濟(jì)南大學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)水果中VC含量的測定綜合實(shí)驗(yàn)論文

1、化學(xué)化工學(xué)院 應(yīng)化班 XX 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn) 第 10 頁 共 9頁設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)題 目 紫外吸收光譜法測定果蔬中Vc 的含量 學(xué) 院 化學(xué)化工學(xué)院專 業(yè) 應(yīng)用化學(xué)姓 名 XXX學(xué) 號 XXXXXXXXXX指導(dǎo)教師 XXX二O 一二 年 十一月 二十七日濟(jì)南大學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)用紙?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)任務(wù)書學(xué)院 化學(xué)化工 專業(yè) 應(yīng)用化學(xué) 姓名 XX 學(xué)號 XXXXXXXXXXX 實(shí)驗(yàn)題目 紫外吸收光譜法測定果蔬中Vc的含量 一、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、紫外分光光度計(jì)確定維生素C的最大吸收波長；二、配制維生素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在最大吸收波長處測定一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度并繪制維生素C的標(biāo)準(zhǔn)吸收曲線；三、搗碎水果及蔬菜組織，用鹽酸做維生素C提取劑

2、，離心懸浮液，取上層澄清液并定容，在最大吸光度下用紫外分光光度計(jì)測溶液的吸光度，并用堿液處理溶液，求出兩者的差值。依據(jù)維生素C的標(biāo)準(zhǔn)吸收曲線方程，得出果蔬中維生素C含量。二、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)應(yīng)完成的工作1、確定維生素C在紫外分光光度計(jì)的最大吸收波長；2、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；3、搗碎果蔬可食部分，用鹽酸做提取液，配制樣品溶液；4、測定果蔬溶液吸光度并用堿液處理，求兩者差值；濟(jì) 南 大 學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)評語學(xué) 院 化學(xué)化工 專業(yè) 應(yīng)用化學(xué) 姓 名 XX 班級 應(yīng)用化學(xué)班 學(xué)號 XXXXXXX 題 目 紫外吸收光譜法測定果蔬中Vc的含量 指導(dǎo)小組或指導(dǎo)教師評語評定成績 20 年 月 日 負(fù)責(zé)人或指導(dǎo)教師

3、濟(jì) 南 大 學(xué)目 錄摘 要················································

4、;········································2Abstract········&#

5、183;·················································&#

6、183;······················2第一章 前言··························&

7、#183;·················································&

8、#183;·····31.1 熒光法···········································

9、;····································41.2 2，6-二氯靛酚滴定法（還原型VC）··········

10、·····························41.3 2，4-二硝基苯肼法··················

11、83;··············································51.4 碘量法··&

12、#183;·················································&

13、#183;····························5第二章 實(shí)驗(yàn)部分···················

14、3;·················································

15、3;····62.1 儀器與試劑············································

16、······························62.1.1儀器··················

17、3;·················································

18、3;··············72.1.2試劑··································&#

19、183;················································62.2 實(shí)驗(yàn)方

20、法··················································

21、;·····························62.2.1測定波長的選擇··················

22、3;·················································62.2

23、.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制················································

24、83;···················72.2.3 樣品的測定····························

25、83;·············································72.2.4 結(jié)果計(jì)算··

26、3;·················································

27、3;························82.3 結(jié)果與討論························

28、·················································82.4 分

29、析過程的注意點(diǎn)·················································

30、;·················82.5 結(jié)論·······························

31、3;·················································

32、3;···8參考文獻(xiàn)··············································

33、;·······································9摘 要通過吸收光譜曲線法確定Vc的水溶液的最大吸收波長為243nm, 進(jìn)而通過工作曲線法快速測定蔬菜水果中Vc的含量，本方法與常

34、規(guī)方法比較, 具有快速、準(zhǔn)確、簡便、試劑易得等優(yōu)點(diǎn)。關(guān)鍵詞維生素C,紫外分光光度法,水果,蔬菜。AbstractThe author first determine that vitamin C water-soluble fluid biggest absorption wave length is243nm through the absorption spectrum curve method, then with the working curve method, the vitamin C content in vegetables and fruits can be tested

35、quickly. The results of testing indicate that the method has the merits of quick, simple, accurate, facile reagent and etc in comparison to conventional one.Key words Vitamin C, UV-Spectrophotometry , Fruit , Vegetable.第一章 前言Vc廣泛存在于新鮮水果中, 它具有保持肌膚潤滑、防止衰老、抗壞血酸等作用,是人體必需的主要維生素之一。Vc在水果中主要以還原型(ASA) 存在。維生素

36、C純品為白色無臭結(jié)晶, 熔點(diǎn)在190192 。Vc 又名抗壞血酸,能溶于水、乙醇和甲醇, 而不溶于其他有機(jī)溶劑, 具有酸味和還原性, 有4 種異構(gòu)體,即L- 抗壞血酸、D- 抗壞血酸、L- 異抗壞血酸、D- 異抗壞血酸。天然抗壞血酸主要以L- 抗壞血酸為主,其效力最高。維生素C是所有具有抗壞血酸生物活性的化合物的統(tǒng)稱。它在人體內(nèi)不能合成，必須依靠膳食供給。維生素C不僅具有廣泛的生理功能, 能防止壞血病,關(guān)節(jié)腫,促進(jìn)外傷愈合, 使機(jī)體增強(qiáng)抵抗能力。而且在食品工業(yè)上常用作抗氧化劑、酸味劑及強(qiáng)化劑。因此, 測定食品中維生素C的含量以評價食品品質(zhì)及食品加工過程中維生素C的變化情況具有重要的意義。結(jié)晶抗

