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1、綜合實驗一綜合實驗一 兔血清免疫球蛋白兔血清免疫球蛋白分離與純化分離與純化主講教師：申慧芳主講教師：申慧芳 岳續(xù)朋岳續(xù)朋 生物工程教研室生物工程教研室 蛋白質(zhì)工程實驗課蛋白質(zhì)工程實驗課實驗一實驗一 兔血清免疫球蛋白分離兔血清免疫球蛋白分離四、實驗步驟四、實驗步驟1 兔免疫血清的制備兔免疫血清的制備（1）取制備好的血清）取制備好的血清20ml，逐滴加入（，逐滴加入（NH4）2SO4飽和溶液飽和溶液20ml，使成，使成50%（NH4）2SO4溶液，邊加邊攪拌，充分混合后，溶液，邊加邊攪拌，充分混合后，靜置靜置10min。（2）3000r/min離心離心10min，棄去上清。，棄去上清。（3）用）用

2、6ml磷酸鹽緩沖液溶解沉淀，再加（磷酸鹽緩沖液溶解沉淀，再加（NH4）2SO4飽和溶液飽和溶液3ml，使成，使成33%（NH4）2SO4溶液，充分混合，靜置溶液，充分混合，靜置10min。（4）3000r/min離心離心10min，棄上清。，棄上清。（5）為進一步純化，可重復(fù)步驟）為進一步純化，可重復(fù)步驟3 23次。次。（6）用）用5mlPBS溶解沉淀，裝入透析袋。溶解沉淀，裝入透析袋。（7）透析除鹽，中間換液數(shù)次，至奈氏試劑測透析外液）透析除鹽，中間換液數(shù)次，至奈氏試劑測透析外液無黃色。無黃色。 蛋白含量（蛋白含量（mg /mL）（1. 45OD 280nm 0. 74 OD 260nm） 樣品稀釋度樣品稀釋度 注：式中注：式中1.45與與0.74為常數(shù)，為常數(shù)，nm為波長。為波長。蛋白質(zhì)及其定量鑒定：取樣品少許作適量稀釋，以紫蛋白質(zhì)及其定量鑒定：取樣品少許作適量稀釋，以紫外分光光

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