子宮內(nèi)膜癌患者T細胞亞群紅細胞免疫與Ag┐NORs定量分析的臨床意義

1、子宮內(nèi)膜癌患者T細胞亞群、紅細胞免疫與AgNORs定量分析的臨床意義 作者：許麗艷張盈華尹國武張利朝殷纓郝曉柯 【關鍵詞】 子宮內(nèi)腫瘤 關鍵詞: 子宮內(nèi)腫瘤;T細胞;紅細胞;Ag-NORs 摘 要:目的 探討子宮內(nèi)膜癌患者的免疫功能變化及臨床意義. 方法 采用單克隆抗體直接免疫熒光染色法、紅細胞花環(huán)試驗及KL型腫瘤免疫圖象分析儀，對21例子宮內(nèi)膜癌患者和20名正常對照組分別測定其外周血T細胞亞群、紅細胞免疫C3 b受體花環(huán)率（E-C3 bRR%）與紅細胞循環(huán)免疫復合物花環(huán)率（ICR%）、核仁銀染區(qū)面積/細胞核面積比值（I.S%）. 結果 子宮內(nèi)膜癌患者CD+3 T細胞，CD+4 T細胞，CD+

2、4 /CD+8 比值，E-C3 bRR%，I.S%值明顯降低;CD+8 T細胞，E-ICR%明顯升高，與對照組相比較差異顯著（P<0.01）. 結論 子宮內(nèi)膜癌患者免疫功能低下;聯(lián)合檢測T細胞亞群、紅細胞免疫與Ag-NORs可較全面反映子宮內(nèi)膜癌患者的免疫功能狀態(tài)，并可指導臨床治療. Keywords:endometrial neoplasms;T lymphocyte;erythro-cyte;Ag-NORs Abstract:AIM To study the significance of T lymphocyte subset erythrocyte immune func

3、tion and argyrophilic protein in nucleolar organizer regions（Ag-NORs）in patients withcarcinoma of the endometrium.METHODS CD+3 T cell，CD+4 T cell，CD+8 T cell，CD+4 /CD+8 were determined by flow cytometery;E-C3 bRR%and E-ICR%were assayed by E-C3 bRR and ICR.Granules area of Ag-NORs/nuclear area（I.S%）w

4、ere studied by KL image analysis system.RESULTS CD+3 T cell，CD+4 T cell，CD+4 /CD +8 ，E-C3 bRR%，I.S%in the patients were significantly lower than those in the healthy group（P<0.01），however，the values of E-ICR%，CD+8 T cell were significantly higher than those of control group（P<0.01）.CON

5、CLUSION Immune function decreases in the patient.The detection of T lymphocyte sub-set，erythrocyte function and Ag-NORs can express the im-munologic function of carcinoma of the endometrium，and so is helpful for directing clinical therapy. 0 引言 在子宮癌腫中，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率有逐年上升的趨勢.而子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展與藥物的療效在一定程度上還取于子宮內(nèi)

6、膜癌患者自身免疫功能，當前全面系統(tǒng)的檢測免疫功能的方法較少.因此，尋找簡易可靠的免疫功能檢測方法，對了解病情，指導治療是當前迫切需要的.我們分別對子宮內(nèi)膜癌患者與正常對照組進行了外周血T淋巴細胞亞群、紅細胞免疫功能，核仁組成區(qū)相關嗜銀蛋白（Ag-NORs）檢測，并就三項檢測結果進行了分析和臨床意義研究，獲得了較全面的資料，報告如下. 1 對象和方法 1.1 對象 子宮內(nèi)膜癌21例，均來源于唐都醫(yī)院1999-08/2000-05婦科患者，經(jīng)臨床及病理證實，未經(jīng)放療、化療.年齡2472（平均58.9）歲.正常對照組:20例，均為健康女性工作人員，年齡2248（平均37）歲. 1.2 方法 1.2.

