病原微生物標本采集、運送

1、病原微生物檢驗標本采集、運送操作規(guī)程正確的標本采集，運送，保存和處理對于微生物檢驗工作質(zhì)量至關重要，為了準確檢出病原菌，避免漏檢與誤診，臨床醫(yī)護人員和實驗室工作人員應掌握微生物標本的選擇，采集，運送，保存及處理的一般原則。一、標本采集的一般原則1.早期采集采集時間最好在病程早期，急性期，且必須在使用抗菌藥物之前采集，確保病原菌的檢出。2.無菌操作采集標本時應盡量減少或避免感染部位附近或皮膚黏膜正常菌群的污染，使病原菌與正常菌群混淆，造成臨床誤診。采集的標本應存放在無菌容器內(nèi)，容器不能使用消毒劑處理，標本中也不能添加防腐劑，以免降低病原菌的檢出。3.適量的標本標本量過少可能導致假陰性結果。4.適

2、當?shù)牟杉椒▽τ趨捬蹙柩蹙蚣嫘詤捬蹙牟杉椒ㄊ遣煌?，用于厭氧菌培養(yǎng)的標本應盡量用注射器采集抽取物，室溫保存，不能冷藏和冷凍。5.盛放標本的容器采集標本應存放在無菌，防漏，應帶有螺旋蓋的容器內(nèi)。二、標本的運送1.標本采集后立即送檢，若有延遲也應在2小時內(nèi)送到實驗室，否則會影響病原菌的檢出，一般性的細菌培養(yǎng)標本若需延遲送檢時，應置于4度冰箱保存，且不能超過24小時。2.臨床標本最佳運送時間取決于標本的量，少量液體（小于1ml）或組織（小于1cm3）應在1530分鐘內(nèi)送到實驗室，較多量的標本置于運送培養(yǎng)基中可放1224小時，厭氧培養(yǎng)標本原則上是床邊接種，如延遲送檢，需保存在厭氧運送培養(yǎng)基中

3、，室溫保存，不得超過24小時。三、不同標本的采集，運送（一）血液標本采集，運送1.血培養(yǎng)指針征當患者出現(xiàn)：發(fā)熱（大于38度）或低溫（小于36度），寒戰(zhàn)，白細胞增多,皮膚黏膜出血，休克，多器官衰竭，血壓降低，c反應蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出現(xiàn)粒細胞減少，血小板減少等，具備上述一種或幾種體征時，臨床懷疑菌血癥應采集血液標本進行血培養(yǎng)，對入院危重感染患者應在未使用抗菌藥物治療前，及時做血培養(yǎng)。2.對懷疑菌血癥、真菌血癥的患者，在考慮使用抗菌藥物之前，應立即采集血培養(yǎng)標本。必須同時或間隔短時間內(nèi)采集套以上血培養(yǎng)標本。成年患者：推薦同時采集套（不同部位）血培養(yǎng)標本（即雙瓶雙臂同時采集血培養(yǎng)標本），

4、采血量每瓶不少于5ml;嬰幼兒患者：推薦同時采集次（不同部位）血培養(yǎng)標本,采血量每瓶不少于2ml。（少于病人總血容量的1%）.在采取血培養(yǎng)后的25天內(nèi)，無需重復采取血培養(yǎng)。兩個例外：細菌性心內(nèi)膜炎和金黃色葡萄球菌菌血癥。 3.血標本采集的量是影響檢出率的最重要的因素。檢出率與采血量成比例增長，每增加1ml的血液，病原菌的檢出率就會相應增加。兒童患者血液中病原菌濃度較高，血培養(yǎng)量無需等同于成人。采用一對（需氧瓶+厭氧瓶）組合，比采用二個需氧瓶的組合可檢出更多的葡萄球菌、腸桿菌科細菌和厭氧菌。采血量不能滿足推薦的量時，應首先滿足需氧瓶的需要。 推薦從外周靜脈采集血液標本,不推薦

5、靜脈留置導管，因其常伴有高污染率。如果必須從留置導管內(nèi)采血，也應同時從外周靜脈采集另外一個血培養(yǎng)標本以幫助陽性結果的判讀。4.血標本采集的注意事項在采血之前，血培養(yǎng)瓶的橡皮塞需使用75%酒精消毒并干燥。然后再進行穿刺部位的皮膚消毒。嚴格按照“酒精、含碘消毒劑、酒精”的消毒步驟操作，并等待足夠的消毒時間。嚴格無菌操作，不允許在皮膚消毒后用手接觸靜脈，除非帶有無菌手套.不推薦采血和接種血培養(yǎng)瓶更換注射器針頭;采集后的血培養(yǎng)瓶應在1小時之內(nèi)送往實驗室,血培養(yǎng)瓶在接種前和接種后均不得冷藏或冷凍。(二)痰培養(yǎng)標本采集，運送1.痰培養(yǎng)指征上呼吸道感染包括咽炎，喉炎，會咽炎等都可采集鼻，鼻咽，口咽拭子標本培

