(chuàng)制新品種利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠(yuǎn)緣雜交取得成功，從而育成一些罕見的新物種；（4 ）大量生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)通過植物細(xì)胞培養(yǎng)獲得的生物堿、維生素、色素、抗生素以及抗腫瘤藥物不下 50 多個(gè)大類，其中已有 30 多種次生物質(zhì)的含量在人工培養(yǎng)時(shí)已達(dá)到或超過親本植物的水平。植物細(xì)胞 次生物質(zhì)的研制與生產(chǎn)碩果累累，后來居上。（5）植物種質(zhì)資源的離體保存植物組織培養(yǎng)結(jié)合超低溫保存技術(shù)，可以給植物種質(zhì)保存帶來一次大

5、的飛躍。因?yàn)楸４嬉粋€(gè)細(xì)胞就相當(dāng)于保存一粒種子，但所占的空間僅為原來的幾萬分之一，而且在-193 度的液氮中可以長時(shí)間保存，不像種子那樣需要年年更新或經(jīng)常更新。（6 ）人工種子人工種子便于貯藏和運(yùn)輸，適合機(jī)械化播種；繁殖速度快，不受季節(jié)和環(huán)境限制，利于工廠化生產(chǎn)；體細(xì)胞胚由無性繁殖體系產(chǎn)生，可以固定雜種優(yōu)勢。第 1 章 實(shí)驗(yàn)室及基本操作復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空:1、組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必要的設(shè)備有超凈工作臺(tái)、高壓滅菌器空調(diào)機(jī)、 天平、顯微鏡、 蒸餾水發(fā)生器、酸度計(jì)等 2、培養(yǎng)基成分主要包括無機(jī)營養(yǎng)成分、有機(jī)營養(yǎng)成分)合物、其它物質(zhì)。3、 培養(yǎng)基最常用的碳源是蔗糖，使用濃度在 1%-5%常用& %。4、

6、糖在植物組織培養(yǎng)中是不可缺少的，它不但作為離體組織賴以生長的 透壓 。5、 在固體培養(yǎng)時(shí)瓊脂是使用最方便、最好的凝固劑和支持物，一般用量為 6-10g/ L 之間。6、 馴化的目的： 在于提高試管苗對(duì)外界環(huán)境條件的適應(yīng)性，提高其光合作用的能力，促使試健壯，提高苗的移裁成活率。 7、生長素/細(xì)胞分裂素的高低決定著外植體的發(fā)育方向，其比值高：有利于根的形成和愈傷組織的形成;低：有利于 芽的形成。8、 培養(yǎng)基滅菌一般在108 kPa 的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121C，維持 20-30 min。9、 選擇外植體時(shí)應(yīng)選擇選擇優(yōu)良的種質(zhì)、選健壯的植株、選最適的時(shí)期禾和選取適宜的大小。10、 誘導(dǎo)胚狀體比誘導(dǎo)芽

7、的優(yōu)點(diǎn)：(1)數(shù)量多、(2)速度快、(3)結(jié)構(gòu)完整。11、 試管苗的生態(tài)環(huán)境： 高溫且恒溫、高濕、弱光、無菌 。12、 培養(yǎng)基中加入活性炭的目的：利用其吸附能力，減少一些有害物質(zhì)的影響。 13、篩選培養(yǎng)基的方法：單因子試驗(yàn)法、多因子試驗(yàn)法、光譜實(shí)驗(yàn)法 14、植物培養(yǎng)技術(shù)：滅菌、接種、培養(yǎng)、馴化四個(gè)環(huán)節(jié) 15、試管苗的馴化注意：基質(zhì)、溫、光、水、肥、氣的綜合管理二、名詞解釋：1、MS 培養(yǎng)基(MS culture medium ):它是 1962 年由 Murashige 和 Skoog 為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。是 目前應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。特點(diǎn)是無機(jī)鹽離子濃度較高，有高含量的N、K，硝酸鹽量大，

8、營養(yǎng)豐富。 2、母液:是欲配制液的濃縮液。配成比所需濃度高10-100 倍。母液配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。好處：保證各物質(zhì)成分的準(zhǔn)確性配制時(shí)的快速移取便于低溫保藏。3、褐變：是指外植體在培養(yǎng)中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞里的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，有時(shí)使整個(gè)培養(yǎng)基變褐，從而抑制其他酶的活性，影響材料的培養(yǎng)。4、 玻璃化現(xiàn)象(vitrification phenomenon ):在長期的離體培養(yǎng)繁殖時(shí)，有些試管苗的嫩莖、葉片呈現(xiàn)半透 明水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。5、消毒：指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發(fā)生危害作用。6、滅菌：是指用物理或化

9、學(xué)的方法，殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質(zhì) 全部殺死。7、接種：在無菌條件下，用灼燒過的鑷子將外植體放到培養(yǎng)基上的操作過程。三、問答題1、一般組織培養(yǎng)的操作工序：(1 )、培養(yǎng)器皿的清洗；(2 )、培養(yǎng)基的配制、分裝和高壓滅菌；(3 )、無菌操作 材料的表面滅菌和接種；(4 )、將培養(yǎng)物放到培養(yǎng)室培養(yǎng)；(5)、試管苗的馴化、移栽和初期管理。 2、論述植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)在組織培養(yǎng)中的作用？并列舉常見的種類(1)生長素類：主要被用于誘導(dǎo)愈傷組織形成，促進(jìn)細(xì)胞脫分化；促進(jìn)細(xì)胞伸長；誘導(dǎo)根的分化，促進(jìn)生根。如：IAA (吲哚乙酸)；NAA(萘乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4

