100713高三生物專題2課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

1、專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)一 研究思路（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目2.稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法: 應(yīng)用： 統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。一 研究思路（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目2.稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法: 應(yīng)用： 統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。注意：一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板進(jìn)行記數(shù)。一 研究思路（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)

2、目2.稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法: 第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。組，因此結(jié)果不具有說服力。一 研究思路（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目2.稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法: 第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。一 研究思路（三）設(shè)置對(duì)照一 研究思路（三）設(shè)置對(duì)照主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非

3、測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。一 研究思路（三）設(shè)置對(duì)照判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。一 研究思路（三）設(shè)置對(duì)照判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。結(jié)

4、果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。一 研究思路（三）設(shè)置對(duì)照判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。一 研究思路（三）設(shè)置對(duì)照判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：完全培養(yǎng)基（

5、營(yíng)養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng)完全培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng)觀察菌落數(shù)目。觀察菌落數(shù)目。主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括：二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括：實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括：2. 實(shí)驗(yàn)流程：實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括：2. 實(shí)驗(yàn)流程：實(shí)驗(yàn)

6、方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。（1）土壤取樣）土壤取樣二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括：2. 實(shí)驗(yàn)流程：（1）土壤取樣）土壤取樣從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。好的信封中。實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（2）樣品的稀釋）樣品的稀釋二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（2）樣品的稀釋）樣品的稀釋將待測(cè)樣品經(jīng)過一系列的稀釋，然后選擇三個(gè)將待測(cè)樣品經(jīng)過一系列的稀釋，然后選擇三個(gè)稀

7、釋度的菌液均勻涂布在平板上，然后培養(yǎng)。稀釋度的菌液均勻涂布在平板上，然后培養(yǎng)。 因?yàn)椴煌⑸镌谕寥乐泻坎煌?，其目因?yàn)椴煌⑸镌谕寥乐泻坎煌淠康氖潜ＷC獲得菌落數(shù)在的是保證獲得菌落數(shù)在30300之間。之間。 不同。不同。為了結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液涂為了結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液涂布到布到3個(gè)或個(gè)或3個(gè)以上的平板上，經(jīng)培養(yǎng)，計(jì)算出個(gè)以上的平板上，經(jīng)培養(yǎng)，計(jì)算出菌落的平均數(shù)。菌落的平均數(shù)。計(jì)算公式：計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù) =（cv）m計(jì)算公式：計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù) =（cv）m某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106 的培養(yǎng)基中測(cè)得平板

8、上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1ml） ( )a. 2.34108b. 2.34109c. 234d. 23.4 某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106 的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1ml） ( )a. 2.34108b. 2.34109c. 234d. 23.4 b b計(jì)算公式：計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù) =（cv）m二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2. 實(shí)驗(yàn)流程：（3）微生物的培養(yǎng)與觀察二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2. 實(shí)驗(yàn)流程：（3）微生物的培養(yǎng)與觀察培養(yǎng)皿編號(hào)：104、105、106各編號(hào)

9、三個(gè)培養(yǎng)皿。二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2. 實(shí)驗(yàn)流程：（3）微生物的培養(yǎng)與觀察培養(yǎng)皿編號(hào)：104、105、106各編號(hào)三個(gè)培養(yǎng)皿。每個(gè)培養(yǎng)皿加入牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基15ml。二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2. 實(shí)驗(yàn)流程：（3）微生物的培養(yǎng)與觀察培養(yǎng)皿編號(hào)：104、105、106各編號(hào)三個(gè)培養(yǎng)皿。每個(gè)培養(yǎng)皿加入牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基15ml。用移液管按照編號(hào)分別加入不同濃度土壤稀釋液各0. 1ml，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使土壤稀釋液與培養(yǎng)基混合均勻。二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2. 實(shí)驗(yàn)流程：（3）微生物的培養(yǎng)與觀察培養(yǎng)皿編號(hào)：104、105、106各編號(hào)三個(gè)培養(yǎng)皿。每個(gè)培養(yǎng)皿加入牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基15ml。用移液管按照編號(hào)分別加入不同濃度土壤稀

10、釋液各0. 1ml，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使土壤稀釋液與培養(yǎng)基混合均勻。冷卻倒置放入3037攝氏度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。觀察紀(jì)錄。三 操作提示三 操作提示1. 無(wú)菌操作2. 做好標(biāo)記3. 規(guī)劃時(shí)間四 操作提示三 操作提示1. 無(wú)菌操作2. 做好標(biāo)記3. 規(guī)劃時(shí)間四 結(jié)果分析與評(píng)價(jià)五 課題延伸五 課題延伸1.怎樣對(duì)怎樣對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定鑒定?2. 怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？3. 怎樣鑒定某細(xì)菌能夠怎樣鑒定某細(xì)菌能夠分解尿素分解尿素？五 課題延伸1.怎樣對(duì)怎樣對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定鑒定?2. 怎樣判斷細(xì)菌

