蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的應(yīng)用ppt課件

1、蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的運(yùn)用蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的運(yùn)用化學(xué)系化學(xué)專業(yè)化學(xué)系化學(xué)專業(yè)2班班羅佳羅佳04081052蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的運(yùn)用蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的運(yùn)用 等電點(diǎn)等電點(diǎn) 等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)的特殊性質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)的特殊性質(zhì) 主要運(yùn)用主要運(yùn)用 等電點(diǎn)沉淀與分別等電點(diǎn)沉淀與分別 電泳分別電泳分別 等電聚焦電泳等電聚焦電泳 目前研討運(yùn)用情況目前研討運(yùn)用情況 等電點(diǎn)的測(cè)定等電點(diǎn)的測(cè)定等電點(diǎn)等電點(diǎn) 以氨基乙酸為例,離解平衡為:氨基乙酸 Ka1 雙極離子 Ka2 氨基乙酸 陽離子 pI=1/2(pKa1+pKa2) 陰離子 當(dāng)氨基酸的各種帶電離子所帶正電荷數(shù)與負(fù)電荷數(shù)相等時(shí),此時(shí)溶液的pH就是這種氨基酸的等電點(diǎn)(pI). 蛋白質(zhì)是由

2、氨基酸組成的,除了有末端-NH3+和末端-COO-外,參與其組成的氨基酸殘基側(cè)鏈上還有酸、堿性基團(tuán),因此蛋白質(zhì)是兩性物質(zhì),也有等電點(diǎn).2233323222H OH OH OH ONH CH COOHNH CH COONH CH COO陰陰 極極陽陽 極極pH=pIpHpI帶正電荷帶正電荷帶負(fù)電荷帶負(fù)電荷凈電荷為零凈電荷為零導(dǎo)電率導(dǎo)電率溶解度溶解度浸透壓浸透壓粘度粘度到達(dá)最低到達(dá)最低等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)的特殊性質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)的特殊性質(zhì)緣由緣由:在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子以雙極離子存在，總凈在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子以雙極離子存在，總凈電荷為零電荷為零,顆粒無電荷間的排斥作用顆粒無電荷間的排斥作用,易凝集成大

3、顆粒，易凝集成大顆粒，因此最不穩(wěn)定，溶解度最小，易沉淀析出。因此最不穩(wěn)定，溶解度最小，易沉淀析出。 電泳分電泳分別別沉淀分別沉淀分別 pH=pI 溶解度最小等電點(diǎn)沉淀與分別等電點(diǎn)沉淀與分別大部或全部沉淀下來大部或全部沉淀下來pHpI仍留在溶液中仍留在溶液中蛋白質(zhì)的分別蛋白質(zhì)的分別沉淀出來的蛋白質(zhì)可堅(jiān)持天然構(gòu)象，能再溶解沉淀出來的蛋白質(zhì)可堅(jiān)持天然構(gòu)象，能再溶解于水并具有生物活性。于水并具有生物活性。等電聚焦電泳等電聚焦電泳加加 酸酸加加 堿堿pI小小大大pH高高低低關(guān)鍵是構(gòu)成關(guān)鍵是構(gòu)成pH梯度梯度等電點(diǎn)的測(cè)定等電點(diǎn)的測(cè)定 從實(shí)際上講從實(shí)際上講,一種蛋白質(zhì)只需一個(gè)等電點(diǎn)一種蛋白質(zhì)只需一個(gè)等電點(diǎn) ,但等電但等電點(diǎn)測(cè)定結(jié)果受實(shí)驗(yàn)方法和條件點(diǎn)測(cè)定結(jié)果受實(shí)驗(yàn)方法和條件 (溶劑性質(zhì)、離子溶劑性質(zhì)、離子強(qiáng)度等強(qiáng)度等)影響較大，影響較大， 一種蛋白質(zhì)也能夠具有多個(gè)一種蛋白質(zhì)也能夠具有多個(gè)等電點(diǎn)。等電點(diǎn)。 在在這篇文章中這篇文章中,作者指出：作者指出：“很多學(xué)者發(fā)現(xiàn)很多學(xué)者發(fā)現(xiàn),經(jīng)過各經(jīng)過各種色譜均證明為純品的重組蛋白在等電聚焦時(shí)表種色譜均證明為純品的重組蛋白在等電聚焦時(shí)表現(xiàn)為多條帶現(xiàn)為多條帶,這種景象的出現(xiàn)能夠與蛋白質(zhì)空間構(gòu)這種景象的出現(xiàn)能