10、 D(2,4 二氯苯氧乙酸)(2 )細(xì)胞分裂素類：誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長。促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。抑制根的分化。抑制衰老， 減少葉綠素分解， 有保鮮效果。 如： 包括 6 BA(6 芐基腺嘌呤 )、Kt ( 激動(dòng)素 )、Zt (玉米素 ) 等。3、常用的培養(yǎng)基有哪些？說明其特點(diǎn)植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、碳水化碳源，而且還能維持培養(yǎng)基滲(1)MS 培養(yǎng)基： 1962 年由 Murashige 和 Skoog 為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。 是目前應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。 特點(diǎn)是無機(jī)鹽離子濃度較高(2)white 培 養(yǎng)基： 無機(jī)鹽濃度較低，適于生根培養(yǎng)。(3) N6 培養(yǎng)基：KN03 和(NH4)2SO4 含量

11、高，不含鉬。廣泛應(yīng)用于禾谷類植物的花粉和花藥培養(yǎng)。(4)B5 培養(yǎng)基：主要特點(diǎn)是含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。適宜雙子葉植物特別是木 本植物的培養(yǎng) 4、如何配制 MS 培 養(yǎng)基？(1) 配制母液： 一般母液配成比所需濃度高 10-100 倍的濃縮液， 配制時(shí)可分別配成大量元素、 微量元素、 鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。(2) 配制方法：1將母液按順序擺放2取適量的蒸餾水加入配制容器中3按需要量依次取母液及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)4加入蔗糖(30g/L)溶解5定容6調(diào) pH 值7加瓊脂 (6-10g/L) ，完全融化后，分裝至培養(yǎng)瓶中，封口8高壓滅菌5、如何對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒？(1) 將需要的材料

12、用水洗干凈。(2) 表面滅菌：用 70%酒精浸 30-60s 左右。(3) 滅菌劑處理： 0.1%升汞 10 分鐘、或在 2%次氯酸鈉液中浸泡 20-25 分鐘。(4) 用無菌水沖洗 3-5 次左右6、 接種后離體培養(yǎng)物對(duì)光、溫、濕等環(huán)境條件的要求？(1)光照：愈傷組織的誘導(dǎo)不需光照或弱光，器官分化需要光照， 一般 12- 16h/d,光照度 1000 5000IX。(2)溫度：一般 25 2C(3)濕度：培養(yǎng)室內(nèi)的濕度要求保持70 80的相對(duì)濕度。7、 論述離體培養(yǎng)污染產(chǎn)生的原因及防治措施。污染：污染原因從病源分面主要有細(xì)菌和真菌和兩大類。原因：( 1)外植體材料消毒不徹底( 2)培養(yǎng)基滅菌

13、不徹底( 3)操作環(huán)境不潔凈( 4)操作人員操作不規(guī)范、不熟練。預(yù)防措施： ( 1 )減少或防止材料帶菌(2) 外植體滅菌要徹底(3) 培養(yǎng)基滅菌要徹底(4) 玻璃器皿和金屬器皿的滅菌要徹底(5) 無菌室的消毒(6) 操作人員一定要嚴(yán)格按照無菌操作的程序進(jìn)行接種。8、 固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基相比有何特點(diǎn)？優(yōu)點(diǎn) :操作簡便，通氣問題易于解決，便于經(jīng)常觀察研究.缺點(diǎn) :培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸 (即吸收 )面積小，各種養(yǎng)分在瓊脂中擴(kuò)散較慢，影響?zhàn)B分的充分利用，同時(shí)培養(yǎng)物排出的一些代謝廢物，聚集在吸收表面，對(duì)組織產(chǎn)生毒害作用。9、在培養(yǎng)基中加入活性炭有什么作用？(1) 主要是利用其吸附作用，減少一些有害

14、物質(zhì)的影響(2) 活性炭使培養(yǎng)基變黑，有利于某些植物生根(3) 對(duì)形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好的效應(yīng) 10、植物組織培養(yǎng)技術(shù)主要包括哪些環(huán)節(jié)？各環(huán)節(jié)的主要工作內(nèi)容？(1) 培養(yǎng)基的配制及滅菌(2) 外植體的選擇及滅菌(3) 外植體的接種及培養(yǎng)(4) 試管苗的馴化與移栽 11、組織培養(yǎng)中常用的滅菌方法？分為物理的和化學(xué)的兩類，(1)物理方法如干熱(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮)、射線處理(紫外線、超聲波、微波)、過濾 和大量無菌水沖洗等措施；(2) 化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化 學(xué)藥品處理。12、 怎樣進(jìn)行培養(yǎng)基的高壓濕熱滅菌？方法是：

15、關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到49kPa 時(shí)，打開放氣閥，放出空氣(注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底)，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。當(dāng)壓力表上升達(dá)到108kPa 時(shí)，鍋內(nèi)溫度達(dá) 121C(在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢)，維持20-30min。13、 無菌操作時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？(1) 在接種 4h 前用甲醛熏蒸接種室；(2) 在接種前 15-20min，打開超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)以及臺(tái)上的紫外燈；(3) 接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實(shí)驗(yàn)服，并換穿拖鞋等；(4) 上工作臺(tái)后，用酒精棉球擦拭雙手，特別是指甲處。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作