11、分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？3. 怎樣鑒定某細(xì)菌能夠怎樣鑒定某細(xì)菌能夠分解尿素分解尿素？借助借助生物生物化學(xué)化學(xué)的的方法方法五 課題延伸1.怎樣對(duì)怎樣對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定鑒定?借助借助生物生物化學(xué)化學(xué)的的方法方法co（nh2）2 + h2oco2+2nh3脲酶2. 怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？五 課題延伸1.怎樣對(duì)怎樣對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定鑒定?借助借助生物生物化學(xué)化學(xué)的的方法方法co（nh2）2 + h2oco2+2nh3脲酶通過通過檢測(cè)培養(yǎng)基檢測(cè)培養(yǎng)

12、基ph變化變化來(lái)判斷來(lái)判斷2. 怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？五 課題延伸1.怎樣對(duì)怎樣對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定鑒定?2. 怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？3. 怎樣鑒定某細(xì)菌能夠怎樣鑒定某細(xì)菌能夠分解尿素分解尿素？借助借助生物生物化學(xué)化學(xué)的的方法方法通過通過檢測(cè)培養(yǎng)基檢測(cè)培養(yǎng)基ph變化變化來(lái)判斷來(lái)判斷五 課題延伸1.怎樣對(duì)怎樣對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定鑒定?2. 怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？怎樣判斷細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生？3. 怎樣鑒

13、定某細(xì)菌能夠怎樣鑒定某細(xì)菌能夠分解尿素分解尿素？借助借助生物生物化學(xué)化學(xué)的的方法方法通過通過檢測(cè)培養(yǎng)基檢測(cè)培養(yǎng)基ph變化變化來(lái)判斷來(lái)判斷 在以在以尿素尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅酚紅指示劑指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果ph升高，指升高，指示劑將示劑將變變紅紅 ，說明該細(xì)菌能夠，說明該細(xì)菌能夠分解分解尿素尿素。請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：(1)(1)該培養(yǎng)基含有微生物所需要的該培養(yǎng)基含有微生物所需要的_類營(yíng)養(yǎng)類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中最主要的碳源是物質(zhì)。其中最主要的碳源是_，氮源是，氮源是_。(2)(2)該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分

14、是該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是_培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；按培養(yǎng)基的作用劃分是按培養(yǎng)基的作用劃分是_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。例：例：下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：(1)(1)該培養(yǎng)基含有微生物所需要的該培養(yǎng)基含有微生物所需要的_類營(yíng)養(yǎng)類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中最主要的碳源是物質(zhì)。其中最主要的碳源是_，氮源是，氮源是_。(2)(2)該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是_培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；按培養(yǎng)基的作用劃分是按培養(yǎng)基的作用劃分是_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。4 4例：例：下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分

15、解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：(1)(1)該培養(yǎng)基含有微生物所需要的該培養(yǎng)基含有微生物所需要的_類營(yíng)養(yǎng)類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中最主要的碳源是物質(zhì)。其中最主要的碳源是_，氮源是，氮源是_。(2)(2)該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是_培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；按培養(yǎng)基的作用劃分是按培養(yǎng)基的作用劃分是_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。4 4葡萄糖葡萄糖例：例：下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：(1)(1)該培養(yǎng)基含有微生物所需要的該培養(yǎng)基含有微生物所需要

16、的_類營(yíng)養(yǎng)類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中最主要的碳源是物質(zhì)。其中最主要的碳源是_，氮源是，氮源是_。(2)(2)該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是_培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；按培養(yǎng)基的作用劃分是按培養(yǎng)基的作用劃分是_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。4 4葡萄糖葡萄糖尿素尿素例：例：下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：(1)(1)該培養(yǎng)基含有微生物所需要的該培養(yǎng)基含有微生物所需要的_類營(yíng)養(yǎng)類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中最主要的碳源是物質(zhì)。其中最主要的碳源是_，氮源是，氮源是_。(2)(2)該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃

17、分是_培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；按培養(yǎng)基的作用劃分是按培養(yǎng)基的作用劃分是_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。4 4葡萄糖葡萄糖尿素尿素固體固體例：例：下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問題：(1)(1)該培養(yǎng)基含有微生物所需要的該培養(yǎng)基含有微生物所需要的_類營(yíng)養(yǎng)類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中最主要的碳源是物質(zhì)。其中最主要的碳源是_，氮源是，氮源是_。(2)(2)該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是_培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；按培養(yǎng)基的作用劃分是按培養(yǎng)基的作用劃分是_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。4 4葡萄糖葡萄糖尿素尿素固體固體選擇選擇例：例：下面

18、是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方(3)(3)該培養(yǎng)基具有選擇作用的原因是該培養(yǎng)基具有選擇作用的原因是 。例：例：下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方(3)(3)該培養(yǎng)基具有選擇作用的原因是該培養(yǎng)基具有選擇作用的原因是 。該培養(yǎng)基中，唯一的氮源是尿素，只有能分解該培養(yǎng)基中，唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)和繁殖尿素的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)和繁殖例：例：下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方(4)(4)該培養(yǎng)基中，可通過檢測(cè)該培養(yǎng)基中，可通過檢測(cè)phph的變化來(lái)判斷的變化來(lái)判斷尿素是否被分解，依據(jù)的原理是尿素是否被分解，依據(jù)的原理是 。例：例：下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方(4)(4)該培養(yǎng)基中，可通過檢測(cè)該培養(yǎng)基中，可通過檢測(cè)php