7、1 T淋巴細胞亞群測定 采用單克隆抗體直接免疫熒光染色法，應用PROFILE型自動流式細胞儀，F(xiàn)ITC標記的單克隆抗體CD3 ，CD4 ，CD8 及熒光標記的小鼠IgG由美國Coulter公司提供.激光熒光波長為488nm.按說明書進行操作，收集10000個淋巴細胞的光散射及熒光數(shù)據(jù)，用計算機分析測定結果. 1.2.2 紅細胞免疫功能測定 取靜脈血10L，置于含營養(yǎng)液的試管內(nèi)，將紅細胞稀釋成（1.2×107 ・mL -1 ）懸液待用，在將致敏凍干酵母菌用生理鹽水1mL溶解成（1×108 ・mL-1 ）懸液，再分別每管加0.05mL

8、冰凍備用，再加C3 b致敏酵母菌懸液（1×108 ・mL-1 ）0.05混勻37水浴箱30min，取出后涂片37孵育暗干，然后瑞氏染色，油鏡下計數(shù)200個紅細胞，凡結合2個以上酵母菌為陽性，再計數(shù)花環(huán)百分率（%）.E-ICR花環(huán)試驗與E-C3 bRR方法基本相同，其區(qū)別點為使用未致敏酵母菌懸液.試劑由陜西省人民醫(yī)院免疫研究室提供. 1.2.3 Ag-NORs測定 無菌取靜脈血0.5mL培養(yǎng)72h，分離固定淋巴細胞，制片染色，再用KL型腫瘤免疫圖象分析計算核仁銀染區(qū)面積/細胞核面積比值（I.S%）.試劑由北京開隆公司提供. 統(tǒng)計學處理:所有數(shù)據(jù)均用x ±

9、s表示，用t檢驗. 2 結果 2.1 子宮內(nèi)膜癌患者T細胞亞群測定結果 （Tab1） 子宮內(nèi)膜癌患者CD+3 T細胞，CD+4 T細胞，CD+4 /CD+8 比值，低于正常對照組;CD+8 T細胞高于正常對照組，差異均有顯著意義（P<0.01）. 表1 子宮內(nèi)膜癌患者T細胞亞群測定結果略 2.2 子宮內(nèi)膜癌患者EC3 bRR（%），EICR（%）和I.S%測定結果 （Tab2，F(xiàn)ig1） 子宮內(nèi)膜癌患者E-C 3 bRR（%），I.S%減低，E-ICR%增高，與正常對照組比較（P<0.01）. 表2 子宮內(nèi)膜癌患者E-C3 bRR（%），E-ICR（%）和I.S%測

10、定結果略 圖1 略 3 討論 腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與免疫功能密切相關，機體的抗腫瘤免疫則以細胞免疫占主導地位.淋巴細胞免疫具有極其重要的作用1 .T細胞執(zhí)行特異性細胞免疫和免疫調節(jié)功能，CD+4 T細胞和CD+8 T細胞代表其兩個主要亞群.正常情況下，兩者處于動態(tài)平衡.當兩者數(shù)量發(fā)生變化，破壞了這種平衡機制，可導致細胞免疫功能紊亂和免疫失調.本研究顯示子宮內(nèi)膜癌患者CD+3 T細胞，CD+4 T細胞，CD+4 /CD+8 比值減低，CD+8 增高，構成了子宮內(nèi)膜癌T細胞亞群的特點.表明T細胞亞群與子宮內(nèi)膜癌有一定關系，與文獻報道相似2 .子宮內(nèi)膜癌患者CD+4 /CD+8 比值減低，其原因是由于C