16、臺(tái)面；(5) 接種工具蘸 95%酒精，灼燒；(6) 接種時(shí)將試管斜著，使試管口在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動(dòng)，灼燒數(shù)秒鐘。接完種后，將管口在火焰上再灼 燒數(shù)秒鐘。(7) 接種時(shí)，接種員雙手不能離開工作臺(tái)，不能說話、走動(dòng)和咳嗽等；(8) 接種完畢后要清理干凈并用酒精擦工作臺(tái)。14、 在植物組織培養(yǎng)中，通過哪些途徑可以得到完整的植株？(1) 外植體T愈傷組織T根、芽T試管苗1同時(shí)長芽和根2先長芽，再長根3先長根，再長芽(2) 外植體T胚狀體T試管苗(3) 外植體T根、芽T試管苗。15、 與常規(guī)苗相比，試管苗具有哪些特點(diǎn)？(1)生長細(xì)弱；(2)光合作用差(3)葉片氣孔數(shù)目少，活性差(4)根的吸收功能弱(5)對(duì)逆

17、境的適應(yīng)和抵抗能力差16、 如何提高試管苗移栽的成活率？(1)試管苗的生理狀況 應(yīng)選擇壯苗，以提高移栽后的成活率2)加入植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)如生長素(3) 降低無機(jī)鹽的濃度(4) 加入少量活性炭，尤其是用酸、堿和有機(jī)溶齊酰過的活性炭(5) 環(huán)境因子適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件能提高移栽的成活率(6) 移栽過程中讓試管苗從無菌向有菌逐漸過渡 17、接種程序：(1) 植物材料表面的消毒(2) 切割外植體(3) 將外植體移入培養(yǎng)基第 2 章基本原理復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、絕大多數(shù)培養(yǎng)植物再生植株時(shí)都先經(jīng)過愈傷組織階段。 2、愈傷組織形成大致經(jīng)歷誘導(dǎo)期、分裂期 和 分化期 三個(gè)時(shí)期。3、使用植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)時(shí)要注

18、意：種類和濃度生長素和細(xì)胞分裂素的比值 4、愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式主要有不定芽方式 和胚狀體 方式。:細(xì)胞水平的再分化、組織水平的再分化、器官水平的再分化(器官 發(fā)生)和植株水平的分化二、名詞解釋： 1、愈傷組織培養(yǎng)(callus culture):是指將母體植株上的外植體，接種到無菌的培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、生長和發(fā)育的一門技術(shù)。 2、繼代培養(yǎng)(subculture):愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時(shí)間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失， 以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)。這個(gè)過程叫做繼代培養(yǎng)3、 體細(xì)胞胚(somatic embryo )又稱胚狀體(embryoid ):指在組

19、織培養(yǎng)中，由一個(gè)非合子細(xì)胞(體細(xì)胞),經(jīng)過胚胎發(fā)生和胚胎發(fā)育過程(經(jīng)過原胚、球形胚、心形胚、魚雷胚和子葉胚5 個(gè)時(shí)期)，形成的具有雙極性的胚狀結(jié)構(gòu)。4、 體細(xì)胞胚胎發(fā)生： 植物組織培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體的過程，稱為體細(xì)胞胚胎發(fā)生。5、 細(xì)胞全能性(cell totipotency ):每一個(gè)植物細(xì)胞具有該植物的全部遺傳信息，在適當(dāng)條件下可表達(dá)出該 細(xì)胞的所有遺傳信息，分化出植物有機(jī)體所有不同類型細(xì)胞，形成不同類型的器官甚至胚狀體，直至形成 完整再生植株 6、形態(tài)建成：外植體細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下發(fā)生脫分化、再分化，產(chǎn)生芽和根，或者形成胚狀體，發(fā) 育成苗或完整植株。三、問答題 1、愈傷組織細(xì)胞的分化

20、一般分幾個(gè)時(shí)期？各有何特點(diǎn)？(1) 誘導(dǎo)期(起動(dòng)期)：是細(xì)胞準(zhǔn)備分裂的時(shí)期。細(xì)胞大小幾不變，內(nèi)部發(fā)生生理生化變化，迅速合成蛋 白質(zhì)和核酸。(2 )分裂期：外層細(xì)胞分裂，中間細(xì)胞常不分裂，形成小芯。細(xì)胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，缺少結(jié)構(gòu)，淺而透 明。在原培養(yǎng)基上，細(xì)胞必分化，及時(shí)轉(zhuǎn)移，其可無限制地進(jìn)行細(xì)胞分裂，維持不分化狀態(tài)。(3) 分化期：細(xì)胞在形態(tài)和生理功能上的分化，出現(xiàn)形態(tài)和功能各異的細(xì)胞。2、優(yōu)良的愈傷組織必須具備哪 4 個(gè)特性？(1) 高度的胚性或再分化能力，以便從這些愈傷組織得到再生植物(2) 容易散碎，以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良的懸浮系，并且在需要時(shí)能從中分離出全能性的原生質(zhì)體(3) 旺盛

21、的自我增殖能力，以便用這些愈傷組織建立大規(guī)模的愈傷組織無性系。（4）經(jīng)過長期繼代保存而不喪失胚性，便有可能對(duì)它們進(jìn)行各種遺傳操作。3、愈傷組織的形態(tài)發(fā)生有哪些情況？（1） 愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無根的芽或無芽的根；（2） 先形成芽，再在芽伸長后，在其莖的基部長出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況；5、組織培養(yǎng)細(xì)胞再分化包括四個(gè)水平（3） 先產(chǎn)生根，再從根基部分化出芽而形成小植株。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)于單子葉植物;（4） 先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來形成一株小植株。少見。單子葉植物：與雙子葉植物誘導(dǎo)發(fā)生過程類似，只是在形態(tài)上無魚雷形胚等階段

