銀杏葉聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞降糖療效觀察

1、銀杏葉聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞降糖療效觀察吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院130033【摘 要】目的：銀杏葉聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stems cells, bmscs)對(duì)(i型)糖尿病大鼠模型降糖療效觀察。方法: 建立i型糖尿病wistar大鼠模型并隨機(jī)分為糖尿病(dm)組、銀杏葉(ginkgo biloba l.extract egb)組、egb+bmsc 組、bmsc 組，同時(shí)設(shè)置對(duì)照(contral)組， 其中egb+bmsc組經(jīng)眼眶靜脈輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并給予銀杏葉提取物治 療，觀察各組大鼠血糖、胰島素、超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽過(guò)氧化物 酶

2、(gshpx)、白介素6 (il-6)等指標(biāo)變化。結(jié)果:egb+bmsc組的血糖、il-6水 平顯著低于egb、bmsc組(p<0.05),而胰島素、sod及gsh-px水平較之升 高(p<0.05)；結(jié)論：egb聯(lián)合bmsc治療可顯著降低糖尿病大鼠血糖水平， 增加胰島素分泌，減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)，為糖尿病治療提供新的方法?！娟P(guān)鍵詞】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；銀杏葉提取物；氧化應(yīng)激【中圖分類號(hào)】r551.3【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】2096-0867 ( 2015 ) -09-021-02既往研究1證明，糖尿病患者體內(nèi)氧化應(yīng)激水平較高，加重胰島細(xì) 胞的損傷；銀杏葉提取物含抗氧

3、化成分，可清除自由基，減弱氧化應(yīng)激水平，減 少內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡2。間充質(zhì)干細(xì)胞是一種幼稚細(xì)胞，具有多向分化潛能，相 關(guān)研究3-4通過(guò)其可塑性，將其誘導(dǎo)分化為胰島細(xì)胞來(lái)降低血糖。但糖尿病 患者機(jī)體內(nèi)高氧化應(yīng)激狀態(tài)下的微環(huán)境，會(huì)加速移植干細(xì)胞的死亡5,為此, 利用銀杏葉抗氧化應(yīng)激作用，聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞降糖成為一條可能的治療途 徑。木實(shí)驗(yàn)將對(duì)二者聯(lián)合降糖的療效與單藥治療進(jìn)行對(duì)比。1材料和方法1.1材料及方法選取健康的wistar成年雌性大鼠60只，體重 200246g,購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心obmscs取自5天的wistar大 鼠乳鼠股骨。stz購(gòu)于大連美羅藥廠。銀杏葉提取物購(gòu)自臺(tái)灣濟(jì)

4、生化學(xué)制藥廠股 份有限公司。大鼠sod和gsh-px試劑盒購(gòu)于南京建成生物公司。分別給予腹 腔內(nèi)注射stz配置液(stz粉末溶于枸椽酸枸椽酸鈉緩沖液，配置成o.lmol/l, ph值為4.3),齊ij量為55mg/kg.d-l,當(dāng)大鼠尾靜脈血糖值連續(xù)2次>16.7mmol/l吋成功建模i型糖尿病。將其隨機(jī)分為egb組、dm組、bmscs 組以及egb+bmscs組。另選取10只人鼠只注射等劑量的枸椽酸枸椽酸鈉緩沖 液作對(duì)照。egb組每日給予0.8 ml kg-1的egb； egb+bmscs組先給予等量的 egb注射7天，7天后從眶下經(jīng)脈輸注1106個(gè)bmscs/只；bmscs組

5、的大鼠則于第7天直接從眶下靜脈輸注1106個(gè)bmsc/只；dm組及對(duì)照組給予注射0.8mlkg-1/只的生理鹽水。1.2標(biāo)本采集及指標(biāo)測(cè)定：于第20天處死大鼠，并取其靜脈血留做標(biāo) 本，采用黃瞟吟氧化酶法測(cè)定血清sod含量，二硫代雙硝基苯甲酸直接顯色法 測(cè)定血清gsh-px含量，elisa方法測(cè)定血清il6含量。1.6統(tǒng)計(jì)分析：符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x ±s)表示，正態(tài)分布且方差齊的資料，采用單因素方差分析，組間比較 采用snk-q檢驗(yàn)，當(dāng)p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果：2.1各組人鼠檢測(cè)指標(biāo)的測(cè)定比較egb+b