37、壞血酸在空氣中穩(wěn)定,但它在水溶液中易被空氣和其他氧化劑氧化, 生成脫氫抗壞血酸;在堿性條件下易分解,見光加速分解;在弱酸條件中較穩(wěn)定。維生素的結(jié)構(gòu)如下：目前研究維生素C測定方法的報(bào)道較多,有關(guān)維生素C的測定方法如熒光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)分析法及色譜法等,各種方法對實(shí)際樣品的測定均有滿意的效果.為了解國內(nèi)VC含量測定方法及其應(yīng)用方面的現(xiàn)狀及發(fā)展態(tài)勢.方法以"維生素C或抗壞血酸和測定"為檢索詞對19942002年中國期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)中的理工A、B和醫(yī)藥衛(wèi)生專輯進(jìn)行篇名檢索,對所得有關(guān)維生素C含量測定的文獻(xiàn)數(shù)

38、據(jù)分別以年代、作者區(qū)域、載刊等級、樣品類型、測定方法等進(jìn)行計(jì)量分析.結(jié)果核心期刊載刊文獻(xiàn)占文獻(xiàn)總量的45.06,其中光度法占65.69,電化法占18.63,色譜法占12.75;復(fù)雜被測樣品文獻(xiàn)占文獻(xiàn)總量的45.06,其中光度法占60.92,色譜法占19.54,電化法占10.34.結(jié)論目前國內(nèi)維生素C含量測定仍以光度法為主流,但近年來色譜法,特別是HPLC法上升趨勢尤為明顯.1.1 熒光法(1)原理 樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸后，與鄰苯二胺（OPDA）反應(yīng)生成具有熒光的喹喔啉（quinoxaline）,其熒光強(qiáng)度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測定食物中抗壞血酸

39、和脫氫抗壞血酸的總量。脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復(fù)合物而不與OPDA反應(yīng)，以此排除樣品中熒光雜質(zhì)所產(chǎn)生的干擾。本方法的最小檢出限為0.022 g/ml。 (2)適用范圍 本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定 。(3) 注意事項(xiàng) 大多數(shù)植物組織內(nèi)含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶，因此，抗壞血酸的測定應(yīng)采用新鮮樣品并盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品制成勻漿以保存維生C； 某些果膠含量高的樣品不易過濾，可采用抽濾的方法，也可先離心，再取上清液過濾；活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸，但它也有吸附抗壞血酸的作用，故活性炭用量應(yīng)適當(dāng)與準(zhǔn)確，所以，應(yīng)用天平稱量。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，用2g活性炭能使

40、測定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型，其吸附影響不明顯。1. 2 2，6-二氯靛酚滴定法（還原型Vc）(1)原理： 還原型抗壞血酸還原染料2，6-二氯靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原后紅色消失。還原型抗壞血酸還原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時，一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)2，6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。本法用于測定還原型抗壞血酸，總抗壞血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和熒光分光光度法測定。 (2)注意事項(xiàng) 所有試劑的配制最好都用重蒸餾水；滴定時，可同時吸二個樣品。一個滴定，另一個作為觀察顏色變化的參考； 樣品進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)浸泡在已知量的

41、2%草酸液中，以防氧化，損失維生素C； 貯存過久的罐頭食品，可能含有大量的低鐵離子（Fe2+），要用8%的醋酸代替2%草酸。這時如用草酸，低鐵離子可以還原2，6-二氯靛酚，使測定數(shù)字增高，使用醋酸可以避免這種情況的發(fā)生； 整個操作過程中要迅速，避免還原型抗壞血酸被氧化； 在處理各種樣品時，如遇有泡沫產(chǎn)生，可加入數(shù)滴辛醇消除； 測定樣液時，需做空白對照，樣液滴定體積扣除空白體積。(3)優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：它具有簡便、快速、比較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適用于許多不同類型樣品的分析。缺點(diǎn)；不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質(zhì)的干擾。如果樣品中含有色素類物質(zhì)，將給滴定終點(diǎn)的觀察造成困難

42、。在酸性環(huán)境中，抗壞血酸（還原型）能將染料2,6DCIP還原成無色的還原型2,6DCIP，而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型2,6DCIP在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色，但在酸性溶液中則呈粉紅色。因此，當(dāng)用2,6DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時，在抗壞血酸未被全部氧化前，滴下的2,6DCIP 立即被還原成無色，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時，則滴下微量過剩的2,6DCIP 便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，此時即為滴定終點(diǎn)，表示溶液中的抗壞血酸剛剛?cè)勘谎趸?。依?jù)滴定時2,6DCIP 標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量 (ml)，可以計(jì)算出被測樣品中抗壞血酸的含量。氧化型2,6DCIP與還原型抗壞血酸常在