22、，成熟體胚上有盾片、 胚芽鞘和胚根等結(jié)構(gòu)。4、簡述細(xì)胞脫分化過程。細(xì)胞的脫分化過程可分為 3 個(gè)階段：第一階段為啟動(dòng)階段，表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)增生，并開始向細(xì)胞中央伸出細(xì)胞質(zhì)絲，液泡蛋白體出現(xiàn)；第二階段為演變階段，此時(shí)細(xì)胞核開始向中央移動(dòng)，質(zhì)體演變成原質(zhì)體；5、影響植物離體形態(tài)發(fā)生的因素有哪些？（不是重點(diǎn)）（1）植物種類和基因型（2）培養(yǎng)材料的生理狀態(tài)發(fā)育年齡：一般幼態(tài)比老態(tài)組織形態(tài)發(fā)生能力高；培養(yǎng)器官或組織類型：細(xì)胞分裂旺盛的器官較好； 培養(yǎng)時(shí)間和細(xì)胞倍性：一般取處于旺盛生長期的愈傷來誘導(dǎo)器官形成。（3）培養(yǎng)基a 營養(yǎng)成分：一般認(rèn)為，培養(yǎng)基中的銨態(tài)氮和K+有利于胚狀體形成，提高無機(jī)磷的含量可促進(jìn)器官

23、發(fā)生；莖尖培養(yǎng)和芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基主要是MS 及其修改的培養(yǎng)和 B5 培養(yǎng)基；碳水化合物種類及濃度對(duì)胚狀體發(fā)育有重要作用，缺糖或低糖無法形成胚狀體。b 植物激素及生長調(diào)節(jié)劑（起主導(dǎo)作用，通過影響內(nèi)源激素的平衡起作用c 培養(yǎng)基的性質(zhì)：愈傷組織誘導(dǎo)：在固體培養(yǎng)基上；細(xì)胞和胚狀體的誘導(dǎo)在液體培養(yǎng)基上（4）培養(yǎng)條件：光照；溫度；氣體；濕度等 6、分裂期愈傷組織的共同特征：細(xì)胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，缺少有組織的結(jié)構(gòu)，維持其不分化的狀態(tài)，顏色淺而透明。 7、胚狀體發(fā)生途徑與器官發(fā)生途徑形成植株的區(qū)別：? 胚狀體具有兩極性，即在發(fā)育的早期階段，從其方向相反的兩端分化出莖端和根端：而不定芽和 不定根都為單向極性。? 胚

24、狀體的維管組織與外植體的維管組織無解剖結(jié)構(gòu)上的聯(lián)系。而不定芽或不定根往往總是與愈傷 組織的維管組織相聯(lián)系。? 胚狀體維管組織的分布是獨(dú)立的Y ”字形。而不定芽的維管組織無此現(xiàn)象。 &器官發(fā)生形成小苗的方式? （ 1 ）愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無根的芽或無芽的根；? （ 2）先長芽，后長根，多數(shù)情況；? （ 3）先長根，再從根的基部長芽。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)于單子葉植物；? （ 4）先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來形成一株植株。第 3 章器官和組織培養(yǎng)復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空:1、植物器官培養(yǎng)主要是指 植物的根、莖、葉、花器和幼小果實(shí)的無菌培養(yǎng)。

25、 2、莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小分為莖尖分生組織培養(yǎng)和 普通莖尖培養(yǎng) 兩種類型。前者主要是對(duì) 莖尖長度不超過 0.1mm ,最小只有幾十微米的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，目的是 獲得無病毒植株；后者是對(duì) 丄毫米乃至幾十毫米長的莖尖、芽尖及側(cè)芽的培養(yǎng)，目的是離體快繁。3、 不定芽產(chǎn)生的途徑：一是從外植體上直接產(chǎn)生二是從 由外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織上產(chǎn)生。4、 離體葉培養(yǎng)是指包括 葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉等葉組織的無菌培養(yǎng)。5、 在離體葉培養(yǎng)中，6-BA 和 KT 利于芽的形成；2,4-D 利于愈傷組織的形成二、名詞解釋： 1、植物器官培養(yǎng)(Organ Culture ):是指對(duì)植物某一器官的全部或部

26、分或器官原基進(jìn)行離體培養(yǎng)的技 術(shù)。分為營養(yǎng)器官(根、莖、葉)和繁殖器官(果實(shí)、種子、花器官)培養(yǎng)。2、 花器官培養(yǎng)：是指對(duì)植物的整朵花或花的組成部分(包括花托、花瓣、花絲、花藥、子房、胚珠)進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。3、植物分生組織(meristem culture) 培養(yǎng)：是指對(duì)植物的分生組織進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)，包括植物根尖、莖尖等頂端分生組織和形成層組織的培養(yǎng)。其中莖尖培養(yǎng)廣泛應(yīng)用于植物再生和脫病毒研究。三：問答題： 1、離體葉組織中再生植株發(fā)生途徑有哪些？在離體葉組織脫分化和再分化培養(yǎng)中，莖和芽分化的4 個(gè)途徑：(1 )直接產(chǎn)生不定芽(2)離體葉-愈傷組織不定芽(3)離體葉- 愈傷組織-胚狀體

27、不定芽(4)離體葉T小鱗莖或球狀體愈傷組織 / 2、根培養(yǎng)的取材部位：答：一端切取長 1.2 厘米的根尖，接種于培養(yǎng)基中。這些根的培養(yǎng)物生長甚快，幾天后發(fā)育出側(cè)根。待側(cè)根 生長約 1 周后，即切取側(cè)根的根尖進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，它們又迅速生長并長出側(cè)根，又可切下進(jìn)行培養(yǎng)，如此 反復(fù)，就可得到從單個(gè)根尖衍生而來的離體根的無性系。這種根可用來進(jìn)行根系生理生化和代謝方面的實(shí) 驗(yàn)研究。培養(yǎng)條件為暗光和 2527C。 3、離體根培養(yǎng)的一般方法：(1)100ml 三角瓶，裝 4050ml 培養(yǎng)液；(2)液體培養(yǎng)，(3 )反復(fù)繼代培養(yǎng)，(4) 流動(dòng)式 4、根培養(yǎng)的培養(yǎng)基的選擇：無機(jī)離子較低White 培養(yǎng)基或者其他

