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文檔簡介

1、1一、細胞凋亡的檢測方法第1頁/共16頁2 細胞受到急性強力傷害時，立即出現(xiàn)的早期反應。周圍炎癥 多細胞有機體為調(diào)控機體發(fā)育、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基 因控制的細胞主動性死亡過程。(programmed cell death,PCD). 從嚴格的詞學意義上來說，PCD與凋亡是有很大區(qū)別的第2頁/共16頁3細胞壞死細胞凋亡第3頁/共16頁4二、細胞凋亡的檢測方法第4頁/共16頁5 (二) 形態(tài)學方法第5頁/共16頁6正常細胞核刺激后有致密濃染的凋亡細胞第6頁/共16頁7細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，也不能反映凋亡細胞與周圍組織的關(guān)系第7頁/共16頁8 （四第8頁/共16頁9第9頁/共16頁10試劑盒采用賽寶生生物技

2、術(shù)Annexin-v-FITCF凋亡檢測試劑盒第10頁/共16頁11流式細胞儀的工作原理和基本結(jié)流式細胞儀的工作原理和基本結(jié)構(gòu)構(gòu) 待測細胞以單個細胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色，放入樣品管，吸入流動室。待測細胞以單個細胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色，放入樣品管，吸入流動室。 流動室充滿流動室充滿IsoFlow ，作用：約束樣品在噴嘴中心，防止樣品靠近噴孔壁堵塞噴孔。細胞排成單列由噴嘴，作用：約束樣品在噴嘴中心，防止樣品靠近噴孔壁堵塞噴孔。細胞排成單列由噴嘴中心噴出，形成細胞液柱。中心噴出，形成細胞液柱。 液柱與激光束相交，細胞上的熒光染料被激發(fā)產(chǎn)生熒光。 熒光信號變成電信號輸出到計算機，軟件分

3、析。第11頁/共16頁12 細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的方面起到十分重要的作用。Annexin V 是一種分子量在35-36kD的鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細胞凋亡過程翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異性結(jié)合。以標記FITC的Annexin V作為探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。第12頁/共16頁13 PI(Propidium iodide)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過而使細胞核染成紅色。將Annexin V 與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞分開。第13頁/共16頁14 散點圖 密度圖二維等高圖直

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