水中細(xì)菌總數(shù)和總大腸菌群的測定

1、自來水中細(xì)菌總數(shù)的測定【摘要】水中細(xì)菌總數(shù)可說明被有機(jī)物污染的程度，細(xì)菌數(shù)越多，有機(jī)物含量越大。本 實驗應(yīng)用平板菌落記數(shù)技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)。由于水中細(xì)菌種類繁多，他們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大， 不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，是水中所有的細(xì)菌均能生長繁殖，因此，以某種培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的細(xì)菌總數(shù)僅是近似值。本實驗采用普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，能使大多數(shù)細(xì)菌生長。所謂細(xì)菌總數(shù)，指1毫升或1克檢樣中所含的細(xì)菌菌落的總數(shù)。通過觀測得到如下結(jié)果：在顯微鏡下可觀察到眾多的菌落且種類繁多，取其平均值得到，菌落數(shù)為每毫升自來水中21個細(xì)菌菌落?！娟P(guān)鍵詞】自來水普通

2、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 平板菌落計數(shù)技術(shù) 細(xì)菌總數(shù)乳白色菌落【前言】微生物學(xué)指標(biāo)是評價飲用水生物性污染的重要指標(biāo)，是水質(zhì)在流行病學(xué)上安全的保證。水是生命之源，人的生存離不開水環(huán)境，水質(zhì)的好壞對人們生活 起著至關(guān)重要的作用，而判斷水質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，微生物在水中的數(shù)量、種類是必不可 少的。各種天然水中常含一定數(shù)量的微生物。水中微生物的主要來源是：水中 的水生性微生物(如光合藻類)、來自土壤徑流、降雨的外來菌群和來自下水道 的污染物和人畜的排泄物等。自來水指通過水處理廠凈化、消蠹后生產(chǎn)出來的符 合國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)的供人們生活、 生產(chǎn)使用的水。我國飲水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每毫升 水樣細(xì)菌總數(shù)37度培養(yǎng)24個小時不得大于100

3、個。微生物學(xué)指標(biāo)是評價水中生物 性污染的重要指標(biāo)，是水質(zhì)在流行病學(xué)上安全的保證。近年來隨著環(huán)境污染加重 我國水質(zhì)不斷下降，給居民飲水安全帶來隱患。因此，我們想通過測定自來水中 的細(xì)菌總數(shù)，了解水質(zhì)情況，呼吁人們保護(hù)水資源。本實驗只包括一群能在營養(yǎng) 瓊脂上發(fā)育的嗜中溫的需氧的細(xì)菌菌落總數(shù)。通過此實驗我們能夠計算出水中的 細(xì)菌總數(shù)，從而判斷自來水是否符合國家標(biāo)準(zhǔn)，是否受到污染 2。1材料與器具1.1實驗試劑 牛肉膏 蛋白月東NaCl 1moL/LNaOH 1moL/LHCK菌水1.2實驗儀器高壓蒸氣滅菌鍋培養(yǎng)也三角燒瓶帶玻璃塞瓶天平試管牛角匙pH試紙(pH5.5-9.0 )棉花記號筆紗布吸管麻繩

4、牛皮紙量筒玻璃棒電熱爐稱量杯2實驗方法2.1 水樣的采取 先將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌，再放開水龍頭使水 流5min后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。2.2固體培養(yǎng)基的制作牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基的配方'切如下：牛肉膏3.0g蛋白月東10.0gNaCl 5.0g 水 1000mLpH 7.47.6將培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白月東、NaC畋入燒杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后到入燒杯。也可放 在稱量杯中，稱量后直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離， 然后立即取出紙片。在上述燒杯中先假如少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后,

5、 加入瓊脂，再在石棉上加熱使其溶解。將藥品完全溶解后，補(bǔ)充水到所需的總體 積。在未調(diào)pW,先用精密pH式紙測量培養(yǎng)基的原始pH,如果偏酸，用滴管向培 養(yǎng)基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌，并隨時用PH式紙測其PH直至PH4 7.6。反之，用1mol/LHCL進(jìn)行調(diào)節(jié)。2.3高壓蒸氣滅菌2.3.1 將內(nèi)層鍋去處，再向外層鍋中加入適量的水，使水面與三角架相平為 宜。2.3.2 放回內(nèi)層鍋，并加入要火菌的培養(yǎng)皿、試管、燒杯等物品（注意不要 裝得太擠，以免防礙蒸氣流通而影響滅菌效果）。2.3.3 加蓋，并將蓋上的排氣管插入內(nèi)層的排氣槽內(nèi)，再2兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊

6、一致，勿使漏氣。2.3.4 本實驗用0.1MPa, 121.5 C, 20min滅菌。滅菌所需時間到后，切斷電 源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至“ 0”時，打開排氣閥，旋 松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。2.4細(xì)菌總數(shù)的測定42.4.1 用滅菌吸管吸取1mLK樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，共做兩個平板。2.4.2分別傾注約15mlH溶化并冷卻到45 C左右的牛肉膏蛋白月東瓊脂培養(yǎng)基， 并立即在桌上做平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。2.4.3另取一空的滅菌培養(yǎng)血，傾注牛肉膏蛋白月東瓊脂培養(yǎng)基 15mL作空白對昭八、2.4.4培養(yǎng)基凝固后，倒置與37C溫箱中，培養(yǎng)24h,進(jìn)行菌落記數(shù)。四個