28、培養(yǎng)基MS B5 也可用，但其濃度要稀釋 2/3 或 1/2 5、影響離體根生長的因素1、基因型：品種差異大。2、 培養(yǎng)基: 生根培養(yǎng)基一鹽濃度為MS 的一半或四分之一。3、 生長物質(zhì)：適當(dāng)?shù)纳L素，常用NAA 和 IBA，濃度為 0.1-10.0 毫克每升。但水仙，草莓等無需 激素。4、PH 中性偏酸。5、光照和溫度： 暗培養(yǎng)和 2527C6、莖尖培養(yǎng)的含義：是切取莖的先端部分或莖尖分生組織部分，進(jìn)行無菌培養(yǎng)。7、莖尖培養(yǎng)的類型：莖尖分生組織培養(yǎng)：對(duì)長度0.1mm 左右，含 1-2 個(gè)葉原基的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，即微莖尖培養(yǎng)：目的是獲得無病毒植株普通莖尖培養(yǎng)：對(duì)幾毫米至幾十毫米長的莖尖、芽尖及側(cè)芽

29、的培養(yǎng)，目的是快速繁殖和用于植物開 花生理的研究。 &莖段的培養(yǎng)材料的選擇、處理和培養(yǎng)基的調(diào)整選擇： 取生長健壯無病蟲的幼嫩枝條或鱗莖盤， 若是木本， 取當(dāng)年生嫩枝或一年生枝條， 剪去葉片，剪成 34cm的小段。處理：在自來水中沖洗 13h,在無菌條件下用 75%酒精滅菌 3060s，再用濃度為 0.1 %升汞浸泡 38min，或用飽和漂白粉浸泡 1020min，因材料老嫩和蠟質(zhì)多少而定時(shí)間。最后用無菌水沖洗數(shù)次， 以備接種。培養(yǎng)基的調(diào)整： 最常用的基本培養(yǎng)基為 MS 培養(yǎng)基，加入 3%蔗糖，用 0.7 %的瓊脂固化。9 莖尖微繁過程有哪幾個(gè)階段莖尖微繁殖過程一般包括五個(gè)階段：1 無菌培養(yǎng)的建

30、立。2 芽的增殖。3 中間繁殖體的增殖。4 誘導(dǎo)生根。5 試管苗的移栽第 4 章胚胎培養(yǎng)及離體授粉復(fù)習(xí)題及參考答案一、 填空： 1、胚胎培養(yǎng)包括 幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)以及子房培養(yǎng)。2、離體胚的培養(yǎng)分為二種類型：成熟胚 培養(yǎng)和 幼胚 培養(yǎng)。 3、胚珠培養(yǎng)分二類： 受精胚珠 的培養(yǎng)和 未受精胚珠 的培養(yǎng)。受精胚珠培養(yǎng)目的 一是打破種子的休眠二是挽救胚的發(fā)育，以獲得雜交種。未受精胚珠培養(yǎng)的目的是獲得單倍體植株 。4、 子房培養(yǎng)分 授粉子房 培養(yǎng)和 未授粉子房 的培養(yǎng)。前者培養(yǎng)的目的是挽救雜種胚，后者培養(yǎng)的目的是 獲得單倍體植株。5、離體授粉的類型有 離體柱頭授粉、離體子房授粉、離

31、體胚珠授粉。 6、離體胚培養(yǎng)方法:成熟胚和幼胚培養(yǎng)7、胚珠培養(yǎng)的培養(yǎng)基：Nitsch 或 N5.B5.MS ,子房培養(yǎng)的培養(yǎng)基：N6.MS二、 名詞解釋：1、胚胎培養(yǎng)(embryo culture ):指對(duì)植物的胚、子房、胚珠和胚乳進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植 物的技術(shù)。包括幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)以及子房培養(yǎng)。 2、胚培養(yǎng)(embryo culture ):采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠中分離出來，再放在無菌的條 件下，讓其進(jìn)一步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。 3、胚乳培養(yǎng)(endosperm culture ):是指將胚乳從母體上分離出來，放在無菌的人工環(huán)境條件下，

32、讓其 進(jìn)一步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。4、胚珠培養(yǎng)(ovule culture ):是指將胚珠從母體上分離出來，在無菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長 發(fā)育形成幼苗的過程。5、子房培養(yǎng)(ovary culture ):是指將子房從母體上分離出來，在無菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長 發(fā)育形成幼苗的過程。6、植物離體授粉：指將未授粉的胚珠或子房從母體上分離下來，進(jìn)行無菌培養(yǎng)，并以一定的方式授以無菌 花粉，使之在試管內(nèi)實(shí)現(xiàn)受精的技術(shù)。三、問答題： 1、胚培養(yǎng)的作用有哪些？1) 在遠(yuǎn)緣雜交育種中的應(yīng)用：克服雜種胚不能正常發(fā)育2) 克服珠心胚的干擾.提高育種效率3) 縮短育種周期4）測定休眠種子的萌

