傷科消腫顆粒的急性毒性與長期毒性實(shí)驗(yàn)研究

1、傷科消腫顆粒的急性毒性與長期毒性實(shí)驗(yàn)研究(廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 廣西 南寧530023)【摘要】目的：觀察傷科消腫顆粒的急性毒性及長期毒性可能造成對(duì)機(jī)體 的毒性反應(yīng)，為臨床提供安全依據(jù)。方法：用25g/kg的劑量灌胃小鼠進(jìn)行毒性 實(shí)驗(yàn)，觀察小鼠的一般情況；用2.5g/kg, 5g/kg. 10g/kg每天灌胃大鼠，連續(xù)給 藥180天，停藥后觀察藥物對(duì)大鼠牛長發(fā)育以及血常規(guī)、血液生化指標(biāo)、主要臟 器病理形態(tài)影響。結(jié)果：急性毒性實(shí)驗(yàn)小鼠無一死亡；小鼠1天內(nèi)灌胃?jìng)葡[ 顆粒最大耐受量75g/kg；長期毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，傷科消腫顆粒對(duì)大鼠牛長發(fā)育 以及血常規(guī)、血液?；笜?biāo)、主要臟器病理形態(tài)與空

2、白對(duì)照組比較均無明顯差異。 結(jié)論：傷科消腫顆粒臨床擬用量是安全的?！娟P(guān)鍵詞】消腫顆粒；急性毒性；長期毒性；實(shí)驗(yàn)研究【中圖分類號(hào)】r99【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】2095-1752 (2016) 34-0084-03骨折后腫脹，如不及時(shí)處理輕則影響皮膚肌肉組織的愈合，重則引起肌間隔 綜合癥。所以處理骨折后的腫脹刻不容緩，中醫(yī)在骨折早期普遍觀點(diǎn)認(rèn)為腫脹屬 于“瘀血”，“水腫”的范疇，病機(jī)為損傷而致氣滯血瘀，水瘀互結(jié)；治當(dāng)活血祛 瘀，利水消腫，即“活血利水”觀點(diǎn)。我院骨二科在此理論的基礎(chǔ)上，根據(jù)肺能 通調(diào)水道，脾能助胃運(yùn)化水谷，運(yùn)化體內(nèi)水濕，升舉清陽，統(tǒng)攝血液的功能，研 究出了 “傷科消腫方”。此

3、方由土鱉蟲、赤芍、澤蘭、車前子、粉防己、桔梗等 15味藥組成，諸藥配合可迅速達(dá)到活血止痛利水消腫之功。它在活血利水的基 礎(chǔ)上更加突出宣肺健脾新的中醫(yī)觀點(diǎn)，于是消腫止痛更加迅速，傷科消腫方 己經(jīng)成為我院骨二科在消腫止痛上的經(jīng)驗(yàn)方，但無成熟的劑型，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足廣 大骨折術(shù)后腫脹患者的要求。因此有必要將“傷科消腫方”按照醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑 注冊(cè)管理辦法的有關(guān)要求，進(jìn)行顆粒劑工藝的研制，建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行 顆粒劑穩(wěn)定性試驗(yàn)，主要藥效學(xué)試驗(yàn)、毒性試驗(yàn)等為臨床提供一個(gè)安全有效的新 制劑。本實(shí)驗(yàn)主要是觀察傷科消腫顆粒的急性毒性及長期毒性可能造成對(duì)機(jī)體的 毒性反應(yīng)，為臨床提供安全依據(jù)。1 實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)藥物

4、1.1.1藥物傷科消腫顆粒:中藥復(fù)方制劑,組方為:土鱉蟲15g、赤芍15g、澤 蘭:log、車前子10g、益母草10g、粉防己15g、金銀花15g、連翹10g、薄荷5g （后下）、柴胡10g、桔梗10g、枳殼10g、黃連3g、茯苓10g、甘草5g。（由本 院制劑中心制備成傷科消腫顆粒），以蒸憎水配制成40%混懸液供動(dòng)物灌胃使用。1.1.2傷科消腫顆粒性狀為褐色粉末，氣微香，味微苦。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.2.1動(dòng)物 昆明種小鼠40只，體重2022g,雌雄兼用廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物中心提供（醫(yī)動(dòng)字第08-004號(hào)）；sprague-daw ley（sd）大鼠80只,其中雄性 40只，雌性40只，體重:

5、120g,廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供（醫(yī)動(dòng)字第08-004 號(hào)）1.2.2飼養(yǎng)條件 雌、雄分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)于獨(dú)立籠內(nèi)，室溫（2325度，濕度 40%60%,人工控制光照晝夜各12h。自由飲水。實(shí)驗(yàn)開始前飼養(yǎng)觀察1周。1.3實(shí)驗(yàn)儀器日立7600-020ise型全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）；a-12456型血液分析 儀（日本希森美康公司）；病理圖文分析系統(tǒng)（日本奧林巴斯公司）；sl-202型電子 天平（上海）；5804r低溫高速離心機(jī)（德國德國eppendorf公司）；三用電熱恒溫 水溫箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）2 .實(shí)驗(yàn)方法2.1急性毒性實(shí)驗(yàn)2.1.1半數(shù)致死量（ld50）的測(cè)定 根據(jù)孫氏綜合法，

6、首先進(jìn)行預(yù)試實(shí)驗(yàn)，算出 d0和d100o在do和d100的劑量范圍內(nèi)設(shè)5個(gè)劑量組,組間劑量比值1:0.8, 觀察一次給藥后7d內(nèi)動(dòng)物死亡情況，計(jì)算ld50o如ld50>10.0g kg則為實(shí)際 無毒2.1.2最大耐受量測(cè)定（安全限度試驗(yàn)）由于傷科消腫顆粒無法測(cè)出d100, 而且樣品溶解度不能進(jìn)一步提高，以及每只小鼠每次灌服的體積不能超過0.5ml, 所以傷科消腫顆粒改為測(cè)定最大耐受量。根據(jù)臨床應(yīng)用劑量成人日用總量為 30g（成人體重按60kg計(jì)算，單位體重人用劑量為30g/60kg=0.5g/kg）,按人的50 倍用量，每次灌胃的濃度為25g/kg,將小鼠隨機(jī)分成4組，每組20只

7、，每組動(dòng) 物在id吋間內(nèi)灌服相同濃度的傷科消腫顆粒，灌服次數(shù)不同。按照分組情況， 每隔3 h增加一次，觀察7d內(nèi)動(dòng)物的中毒反應(yīng)或死亡情況。計(jì)算出最大耐受量 及耐受量倍數(shù)。以耐受人用量口服100倍以上為安全。2.2長期壽性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)1周，經(jīng)籠旁觀察動(dòng)物精神、活動(dòng)、飲食、大小便等生理 活動(dòng)正常、雌性無孕后，按性別隨機(jī)分為對(duì)照組、傷科消腫顆粒小、中、大3 個(gè)劑量組，每組20只（雌、雄各半），分籠飼養(yǎng)。根據(jù)臨床應(yīng)用劑量成人日用總 量為30g（成人體重按60kg計(jì)算，單位體重人用劑量為30g/60kg=0.5g/kg）o結(jié)合 實(shí)驗(yàn)可操作性，按以下劑量給藥：小劑量組：傷科消腫顆粒2.5g/kg,

8、相當(dāng)于臨 床擬用劑量5倍；中劑量組：傷科消腫顆粒5g/kg,相當(dāng)于臨床擬用劑量10倍; 大劑量組傷科消腫顆粒10g/kg,相當(dāng)于臨床擬用劑量20倍；對(duì)照組：給予等容 量生理鹽水。每天灌胃1次（每周日不給藥），連續(xù)用藥6個(gè)月，采樣后進(jìn)行血液 學(xué)、血液生化指標(biāo)測(cè)定，并進(jìn)行系統(tǒng)尸體解剖觀察，取主要臟器稱重、計(jì)算臟/ 體比系數(shù)，對(duì)主要臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查3-4o2.3統(tǒng)計(jì)處理采用spss 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x-&plusmn;s表示，采用單 因素方差分析，方差不齊時(shí)采用秩和檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用lsd法，p<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3 .實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1最大耐受

9、量測(cè)定給小鼠灌服第3次藥物時(shí)，動(dòng)物死亡數(shù)量為0； 3h后，再灌服一次，則動(dòng)物 死亡數(shù)量為2。因此，以25g/kg.連續(xù)3次的劑量為小鼠的最大耐受量。計(jì)算出 小鼠對(duì)傷科消腫顆粒的最大耐受量是75g/kg,為臨床用藥量的150倍(人體以60 kg體重計(jì),最大臨床用30g,即人臨床用藥量為0.5g/kg),屬于無毒物。3.2傷科消腫顆粒對(duì)動(dòng)物一般體征及體重的影響傷科消腫顆粒給藥期間，各組動(dòng)物飲食、活動(dòng)、生長發(fā)育、二便均正常，精 神狀態(tài)良好，毛色光滑，各組均未出現(xiàn)死亡動(dòng)物。試驗(yàn)期間動(dòng)物體重增長良好， 小、中、大劑量組動(dòng)物的體重與對(duì)照組比較無明顯差異。3.3傷科消腫顆粒對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響結(jié)果見表2,傷科

