細(xì)胞凋亡與檢測原理PPT課件

1、1一、細(xì)胞凋亡的檢測方法第1頁/共16頁2 細(xì)胞受到急性強(qiáng)力傷害時，立即出現(xiàn)的早期反應(yīng)。周圍炎癥 多細(xì)胞有機(jī)體為調(diào)控機(jī)體發(fā)育、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基 因控制的細(xì)胞主動性死亡過程。(programmed cell death,PCD). 從嚴(yán)格的詞學(xué)意義上來說，PCD與凋亡是有很大區(qū)別的第2頁/共16頁3細(xì)胞壞死細(xì)胞凋亡第3頁/共16頁4二、細(xì)胞凋亡的檢測方法第4頁/共16頁5 (二) 形態(tài)學(xué)方法第5頁/共16頁6正常細(xì)胞核刺激后有致密濃染的凋亡細(xì)胞第6頁/共16頁7細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，也不能反映凋亡細(xì)胞與周圍組織的關(guān)系第7頁/共16頁8 （四第8頁/共16頁9第9頁/共16頁10試劑盒采用賽寶生生物技

2、術(shù)Annexin-v-FITCF凋亡檢測試劑盒第10頁/共16頁11流式細(xì)胞儀的工作原理和基本結(jié)流式細(xì)胞儀的工作原理和基本結(jié)構(gòu)構(gòu) 待測細(xì)胞以單個細(xì)胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色，放入樣品管，吸入流動室。待測細(xì)胞以單個細(xì)胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色，放入樣品管，吸入流動室。 流動室充滿流動室充滿IsoFlow ，作用：約束樣品在噴嘴中心，防止樣品靠近噴孔壁堵塞噴孔。細(xì)胞排成單列由噴嘴，作用：約束樣品在噴嘴中心，防止樣品靠近噴孔壁堵塞噴孔。細(xì)胞排成單列由噴嘴中心噴出，形成細(xì)胞液柱。中心噴出，形成細(xì)胞液柱。 液柱與激光束相交，細(xì)胞上的熒光染料被激發(fā)產(chǎn)生熒光。 熒光信號變成電信號輸出到計算機(jī)，軟件分

3、析。第11頁/共16頁12 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的方面起到十分重要的作用。Annexin V 是一種分子量在35-36kD的鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異性結(jié)合。以標(biāo)記FITC的Annexin V作為探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。第12頁/共16頁13 PI(Propidium iodide)是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過而使細(xì)胞核染成紅色。將Annexin V 與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞分開。第13頁/共16頁14 散點圖 密度圖二維等高圖直