7、平 板的平均菌落數(shù)即為1m冰樣的細(xì)菌總數(shù)。3結(jié)果與分析3.1菌落照片3.2實驗數(shù)據(jù)表：自來水中菌落數(shù)表實驗數(shù)據(jù)平板菌落數(shù)1ml自來水中細(xì)菌忌數(shù)1352122738414空白對照52根據(jù)國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)可飲用水中的細(xì)菌個數(shù)為每毫升100個，而此自來水中的細(xì)菌個數(shù)為21個，低丁國家標(biāo)準(zhǔn)，故該自來水水質(zhì)合格。3.2.1對照組中的菌數(shù)應(yīng)為0個，但實驗測得數(shù)據(jù)為52個，這主要是因為 有雜菌混入，雜菌來源可能：培養(yǎng)血滅菌不充分；滅菌后在空氣中放置乂落入雜 菌；培養(yǎng)基傾入培養(yǎng)也后沒有立即加蓋； 配置培養(yǎng)基時反復(fù)升降溫（沒有立即轉(zhuǎn) 移使培養(yǎng)基凝固），使一些雜菌產(chǎn)生抗性。3.2.2由丁培養(yǎng)基是倒置的，所以可以觀察到

8、絕大多數(shù)的細(xì)菌著生在培養(yǎng) 基表面。這是由丁菌種在固體培養(yǎng)基上借助重力作用而形成的，有利丁菌落計數(shù)。3.2.3倒置培養(yǎng)基時應(yīng)降溫至 45 C,以免溫度過高燙死大腸桿菌。切記 不能過低，防止培養(yǎng)基凝固。傾注培養(yǎng)基后要將平也在桌面上做勻速旋轉(zhuǎn)，將培養(yǎng)基和自來水樣搖勻，在培 養(yǎng)基中觀察時可見一些菌苔就是平也沒有搖勻的結(jié) 果。3.3菌落記數(shù)方法先計算相同稀釋度的餓平均菌落數(shù)，若其中一個平板有較大片狀菌苔生長時， 則不應(yīng)采用，而應(yīng)以為片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布乂很均勻時，則可將此一半 的菌落數(shù)乘2以代表全平板的菌落數(shù)，然后再計算該稀釋度

9、的平均菌落數(shù)。首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間的，則只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符 合此范圍時，則以 該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的菌落總數(shù)。若有兩個稀釋度的平均菌落數(shù)均 30300之間，則按兩者菌落總數(shù)之比值來 決定。若其比值小于2,應(yīng)采取兩者的平均數(shù)；若大于 2,則取其中較小的菌落 總數(shù)。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘 以稀釋倍數(shù)。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以 稀釋倍數(shù)。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在 30300之間，則以最近300或30的平均 菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。4討論現(xiàn)實生活中細(xì)菌可謂無處不在，細(xì)菌

10、是微生物界的一個大類群，它與人類的 生活密切相關(guān)，其中有的有益，有的有害。為了我們更好的生活，我們必須研究 細(xì)菌，并掌握一些方法，來使細(xì)菌向人類有用的方面發(fā)展。 實驗用普通牛肉膏蛋 白月東瓊脂培養(yǎng)基在保證無菌的環(huán)境下，采取自來水的樣品，利用培養(yǎng)基制作平板， 在37C溫箱中，培養(yǎng)24h,進(jìn)行菌落記數(shù)。通過與國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比可知在國家 標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)，屆于合格自來水 。在本實驗中的空白對照培養(yǎng)基上長了細(xì)菌菌落，說明此培養(yǎng)基被污染了，在 其他幾個平板的培養(yǎng)基上長的菌落少且不均勻。通過此實驗，我們可知平板菌落技術(shù)法是測定水樣中細(xì)菌個數(shù)比較方便的方法，但它也存在不準(zhǔn)卻的因素比如在數(shù)菌落時，菌落太小且乂處于培養(yǎng)基內(nèi)部這樣就不能觀察到菌落從而影響結(jié)果， 乂如在培養(yǎng)過程中由于細(xì)菌之間的相互抑制也會使計數(shù)菌落減少。因此，在制作培養(yǎng)基及培養(yǎng)的過程中要嚴(yán)格殺菌， 并嚴(yán)格按照實驗步驟認(rèn)真操作，從而使得結(jié) 果更加精確：7：0參考文獻(xiàn)1 羅雪云等，食品衛(wèi)生微生物檢驗標(biāo)準(zhǔn)手冊北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，19952 顧孔珍 錢純 羅岳平.用R2A Agar培養(yǎng)基提高飲用水中細(xì)菌總數(shù)的檢出率J.凈水技 術(shù),2004,23(1):42-43.3:郝士海，現(xiàn)代細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)基和生化試驗手冊北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社，