6、msc組的血糖、il-6水平明顯低于dm組、egb組、bmsc組(p<0.05)；而胰島素分泌水平、血清sod、gsh-px活性明顯高于上述各組 (p<0.05)；結(jié)果表明相比單獨(dú)移植bmsc,聯(lián)合egb可以幫助bmsc減輕移 植環(huán)境的氧化應(yīng)激水平及炎癥反應(yīng)程度，進(jìn)一步降低血糖水平、增加胰島素分泌 水平。見表1.表1各組大鼠檢測(cè)指標(biāo)比較(x ± s, n二5)3 .討論：美國(guó)內(nèi)分泌醫(yī)師協(xié)會(huì)在2004年曾提出體內(nèi)的氧化應(yīng)激6是糖尿病 及其并發(fā)癥的共同發(fā)病機(jī)制。正常機(jī)體內(nèi)存在氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)平衡,而糖尿病的高血糖狀態(tài)可通過(guò)葡萄糖的自身氧化

7、、線粒體途徑等使細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生過(guò) 多的0、過(guò)氧硝基自由基、活性氧簇(ros),打破了這種平衡。由于缺乏內(nèi)源性抗氧化代償機(jī)制，使機(jī)體氧化還原穩(wěn)態(tài)失衡。血糖刺激器官產(chǎn)生自由基有多 條途徑，包括線粒體氧化磷酸化途徑、脂質(zhì)過(guò)氧化物酶、nadph氧化酶和一氧 化氮合酶(nos)等7-8o 一方面，過(guò)多的自由基導(dǎo)致細(xì)胞蛋白質(zhì)、dna損傷， 使細(xì)胞最終死亡9； ros是細(xì)胞內(nèi)一種信號(hào)分子，過(guò)多的ros可介導(dǎo)多種信 號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、轉(zhuǎn)錄因子的激活10,并直接氧化dna、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)損傷細(xì)胞， 體內(nèi)氧化成分如脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物mda增加，而抗氧化成分降低，如sod、gshpx, 降低，加重糖尿病機(jī)體內(nèi)細(xì)胞損害及并發(fā)癥的發(fā)生

8、；sod是抗氧化防御系統(tǒng)中 重要的酶類，它可以去除超氧陰離子，避免細(xì)胞受到體內(nèi)自由基損害，通過(guò)檢測(cè) 體內(nèi)sod的水平，可反映機(jī)體清除氧自由基的能力；gsh-px作用與sod相似， 它不僅可清除h2o2,還可以清除mda。另一方面，長(zhǎng)期高血糖還會(huì)通過(guò)氧化還 原依賴機(jī)制，刺激內(nèi)皮細(xì)胞分泌炎性因子，引起病理?yè)p傷，進(jìn)一步加重細(xì)胞損傷 凋亡。已有利用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰島細(xì)胞降糖的研究報(bào)導(dǎo)，但是由于 糖尿病患者機(jī)體內(nèi)環(huán)境高氧化應(yīng)激水平，移植細(xì)胞的生存率較低1門。我們?cè)?移植bmsc之前，通過(guò)利用銀杏葉抗氧化應(yīng)激及減輕炎癥反應(yīng)的作用，提前給 予銀杏葉治療，改善機(jī)體內(nèi)高氧化應(yīng)激的生存環(huán)境，結(jié)果顯示其對(duì)于

9、移植bmscs 的存活是十分必要的。這與國(guó)外類似報(bào)導(dǎo)是一致的12。本研究結(jié)果表明，與 dm、bmsc組、egb組相比，egb+bmsc聯(lián)合治療可以進(jìn)一步改善dm體內(nèi)氧 化應(yīng)激的程度，其中sod、gsh-px水平升高，減弱細(xì)胞內(nèi)炎癥反應(yīng)，il6、il-10 水平降低；降低細(xì)胞凋亡水平，使bax表達(dá)降低，bcl2水平升高。綜上，egb+bmsc聯(lián)合治療糖尿病效果顯著，能夠改善糖尿病大鼠體內(nèi) 氧化應(yīng)激水平，進(jìn)一步降低血糖，減少細(xì)胞內(nèi)炎癥反應(yīng)。參考文獻(xiàn)：1yang h, jin x, kei lcw, et al.oxidative stress anddiabetes mellitusj .clin

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