43、稀草酸或偏磷酸溶液中進(jìn)行反應(yīng)。即先將樣品溶于一定濃度的酸性溶液中或經(jīng)抽提后，再用2,6DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)。食物和生物材料中常含有其他還原物質(zhì)，其中有些還原物質(zhì)可使2,6DCIP還原脫色。為了消除這些還原物質(zhì)對定量測定的干擾，可用抗壞血酸氧化酶處理，破壞樣品中還原型抗壞血酸后，再用2,6DCIP 滴定樣品中其他還原物質(zhì)。然后從滴定未經(jīng)酶處理樣品時2,6DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的總消耗量中，減去滴定非抗壞血酸還原物質(zhì)2,6DCIP 標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量，即為滴定抗壞血酸實(shí)際所消耗的2,6DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，由此可以計(jì)算出樣品中抗壞血酸的含量。另外，還可利用抗壞血酸和其他還原物質(zhì)與2,6DCIP反應(yīng)

44、速度的差別，并通過控制樣品溶液在pH1 3 范圍內(nèi)，進(jìn)行快速滴定，可以消除或減少其他還原物質(zhì)的作用，一般在這樣的條件下，干擾物質(zhì)與2,6DCIP的反應(yīng)是很慢的或受到抑制。生物體液（如血液、尿等）中的抗壞血酸的測定比較困難，因?yàn)檫@些樣品中抗壞血酸的含量很低，并且存在許多還原物質(zhì)的干擾，同時還必須預(yù)先進(jìn)行脫蛋白處理。在生物體液中含有巰其、亞硫酸鹽及硫代硫酸鹽等物質(zhì)，它們都能與DCIP反應(yīng)，但反應(yīng)速度比抗壞血酸慢得多。樣品中巰基物質(zhì)對定量測定的干擾，通?？梢越寮尤雽β裙郊姿?簡稱PCMB)而得到消除。1. 3 2，4-二硝基苯肼法(1)原理 總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸。樣品中還原型

45、抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進(jìn)行比色測定。 (2)適用范圍 本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定。 這是脎比色法，單獨(dú)評價是因?yàn)槟壳八鳛閂c測定的國標(biāo)法之一，是一種全量測定法，它跟以前的苯肼法原理相近。首先將樣品中的還原型V氧化為脫氫型V，然后與2，4二硝基苯肼作用，生成紅色的脎，將脎溶于硫酸后進(jìn)行比色。最近國標(biāo)中該法強(qiáng)調(diào)空白，每個樣品及標(biāo)準(zhǔn)系列均需作對應(yīng)空白，這樣消除色澤、背景不一的誤差。在實(shí)際楊梅汁Vc測定中，操作時間長，操作要求較嚴(yán)格，試劑較多，就一般實(shí)驗(yàn)室而言是目前可以采用的方法。 1. 4 碘

46、量法(1)原理 維生素C包括氧化型、還原型和二酮古樂糖酸三種。當(dāng)用碘滴定維生素C時，所滴定的碘被維生素C還原為碘離子。隨著滴定過程中維生素C全被氧化，所滴入的碘將以碘分子形式出現(xiàn)。碘分子可以使含指示劑（淀粉）的溶液產(chǎn)生藍(lán)色，即為滴定終點(diǎn)。(2)注意事項(xiàng) 看到紅棕色出現(xiàn)時要放慢滴定的速度；以顯藍(lán)色在30s內(nèi)不褪色為滴定終點(diǎn)。第二章 實(shí)驗(yàn)部分2.1 儀器與試劑2.1.1儀器UV-2550紫外可見分光光度計(jì) 島津公司 電子天平 丹佛儀器公司 TG16-WS離心機(jī) 長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司 100 mL容量瓶、50mL的容量瓶、研缽2.1.2試劑1%鹽酸;100 g / mL抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。以上試

47、劑均為分析純, 實(shí)驗(yàn)用水為二次水。2.2 實(shí)驗(yàn)方法2.2.1測定波長的選擇維生素C是烯醇化合物, 具有C=C基, 在可見區(qū)無吸收, 在紫外區(qū)有吸收, 按實(shí)驗(yàn)方法, 分別對不同濃度的維生素C 與試劑空白溶液在200300 nm 波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。由紫外吸收光譜圖表明, 最大吸收波長在243 nm。因此, 選243 nm 作為測量波長。2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制稱取抗壞血酸10 mg(準(zhǔn)確至0.1 mg),用1%鹽酸溶解,小心轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中,并加1%鹽酸稀釋到刻度,混勻,此抗壞血酸溶液的濃度為100g / mL。吸取0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用溶液,置于50 mL容量瓶中;用1%鹽酸定容,搖勻。此標(biāo)準(zhǔn)系列抗壞血酸的濃度分別為0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8. 00、10. 0、12.0 g/mL。以1%鹽酸為參比，對12 g/mL壞血酸在200-300 nm掃描找最大吸收波長，為243 nm。在波長243 nm處, 用1 cm石英皿測定標(biāo)準(zhǔn)系列抗壞血酸溶