33、發(fā)率5）理論研究中的應(yīng)用2、簡述離體授粉的程序。 （課件上沒有）（1）確定開花、花藥開裂及授粉時(shí)間（ 2）去雄后將花蕾套袋隔離（ 3 ）制備無菌子房或胚珠（ 4）制備無菌花粉（5）胚珠或子房的試管內(nèi)授粉 3、胚胎培養(yǎng)的操作步驟。取子房常規(guī)表面消毒 解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。固體培養(yǎng)4、幼胚的發(fā)育方式：1）胚性發(fā)育：繼續(xù)進(jìn)行正常的胚胎發(fā)育2）早熟發(fā)育：迅速萌發(fā)成幼苗3）產(chǎn)生愈傷組織：再分化形成多個(gè)胚狀體或芽原基。5、胚胎培養(yǎng)的意義1、克服遠(yuǎn)緣雜種的不育性2、使胚胎發(fā)育不完全的植株獲得后代3、縮短育種年限，提高育種效率 6 、胚乳培養(yǎng)過程 胚乳外植體制備 :種子消毒 - 取出胚乳培養(yǎng)

34、：White 或 MS 誘導(dǎo)培養(yǎng)基-加入 2, 4-D 或 NAA0.5 2.0mg/L , BA 0.1 I.Omg/L 25-27C- 暗或弱光發(fā)育：約 6lOd 胚乳開始膨大，再誘導(dǎo)形成愈傷組織 -轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，分化培養(yǎng)基可加入0.5 3.0mgL 的 BA 及少量的 NAA 。待愈傷組織長出芽后，切下不定芽，插入生根培養(yǎng)基中，光 下培養(yǎng) 10 1 5d ，切口處可長出白色的不定根。7、檢查胚乳植株的染色體數(shù)目的方法取根尖、幼葉或愈傷組織0.2%-0.5%秋水仙素堿溶液在 25C浸泡 4-8hr流水沖洗 5-10min卡諾氏液或 FAA 液固定1mol 鹽酸，60C水浴 8-10

35、min染色、壓片、鏡檢、計(jì)數(shù)8、胚珠培養(yǎng)的基本過程1 ）、首先從花中取出子房進(jìn)行表面消毒，2）、然后在無菌的條件下進(jìn)行解剖，取出胚珠，放在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)， 將胚珠培養(yǎng)成植株的關(guān)鍵是選擇胚的發(fā)育時(shí)期，實(shí)驗(yàn)證明發(fā)育到球形胚期的胚珠較易培養(yǎng)成功，另外 為了培養(yǎng)成功，可取用帶胎座甚至帶部分子房的胚珠進(jìn)行培養(yǎng)。9、 子房培養(yǎng)的培養(yǎng)過程1 、制備外植體：在開花前后適宜時(shí)期取子房或幼花，消毒2、子房培養(yǎng)：固體或液體培養(yǎng)均可10、 子房的發(fā)育的發(fā)育途徑。性細(xì)胞（卵細(xì)胞、助細(xì)胞、極核、反足細(xì)胞） -胚狀體或愈傷組織單倍體植株；體細(xì)胞（珠被、子房壁） -胚狀體或愈傷組織二倍體植株；11、 胚珠的發(fā)育途徑。1）、

36、受精胚珠：一是形成種子；二是形成愈傷組織2）、未受精胚珠：形成單倍體植株。第 5 章花藥和花粉培養(yǎng)復(fù)習(xí)題及參考答案一、 填空：1、 花藥和花粉培養(yǎng)的共同特點(diǎn)是利用花粉（小孢子）染色體數(shù)目的單倍性，培育出 單倍體植株。2、 花藥和花粉培養(yǎng)時(shí)，花粉發(fā)育的最適宜時(shí)期是單核中、晚期（單核靠邊期）。3、 MS 和 H 培養(yǎng)基適合雙子葉植物花藥培養(yǎng);B5 培養(yǎng)基適合豆科和十字花科花藥培養(yǎng);N6 培養(yǎng)基適合禾谷類作物的花藥培養(yǎng)。4、花藥培養(yǎng)前的預(yù)處理：低溫冷藏是最常用的方法。5、 壓片染色法是檢測花粉發(fā)育時(shí)期的簡便有效方法，常用染色劑為醋酸洋紅。6、花藥培養(yǎng)包括:選擇材料-消毒-接種培養(yǎng)-愈合組織生成-分化

37、出單倍體植株。7、花粉的四大發(fā)育途徑包括 :營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育、生殖細(xì)胞發(fā)育、營養(yǎng)和生殖細(xì)胞同時(shí)發(fā)育及花粉均等分裂發(fā)育 &花粉培養(yǎng)大致過程包括 :花粉的分離-預(yù)處理-培養(yǎng)過程9、花藥培養(yǎng)一般選擇 花粉的單核期 進(jìn)行接種10、 花藥培養(yǎng)是 器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬 細(xì)胞培養(yǎng)11、 較高濃度蔗糖可誘導(dǎo)花粉形成愈傷組織；較低 濃度蔗糖可使愈傷組織分化成苗二、 名詞解釋： 1、花藥培養(yǎng)（anther culture）:是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)。 2、花粉培養(yǎng)（pollen culture） :是將花粉從花藥中分離出來進(jìn)行離體培養(yǎng)的過程。三

38、、 問答題：1、如何確定水稻單核靠邊期的花粉？（1） 在水稻中，在外部形態(tài)上可根據(jù)葉枕距為5-15cm，穎片淡黃綠色、雄蕊長度接近穎片長度的1/2這些條件鑒定。（2）利用這些外部標(biāo)志，選擇符合條件的花蕾，經(jīng)鏡檢確定花粉發(fā)育的準(zhǔn)確時(shí)期。（3）壓片染色法是檢測劃分發(fā)育時(shí)期的簡便有效方法，常用染色劑為醋酸洋紅。 2、比較花粉培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)相同點(diǎn)：（1）利用小孢子染色體數(shù)目的單倍性，培育出單倍體植株。（2）成苗途徑相同，即有 胚狀體成苗 和 愈傷組織再分化成苗兩條途徑。不同點(diǎn)：（1）花藥培養(yǎng)屬于器官培養(yǎng)；而花粉培養(yǎng)屬于細(xì)胞培養(yǎng)。（2）花粉培養(yǎng)沒有藥壁組織干擾；可計(jì)數(shù)小孢子產(chǎn)胚率；可觀察雄核發(fā)育的全過程