11、D+4 細胞減少或CD+8 細胞增高，可能是由于TH細胞減少，TS細胞增高，負調節(jié)作用大于正調節(jié)作用，導致子宮內(nèi)膜癌患者淋巴細胞免疫功能降低. 紅細胞免疫功能是通過紅細胞表面的CR1 和E-CR3 將癌細胞攜帶至肝脾加以消毀;通過CD58 ，CD59 ，CR1 ，CR3 與淋巴細胞、吞噬細胞上的CD2 ，CR1 ，CR2 ，CR3 相互作用，參與免疫調控3 .我們檢測了子宮內(nèi)膜癌患者及正常人的E-C3 bRR（%）和E-ICR（%），發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌患者E-C3 bRR（%）低于正常對照組（P<0.01）.其原因可能為子宮內(nèi)膜癌患者血清中存在著抑制因子，導致紅細胞CR1 分布密度降

12、低，或抑制了CR 1 的活性，從而使C3 b粘附的腫瘤細胞結合減少.而子宮內(nèi)膜癌患者E-ICR%明顯高于正常對照組（P<0.01）.其主要原因為紅細胞膜表面E-C3 bRR分布密度下降，使單核-巨噬細胞不能及時有效地吞噬和清除紅細胞表面攜帶的免疫復合物（IC），從而導致大量IC在血循環(huán)中沉積.Virella4 等證實紅細胞對機體的體液免疫，細胞免疫都有一定的調節(jié)作用，且多與紅細胞膜表面E-C3 bRR分布有關.因此，子宮內(nèi)膜癌患者的E-C3 bRR（%）減低，無疑使T，B細胞的調控失去平衡，而導致整個免疫系統(tǒng)功能降低5 . Ag-NORs是核仁組成區(qū)嗜銀蛋白的簡稱，它是位于第13

13、，14，15，21及22號染色體上特殊部位的核糖體基因（rDNA），通過其轉錄而形成核糖體RNA.Ag-NORs可能是RNA聚合酶的亞基，起保持rD-NA鏈延伸的作用，對核糖體蛋白的形成及蛋白質合成起至關重要的作用6，7 .故Ag-NORs可作為核仁組成區(qū)及其rDNA轉錄活動的標志，用來反映核仁結構和功能的變化8 .淋巴細胞免疫功能可由各自的rDNA轉錄活性表達出來，基于此原理，我們對21例子宮內(nèi)膜癌患者與20例健康人進行檢查，發(fā)現(xiàn)I.S%明顯下降，可能同機體免疫功能受到抑制有關.這一結果與子宮內(nèi)膜癌患者T細胞亞群、紅細胞免疫功能檢測結果相一致. 以上研究認為Ag-NORs的檢測聯(lián)合T細胞亞群

14、、紅細胞免疫功能的檢測能較全面的反映子宮內(nèi)膜癌患者的免疫功能狀態(tài)，對了解病情、指導治療有一定的作用. 參考文獻: 1Su LY，Xu YD，Geng YZ.Preliminary study on lymphocyte subsets and tumor immunology J.J Immunol，1992:8（4）;251-253. 2Yin FB，Tang CS，Zuo CT.Preipheral T-cell subpopulations and NK cell activities in patients with ovarian malignant tumors J.Shiyong

15、 Fuchan Ke Zazhi（J Pract Obstet Gynecol），1997;13（3）:145-147. 3Deckert M，KuBar J，Bernar A.Functional cooperation between CD58 and CD59 in adhesion of T cell J.J Immunol，1992;148（3）:672-677. 4Virella G，Rugeles MT，Hyman B，Via M，Goust J，F(xiàn)rankis M.The interaction of CD2 with it SLFA-3ligand expressed by

16、autologous erythrocytes results in ehancement of B cell respons-es J.Cell Immunol，1988;116（2）:308-400. 5Fearon Dt.Identification of the membrancer glycoprotein that is the C3 b receptor of the human erythrocyte，polymorphnuclear leukocyte，B lymphocyte and monocyte J.J Exp Med，1980;152（1）:20-24. 6Egan MJ，Crocker J.Nucleolar organizer regions in cutaneous tumors J.J Pathol，1988;154（3）:247-253. 7Anonymous.NORs-a new method for the pathologist J.Lan