10、消腫顆粒3個(gè)劑量組與對(duì)照組比較，hb、rbc、plt、wbc 總數(shù)等均無顯著性差異(p>0.05)o3.4傷科消腫顆粒對(duì)血液生化學(xué)學(xué)指標(biāo)的影響(x-&plusmn;s)結(jié)果見表3,傷科消腫顆粒3個(gè)劑量組與對(duì)照組比較，總數(shù)等均無顯著性差 異(p>0.05)o 見表 3。3.5病理組織學(xué)檢查按系統(tǒng)解剖取各劑量組和對(duì)照組各10只大鼠的心、肝、脾、肺、腎等組織， 進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，各劑量組和對(duì)照組各臟器組織學(xué)均未發(fā)現(xiàn)明顯病理性改變。 臟器細(xì)胞未見變性壞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)未見色素集聚。骨髓圖片鏡下觀察可見，傷科消 腫顆粒給藥組和正常組大鼠骨髓增生極度活躍，細(xì)胞大小、形態(tài)正常。4.討論本研究

11、按照國家相關(guān)中藥新藥研發(fā)要求，采用動(dòng)物急性、長期毒性實(shí)驗(yàn)方法 評(píng)價(jià)了傷科消腫顆粒安全性。結(jié)果顯示，急性毒性實(shí)驗(yàn)中無法測(cè)出該藥ld50, 用最大耐受量方法測(cè)得傷科消腫顆粒對(duì)小鼠最大耐受量是75g/kg,為臨床用藥量 的150倍(人體以60 kg體重計(jì),最大臨床用30g,即人臨床用藥量為0.5g/kg), 表明本品毒性較低，安全范圍大，為臨床安全應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。長期毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本品人中劑量組雄性動(dòng)物的體重及白細(xì)胞總數(shù)稍有 影響，但與對(duì)照組相比無明顯差異，這可能是由于每次給動(dòng)物藥量體積較大，致 使食量減少，體重及機(jī)體抵抗力暫時(shí)下降所致，不屬于本品所致的病理性改變。 對(duì)其血液指標(biāo)、血液生化指

12、標(biāo)及肝、腎功能無明顯影響；其心、肝、脾、肺、腎 等主要臟器組織未發(fā)現(xiàn)明顯病理性改變。大鼠連續(xù)灌胃6個(gè)月，給藥組和正常組 大鼠骨髓增生極度活躍，細(xì)胞大小、形態(tài)正常。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，采用相當(dāng)于 臨床用藥劑量20倍的接骨丹膠囊給人鼠灌胃連續(xù)用藥6個(gè)月，未發(fā)現(xiàn)明顯藥物 所致的毒副反應(yīng)。由此預(yù)測(cè)，接骨丹膠囊臨床用藥是安全的。由于此方是建立在全新的中醫(yī)觀點(diǎn)上，在多年的臨床應(yīng)用中，我院骨二科劉 武博士等人對(duì)此方的有效性進(jìn)行了進(jìn)一步研究，研究證實(shí)該方與七葉皂昔鈉比較 具有可比性，對(duì)四肢骨折術(shù)后具有利水消腫的臨床效果1。在臨床觀察方面劉 武博士等也對(duì)320例骨折術(shù)后腫脹患者做了冋顧性的研究，結(jié)果表明：該方在改

13、 善患者腫脹程度、對(duì)緩解疼痛、預(yù)防并發(fā)癥等方面有確切的臨床效果。盡管“傷 科消腫方”具有很好的療效，并u已經(jīng)成為我院骨二科在消腫止痛上的經(jīng)驗(yàn)方, 但無成熟的劑型，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足廣大骨折術(shù)后腫脹患者的要求。因此有必要將“傷 科消腫方”按照醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)管理辦法的有關(guān)要求，進(jìn)行顆粒劑工藝的 研制，建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行顆粒劑穩(wěn)定性試驗(yàn)，主要藥效學(xué)試驗(yàn)、毒性試驗(yàn) 等為臨床提供一個(gè)安全有效的新制劑，并整理研究資料申請(qǐng)醫(yī)院制劑批準(zhǔn)文號(hào)。 制成傷科消腫顆粒劑后，在消腫止痛的劑型方面也克服了湯劑服用、攜帶不便, 片劑服用片數(shù)過多、吸收慢，加上毒膠囊的岀現(xiàn)等其他劑型存在的不足，并將填 補(bǔ)我院院內(nèi)制劑無治療骨折、外傷后腫脹口服產(chǎn)品的空白。【參考文獻(xiàn)】1劉武，米琨，王斌，俸志斌，劉鵬飛，歐倫，伏春華，王瑞華活血利水 法治療四肢骨折術(shù)后腫脹療效觀察j新中醫(yī)雜志，2011, 43(9):5