39、；單倍體產(chǎn)量高。 但技術(shù)更復(fù)雜。3、簡述花粉分離方法（1） 自然散落法（漂浮培養(yǎng)散落小孢子收集法）將花藥接種在預(yù)處理液或液體培養(yǎng)基上， 待花粉自動(dòng) 散落后，收集培養(yǎng)。（2）擠壓法 在燒杯或研缽中擠壓花藥，將花粉擠出后收集培養(yǎng)。（3） 機(jī)械游離A 磁攪拌法用磁力攪拌器攪拌培養(yǎng)液中的花藥，使花粉游離出來；B 超速旋切法 通過攪拌器中的高速旋轉(zhuǎn)刀具破碎花蕾、穗子、花藥，使小孢子游離出來4、花藥培養(yǎng)的大致過程1)預(yù)處理：低溫冷藏是最常用的方法，另有離心、低劑量輻射、化學(xué)試劑處理2 )表面消毒：因?yàn)槲撮_放的花蕾中的花藥為花被包裹，本身處于無菌狀態(tài)，可僅用70%酒精棉球?qū)⒒ǖ谋砻娌料醇纯?。也可按?duì)其他器官

40、消毒處理方法進(jìn)行，先用 70%的酒精浸一下后，在飽和漂白粉溶液中浸 1020min，或用 0.1 %升汞液消毒 7lOmin，然后用無菌水洗 35 次。將花蕾剪下放入水中，在冰箱45C下保持 34d。3 )接種：接種時(shí)把花蕾用解剖刀、鑷子小心剝開花蕾，取出花藥，注意去掉花絲，然后散落接種到培養(yǎng)基上，一個(gè) l0ml 的試管可接種 20 個(gè)花藥。培養(yǎng)溫度在 2328C左右，每天 1116h 的光照，光照強(qiáng)度 2000 4000Lx。脫分化培養(yǎng)時(shí)，可用MS + 2,4-D 的培養(yǎng)基，或 N6+2,4-D 的培養(yǎng)基，經(jīng) 1030d，可誘導(dǎo)生成愈傷組織，或少數(shù)生成胚狀體。4 )培養(yǎng)：一種植物的花藥可以在

41、一種培養(yǎng)基上長幼苗，而在另一種培養(yǎng)基上則形成愈傷組織。如水稻通常在含有生長素的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出愈傷組織，而在不含任何激素的 N6 培養(yǎng)基上長出胚狀體。但在辣椒的花藥培養(yǎng)中，只要培養(yǎng)基合適，甚至可以在同一花藥上一部分花粉形成胚狀體，而另一部分只形成愈傷組織。5)植株的誘導(dǎo)誘導(dǎo)愈傷組織分化芽或根，需將其轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基花粉-愈傷組織-苗花粉-胚狀體-苗第 6 章細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、一般平板培養(yǎng)要求細(xì)胞密度每毫升為1x103s100 x103個(gè)。2、條件培養(yǎng)基 是懸浮培養(yǎng)過一段時(shí)間組織或細(xì)胞的液體培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)主要應(yīng)用于植物有用物質(zhì)的生產(chǎn)、誘發(fā)和篩選突變體、原生

42、質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞器分離、食品生產(chǎn)等。4、由植物葉片分離單細(xì)胞的方法有機(jī)械法和酶解法。 5、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法:成批培養(yǎng)；連續(xù)培養(yǎng) 6、連續(xù)培養(yǎng)的種類：(1)半連續(xù)培養(yǎng)；(2)連續(xù)培養(yǎng) 7、連續(xù)培養(yǎng)的方法：(1)濁度恒定法；(2)化學(xué)恒定法二、名詞：1、看護(hù)培養(yǎng)法(nurse culture) :是指用一塊活躍生長的愈傷組織塊來看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，并使其生長和 增殖的方法。 2、平板培養(yǎng)法(plante culture):是把單細(xì)胞懸浮液與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，平鋪一薄層在 培養(yǎng)基底上的培養(yǎng)方法。 3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)(suspension culture):是指將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行

43、培養(yǎng)增殖的技術(shù)。4、 初始植板密度(inital planting density ):單細(xì)胞固體平板培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞懸浮液接種到瓊脂培養(yǎng)基上 最初細(xì)胞密度。5、臨界密度(critical density):單細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，初始植板密度低于某值培養(yǎng)細(xì)胞就不能進(jìn)行分裂和發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)，則該值就是臨界密度。(課件沒有)6、植物細(xì)胞培養(yǎng)(plant cell culture ):是指對(duì)植物器官或愈傷組織上分離出的單細(xì)胞(或小細(xì)胞團(tuán))進(jìn) 行離體培養(yǎng)，形成單細(xì)胞無性系或再生植株的技術(shù)。7、 條件培養(yǎng)基：曾懸浮培養(yǎng)過一段時(shí)間組織或細(xì)胞的液體培養(yǎng)基。&植板率：是指已形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)三、問答題

