GC-MS-MS法在水產(chǎn)品氯霉素殘留檢測中的應用

1、    gcms/ms法在水產(chǎn)品氯霉素殘留檢測中的應用    高均超摘要：文章建立了水產(chǎn)品中氯霉素藥物殘留量測定的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（gc-ms/ms），實驗數(shù)據(jù)分析表明：該方法用于氯霉素殘留的檢測中，靈敏度、精密度和準確度均能滿足檢測分析要求，在水產(chǎn)品中氯霉素藥物的殘留測定中具有很好的應用前景。關鍵詞：氯霉素；殘留檢測；gc-ms/ms；試驗；樣品前處理1 引言氯霉素（chloramphenicol，以下簡稱cap）作為人工合成的廣譜抗菌藥，因其具有抑菌性和殺菌性而被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中的細菌性疾病預防及治療。但同時也帶來了水產(chǎn)品中氯霉素殘留的嚴重

2、問題。研究表明，氯霉素一般較穩(wěn)定，不易降解，在水產(chǎn)品中的殘留可通過食物鏈進入人體，易引起人體血中毒，導致不可逆的再生障礙性貧血，嚴重影響人體的正常生理功能。因此，氯霉素殘留問題已引起人類的高度重視。本試驗采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（gc-ms/ms），以串聯(lián)質(zhì)譜作為檢測器進行試驗檢驗?，F(xiàn)將試驗過程及結(jié)果分析小結(jié)如下。2 材料與方法2.1 材料2.1.1 試驗原材料魚肉組織，市場銷售。2.1.2 主要試劑與材料乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈（色譜純，美國fisher scientific公司）；氯霉素標準、衍生化試劑bstfa（美國supelco公司）；c18固相萃取柱（美國安捷倫公司）。2.1.3

3、主要儀器氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（78卯b-7000b，美國安捷倫公司）；均質(zhì)機（t18 digital，德國ika公司離心機（ct18rt，上海天美公司）；固相萃取裝置（visiprep dlspe，美國supelco公司）；分析天平（cp213，美國ohaus公司）；氮吹儀（mg-2000，日本eyela公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（sb-1100，日本eyela公司）。2.2 標準溶液配制氯霉素標準溶液：配制100mg/l的標準儲備液，保存于14冰箱中冷藏，使用時用甲醇稀釋至相應濃度做標準工作曲線。2.3 樣品前處理2.3.1 分離提取準確稱取魚肉（魚糜狀）（5±0.01）g于具塞離心管中，

4、加人20ml乙酸乙酯，在組織勻漿機均質(zhì)1min后，用15ml乙酸乙酯清洗刀頭倒人離心管中，高速離心機10000r/min離心3min，將上清液倒入濃縮品中，濃縮近干，用甲醇-水（v：v=1：l）溶液5ml定容，待凈化。2.3.2 固相萃取凈化在固相萃取裝置上放置c18萃取柱，依次用甲醇、蒸餾水活化c18柱后抽干，將2.3.1定容液過柱，用5ml蒸餾水淋洗柱子，抽干后用甲醇溶劑洗脫，收集洗脫液于10ml試管中氮氣吹干。2.3.3 衍生化吹干的試管中加人0.5ml的甲苯和0.2ml的bstfa衍生化試劑，在70烘箱中衍生30min，取出后氮氣吹干0.5ml正已烷定容上機。2.3.4 標準曲線及質(zhì)控

5、樣分別配置0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mg/l濃度的標準液，按2.3.3衍生化后進樣制作標準曲線，同時在2.3.1過程中稱取2個樣品做添加回收率試驗。2.4 測定方法2.4.1 儀器條件色譜柱：hp-5ms（30m×0.25mm，0.5fun）；載氣：氦氣（99.999%）；恒流模式流速：1.0ml/min；進樣：1.0nl，不分流；進樣口溫度：250v；程序升溫：80保持1min，以20/min升溫至280，保持10min；離子化方式：電子轟擊（ei）；離子化能量：70ev；離子源溫度：230；傳輸線溫度270；溶劑延遲：3min；掃描方式：多反應監(jiān)測（mrm）。掃描范

6、圍：50450amu；定量方式：外標法。2.4.2 樣品測定將衍生化后定容的樣品及標準裝入帶內(nèi)襯管的進樣瓶中，按上述色譜-質(zhì)譜條件進行分析測定，通過色譜工作站記錄保留時間、峰面積及二級質(zhì)譜離子的豐度比。3 結(jié)果與討論3.1 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（gc-ms/ms）優(yōu)化和選擇在設定的色譜條件下對氯霉素衍生物標準品進行測試分析，首先采用全離子掃描確定目標化合物的保留時間和一級質(zhì)譜圖，設定質(zhì)譜條件優(yōu)化子離子及碰撞電壓。3.2 方法的線性范圍通過氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀分析氯霉素標準品的色譜圖，以峰面積對應其濃度做標準曲線，方法學參數(shù)見表1，3.3 方法回收率、精密度及檢出限對樣品添加0.5和1.0m

7、g/kg兩種不同濃度的混合標準，按試驗步驟操作，每個濃度各添加5個平行樣品，進行回收率重復測定。對樣品基質(zhì)空白進行20次測定，按照3倍信噪比（s/n）作為定量檢出限，通過計算所得氯霉素檢出限為0.01mg/kg。3.4 樣品的測定為驗證該方法的可靠性和準確性，本次試驗選擇市場銷售的鯽魚、草魚、鯉魚、河鱸及羅非魚20個樣品進行試驗，同時選擇上述樣品做添加回收試驗進行質(zhì)控。在檢測的樣品中均未檢出氯霉素藥物殘留，檢測結(jié)果準確、可靠。4 分析本次試驗所選擇的梯度濃度繪制的標準工作曲線，得到線性回歸方程相關系數(shù)大于0.99以上，表明氯霉素在相應的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系，可滿足殘留檢出的定量要求，在對空白魚肉樣品添加的兩個濃度水平的氯霉素標準品進行質(zhì)控試驗，氯霉素標準品的回收率大于80%以上，相對標準偏差小于5%，通過計算得到定量檢出限（lod）為0.01mg/kg，以上指標均符合藥物殘留試驗及相關標準法規(guī)的分析要求。5 結(jié)論試驗表明，gc-ms/ms法前處理步驟相對簡單，雜質(zhì)干擾少，線性系數(shù)在0.99以上，檢出限可達到0.01mg/kg，方法簡便、快速，具備良好的操作性，以及較高的準確度和精密度，不失為一種高效的水產(chǎn)品氯霉素類藥物殘留檢測方法，應得到推廣使用。參考文獻1萬譯文，鄧克國，劉麗.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測