磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法

1、磷酸鹽緩沖液(PBS配制方法科研實驗2010-04-20 22:25:48 閱讀935評論0字號：大中小 訂閱0.01M PBSPBS (135 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4 ，pH 7.2)PBS 緩沖液(pH7.2 7.4) : NaCl 137mmol/L , KCl 2.7mmol/L , Na2HPO44.3mmol/L , KH2PO4 1.4mmol/L稱 7.9g NaCl , 0.2g KCl , 0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4) 禾口 1.8g K2HPO4 , 溶于800

2、 ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1 L 保存于4 C冰箱中即可。需要注意的是，通常所說的濃度 0.01 M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度 ，而 非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制：0.2M Na2HPO4 :稱取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4 :稱取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于 1000ml 水各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml):取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4，81ml 0

3、.2mol/L 的Na2HPO4,即可。然后只需將0.2M PB (pH=7.4)按相應比例適當稀釋 即可，如：0.1M PB (PH=7.4 ):取 500ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.01M PB ( PH=7.4 ):取 50ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.02M PB ( PH=7.4 ):取 100ml 0.2 M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。 若需要NaCl的話，加入 NaCl至0.9% (g/100ml )即可。另：其它各種另 PH值的0.2M PB (100ml)配方：pH0.2M NaH2PO4(ml)0.2M

4、Na2HPO4 (ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M 磷酸鹽緩沖液PBS ）配制方法稱取 8g NaCl 、0.2g KCl 、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4, 溶于 8

5、00ml 蒸餾水 中，用 HCl 調(diào)節(jié)溶液的 pH 值至 7.4 ，最后加蒸餾水定容至 1L 即可。在15lbf/in2（1034105Pa）高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4 C冰箱中。需要注意的是， 通常所說的濃度 0.01M 指的是緩沖溶液中所有的 磷酸根 濃度，而非 Na 離子或 K 離子的濃度， Na 離子和 K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。 如果是用于 免疫組化的話，則需要在配置的時候分別加入 100 u/ml 青霉素和鏈霉素之后再調(diào) PH、定容、滅菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4

6、2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根據(jù)經(jīng)驗來看，新鮮配置的 PBS 攪勻后其 PH 值約在 7.2-7.4 之間，可是在溫度的 影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過晝夜的時間后， PH 值會明 顯改變（我親自測過偏酸）。所以做實驗的同學可要注意了， PH 值可能會影響實 驗結(jié)果，甚至可能導致陰性。所以務必記得這個時候和天氣，要加強實驗條件控制 問題。每次使用前最好用試紙測一下過夜了的 PBS ，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重 新?lián)Q新液。PBS 緩沖液稱取 NaCl 8g ，KCl 0.2g ，Na2HPO4 ?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.2

7、4g ，溶于 900ml 雙蒸水中，用鹽酸調(diào) pH 值至 7.4，加水定容至 1L ，常溫保存?zhèn)溆?。PBST 緩沖液取300 口 l Tween-20加入PBS 100ml中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。 如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時候十倍稀釋，那么，在剛配好 濃縮液時， PH 在 6.5 左右，明顯偏酸。 不能用鹽酸調(diào)。 雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)， 但是有更方便的方法。十倍稀釋以后， PH 自動升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個可以先取 少量試一試，配好之后再測一次 PH8.0 的 PBS 配方詳細1. NaCl 137mmol/L ， KCl 2.7mmol/L ，

8、 Na2HPO4 4.3mmol/L ， KH2PO4 1.4mmol/L2. 向燒杯中加入約 800 ml 的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加濃鹽酸將 pH 值調(diào)節(jié)至 8.0，然后加入去離子水將溶液定容至 1 L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述 PBS Buffer 中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充 1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2 。0.05mol/L PBS（磷酸緩沖液 Phosphate Buffer Solution , PBS）的配制：甲液：0.05mol/L Na2HPO4 溶液：稱取磷酸氫二鈉 9.465g 7.099g,加蒸 餾水 至 1000ml ;乙液： 0.05mol/L KH2P04 溶液: 稱取磷酸二氫鉀 , 9.07g 6.803g, 加蒸餾水至 1000m1 。將甲乙液分裝在 棕色瓶內(nèi)，于4C冰箱中保存，用時甲、乙兩液各按不同比例混 合，即可得所需 pH 的緩沖液 ,見下表 :pH甲液ml乙液 mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2