44、：1、如何得到單細(xì)胞無性系？在細(xì)胞培養(yǎng)中，常由分散性較好的愈傷組織或懸浮培養(yǎng)物來制備單細(xì)胞，也可以用機(jī)械法和酶解法從植 物器官直接制備單細(xì)胞。由分離的單細(xì)胞經(jīng)看護(hù)培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法或平板培養(yǎng)法，即可得到單細(xì)胞無性系 2、單細(xì)胞培養(yǎng)有哪些方法？各有何含義及特點(diǎn)單細(xì)胞培養(yǎng)：看護(hù)培養(yǎng)；微室培養(yǎng)；平板培養(yǎng)（1）看護(hù)培養(yǎng)法：指用一塊活躍生長的愈傷組織塊來看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，并使其生長和增殖的方法。 特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：簡便易行。效果好，易于成功。缺點(diǎn)：不能在顯微鏡下直接觀察細(xì)胞的生長過程。用途：誘導(dǎo)形成單細(xì)胞系。（2）微室培養(yǎng)：即將細(xì)胞培養(yǎng)在很少量的培養(yǎng)基中。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 在培養(yǎng)過程中，可以連續(xù)進(jìn)行顯微觀察一個(gè)細(xì)胞的

45、生長、分裂和形成細(xì)胞團(tuán)的全部過 程缺點(diǎn)：培養(yǎng)時(shí)間較短用途：主要用來觀察細(xì)胞生長、分裂、形成細(xì)胞團(tuán)的過程。（3）平板培養(yǎng)法：把單細(xì)胞懸浮液與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，平鋪一薄層在培養(yǎng)基底上的培養(yǎng)方法。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：可以定點(diǎn)觀察；分離單細(xì)胞系容易；缺點(diǎn)：培養(yǎng)細(xì)胞氣體交換不暢。用途:分離單細(xì)胞無性系，研究其生理、生化、遺傳上的差異而設(shè)計(jì)的一種單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。廣泛應(yīng) 用于細(xì)胞、原生質(zhì)體及融合產(chǎn)物的培養(yǎng)。 3、什么是植板率？小細(xì)胞團(tuán)的計(jì)數(shù)方法有哪幾種？植板率是指已形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)。小細(xì)胞團(tuán)計(jì)數(shù)方法：低倍顯微鏡直接計(jì)算；細(xì)胞團(tuán)顯影法4、什么是細(xì)胞懸浮培養(yǎng)？簡述成批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)的的特

46、點(diǎn)？細(xì)胞懸浮培養(yǎng)：是使離體的植物細(xì)胞懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行的無菌培養(yǎng)。（1）成批培養(yǎng)的特點(diǎn)：1細(xì)胞生長在固定體積的培養(yǎng)基上，直至養(yǎng)分耗盡2用攪拌的方法使細(xì)胞團(tuán)和細(xì)胞均勻分布3細(xì)胞數(shù)目呈現(xiàn)慢一快一慢一停止生長的變化，但必須更換新鮮培養(yǎng)基才能進(jìn)行下一批培養(yǎng)（2）連續(xù)培養(yǎng)的特點(diǎn)：1由于不斷加入新鮮培養(yǎng)基，保證了養(yǎng)分的充分供應(yīng)，不會(huì)出現(xiàn)懸浮培養(yǎng)物發(fā)生營養(yǎng)不足的現(xiàn)象2可在培養(yǎng)期間使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)生長期中。細(xì)胞增殖速度快3適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn) 5、影響單細(xì)胞培養(yǎng)的因子?1、條件培養(yǎng)基：條件培養(yǎng)基可有利于單細(xì)胞的生長與分裂? 2、細(xì)胞密度（ 臨界密度）：臨界密度：單細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，初始植板密度低于某值培養(yǎng)細(xì)胞就

47、不能進(jìn)行 分裂和發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)，則該值就是臨界密度。初始植板密度應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基的營養(yǎng)狀況而改變，培養(yǎng)基越復(fù)雜則植板細(xì)胞的臨界密度越低，反之則相反。 一般要求每毫升在 1000 個(gè)細(xì)胞以上。? 3、生長激素：生長激素加 1 種細(xì)胞分裂素和幾種氨基酸（如：丙氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、谷氨酰 胺）。臨界密度只需 25-30 細(xì)胞/毫升。?4、pH:偏酸。?5、CO2 可誘導(dǎo)細(xì)胞分裂。6、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)主要應(yīng)用1）、植物有用物質(zhì)的生產(chǎn)：在植物組織培養(yǎng)研究中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞中含有各種特殊的代謝產(chǎn)物。2）、誘發(fā)和篩選突變體：在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)產(chǎn)生一些突變體，常采用不同培養(yǎng)基來進(jìn)行選擇，也就是把懸浮細(xì)胞培養(yǎng)于缺少某種

48、營養(yǎng)物質(zhì)或生長因子，或是添加某種抑制劑的培養(yǎng)基里，使突變細(xì)胞和正常 細(xì)胞區(qū)別開來3）、原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞分離：利用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法，對(duì)細(xì)胞原生質(zhì)進(jìn)行分離，在適宜的培養(yǎng)基上 進(jìn)行培養(yǎng)，使之生成完整植株，或?qū)υw的生理特性進(jìn)行觀察、研究。4）、食品生產(chǎn)：通過對(duì)許多食用植物培養(yǎng)組織的細(xì)胞團(tuán)生產(chǎn)的研究。7、平板培養(yǎng)的基本技術(shù)序 （1）單細(xì)胞懸浮液的制備吞（2）懸浮細(xì)胞密度的調(diào)制（3）瓊脂培養(yǎng)基配制：0.7 %瓊脂條件培養(yǎng)基。（4 ）平板制作廂（5）培養(yǎng)第 7 章原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞融合復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空： 1、原生質(zhì)體的分離方法有 機(jī)械分離法和酶法分離法。2、原生質(zhì)體培養(yǎng)基常用的滲透劑是甘露醇和山梨醇。 3、原生質(zhì)體的純化方法有： 沉降法、漂浮法 和界面