表觀遺傳調(diào)控對腹主動脈瘤患者單個核細(xì)胞影響實(shí)用教案

1、研究研究(ynji)背景背景 AAA的發(fā)病率逐年上升。破裂性AAA死亡率高。 病因復(fù)雜：氧化損傷、炎癥、血管退行性變、中膜平滑肌的減少、自身免疫性疾病的特征等。 前期研究(ynji)已證實(shí)AAA患者外周血存在Fas系統(tǒng)缺陷和Treg數(shù)量和功能的缺陷。 Jian Zhang, et al. Impaired Fas-induced apoptosis of T lymphocytes in patients with abdominal aortic aneurysms J VAS SURG 2007 May;45(5):1039-46 Yin M, et al. Deficient CD4+C

2、D25+ T regulatory cell function in patients with abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2010; 30: 1825-31第1頁/共18頁第一頁，共19頁。 表觀遺傳學(xué)：不改變DNADNA序列的情況下改變基因的功能(gngnng)(gngnng)。 研究內(nèi)容：DNADNA甲基化、組蛋白乙?；取?表觀遺傳學(xué)調(diào)控具有可逆性。研究研究(ynji)背景背景第2頁/共18頁第二頁，共19頁。Krishna et al. Genetic and epigenetic mecha

3、nisms and their possible role in AAA Atherosclerosis 2010.第3頁/共18頁第三頁，共19頁。研究研究(ynji)目標(biāo)目標(biāo) 1.研究AAA患者外周血單個核細(xì)胞DNA甲基化和組蛋白乙?；降母淖?。的直徑大小是否與DNA甲基化和組蛋白乙?；淖兓?binhu)存在相關(guān)性 3.與表觀遺傳學(xué)改變密切相關(guān)的酶類的改變第4頁/共18頁第四頁，共19頁。實(shí)驗(yàn)設(shè)計流程圖 正常(zhngchng)對照組提取(tq)DNA提取(tq)組蛋白提取RNADNA濃度測定BCA蛋白測定RNA濃度測定DNA甲基化測定組蛋白乙酰化測定Real-time PCRAAA組

4、Ficoll分離PBMCs統(tǒng)計學(xué)分析： t檢驗(yàn)、 2檢驗(yàn)、相關(guān)性分析第5頁/共18頁第五頁，共19頁。實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)方法方法1.一般(ybn)資料 AAA組組(22 例例)對照組對照組(20 例例)P 值值性別（男）17(77%)17(85%)0.524年齡（歲）65.778.5263.39.940.391吸煙史7(32%)8(40%)0.58高血壓病史13(59%)9(45%)0.361糖尿病病史3(14%)4(20%)0.58冠心病病史4(18%)3(15%)0.782WBC（*109/L）7.832.566.591.730.102LB（*109/L）1.850.392.

5、170.620.11第6頁/共18頁第六頁，共19頁。實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)方法方法2.腹主動脈瘤直徑(zhjng)序號序號性別性別/年齡年齡AAA直徑直徑序號序號性別性別/年齡年齡AAA直徑直徑1M/725.012M/623.82F/745.013M/703.23M/626.014M/645.54M/556.215M/583.75M/785.416M/616.76M/725.017F/595.87F/605.818F/693.48F/655.019M/715.29M/477.020M/814.810M/594.921M/766.111M/744.922M/585.5第7頁/共18頁

6、第七頁，共19頁。實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)方法方法 3.引物設(shè)計(shj)基因名稱基因名稱上游引物（上游引物（5-3）下游引物（下游引物（5-3）DNMT1CTTCGGCAACATAATGGACACTTTGGCCAACATACAAAGCTTGADNMT3ACCGGAACATTGAGGACATCTCAGCAGATGGTGCAGTAGGADNMT3BCCCATTCGAGTCCTGTCATTGGTTCCAACAGCAATGGACTMBD1CACCCTCTTCGACTTCAAACAAGCAACCTGACGTTTCCGAGTCTTMBD2AACCCTGCTGTTTGGCTTAACCGTACTTG

7、CTGTACTCGCTCTTCMBD3CCGCTCTCCTTCAGTAAATGTAACGGCTGGAGTTTGGTTTTCAGAAMBD4TGGTGGTGCATGCCTGTAATTGAGACAGGGTCTCTCTCTGTCATHDAC1AGACAGCTGTGGCCCTGGATAGGAGCTTGAAATCTGGTCCAAAGTAHDAC2AGTCAAGGAGGCGGCAAAATGCGGATTCTATGAGGCTTCAHDAC4AAGGAGTGGACATTGCTGATTCAGCAGCTCCACTHDAC5TCACTGTCACCAACTCACCAGGAATAGAGGATGTGCHDAC7CTTCTC

8、CACAAGGACAAGCTCCAGGGTTCTGTAGGGAPDHCCACCCATGGCAAATTCCCATGGCATCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC第8頁/共18頁第八頁，共19頁。實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果結(jié)果第9頁/共18頁第九頁，共19頁。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶實(shí)驗(yàn)甲基轉(zhuǎn)移酶實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果結(jié)果第10頁/共18頁第十頁，共19頁。甲基結(jié)合蛋白實(shí)驗(yàn)甲基結(jié)合蛋白實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果結(jié)果第11頁/共18頁第十一頁，共19頁。組蛋白乙?；瘜?shí)驗(yàn)組蛋白乙酰化實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果結(jié)果*第12頁/共18頁第十二頁，共19頁。組蛋白去乙酰酶實(shí)驗(yàn)組蛋白去乙酰酶實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果結(jié)果第13頁/

9、共18頁第十三頁，共19頁。H3DNMT1、MBD2HDAC1、HDAC7PBMCs proliferation 第14頁/共18頁第十四頁，共19頁。第15頁/共18頁第十五頁，共19頁。結(jié)論結(jié)論(jiln)(jiln)1. 表觀遺傳學(xué)的調(diào)控參與了腹主動脈瘤發(fā)病過程。2.單個核細(xì)胞增殖是腹主動脈瘤具有免疫學(xué)特征的改變。3.通過(tnggu)干預(yù)與表觀遺傳學(xué)相關(guān)的酶類為非手術(shù)治療腹主動脈瘤提供新的理論依據(jù)。第16頁/共18頁第十六頁，共19頁。謝謝(xi xie)各位嘉賓！第17頁/共18頁第十七頁，共19頁。感謝您的觀看(gunkn)！第18頁/共18頁第十八頁，共19頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)研究背景。病因復(fù)雜：氧化損傷、炎癥(ynzhng)、血管退行性變、中膜平滑肌的減少、自身免疫性疾病的特征等。前期研究已證實(shí)AAA患者外周血存在Fas