6、養(yǎng)。下呼吸道感染：凡是咳嗽，咳痰，痰呈膿性，粘稠或血性等都可采集痰標本。2.標本的采集采集前囑咐病人先用清水漱口，摘去牙托，因唾液中口咽部定植菌的濃度可達108-109/ml，去除表面的菌群。教育病人深咳，收集從下呼吸道咳出的痰液。在抗生素應用前采集痰標本;標本采集后12h內(nèi)送往實驗室進行處理，采集標本過程中要有專業(yè)的醫(yī)務人員指導;無痰可用35NaCl 5ml霧吸約5min導痰；也可用物理療法、體位引流、鼻導管抽吸等方法取痰。3.正常的痰標本低倍視野下鱗狀上皮細胞小于25個，白細胞大于10個。如果低倍視野下鱗狀上皮細胞大于25個，白細胞小于10個應不做或僅在特殊要求時做培養(yǎng)，如做培養(yǎng)

7、，報告中注明“鏡檢結果表明標本口咽分泌物污染明顯”。4痰培養(yǎng)方法的局限性多數(shù)引起肺炎的病原菌不能培養(yǎng)出，如病毒，軍團菌，衣原體等。影響因素很多：如黏液包裹、定植菌污染。建議痰培養(yǎng)同時做血培養(yǎng)和痰涂片鏡檢。5.注意事項常規(guī)的痰培養(yǎng)需在2小時內(nèi)送檢，若懷疑嗜血桿菌，肺炎鏈球菌感染時必需隨留隨送;標本中不能混入唾液與鼻咽分泌物等。（三）尿培養(yǎng)標本采集，運送1.尿培養(yǎng)指征尿路感染，腎結核，泌尿系結石，膀胱排空功能受損或前列腺增生等患者，出現(xiàn)尿頻，尿急，尿痛等膀胱刺激癥狀，肉眼膿尿或血尿，尿常規(guī)檢查有白細胞或亞硝酸鹽陽性，不明原因的發(fā)熱，尿道口有膿性分泌物等癥狀，需采集尿培養(yǎng)標本送檢。2.標本的采集清潔

8、中段尿液，囑咐患者用肥皂水清洗，棄去開始流出的尿液，以沖刷尿道口的細菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿；導尿管尿液，留置導管尿液標本常通過專門的采樣端口采集，不能把導尿管與尿袋拔開后收集尿液，采樣端口用酒精消毒；必要時，可先夾住導尿管但不能超過30分鐘；將注射器針頭插入采樣端口，抽吸出尿液；注入無菌杯或試管中。膀胱穿刺尿，無菌操作，用無菌注射器刺入膀胱抽取510ml尿液送檢，主要用于厭氧菌的培養(yǎng)或留取標本困難的嬰幼兒標本的采集，此法可避免尿液標本的污染。3.標本的采集量一般成人采集10-15ml,嬰幼兒不得少于1ml。診斷癥狀明顯的病人（如尿急、尿頻、尿痛），一份標本就已足夠，治療48-72小

9、時后再采集第二份標本。對于癥狀不明顯的病人，需采集2-3份標本。懷疑腎結核時，應連續(xù)3天采集晨尿。4.室溫都有利于病原菌和污染菌生長繁殖，標本采集后立即送檢和接種，室溫下存放不能超過2小時，（夏季保存時間應適當縮短或冷藏），4-8度冷藏保存時間也不能超過24小時，冷藏的尿液不能用于淋球菌的培養(yǎng)。5注意事項必須無菌操作，采用帶蓋防滲漏的無菌杯收集，多次收集或24小時尿不能用作培養(yǎng)。集尿袋內(nèi)的尿液不能用作培養(yǎng)。導尿管末端的尿液也不能用于培養(yǎng)，很難避免沒有尿道菌群污染。在使用抗菌藥物前留取標本，尿液中不能加任何防腐劑或消毒劑，抑制細菌的生長。（四）糞便標本采集，運送1.送檢指征當患者出現(xiàn)腹瀉，大便每

10、天大于或等于3次，糞便的性狀異常，可為稀便，水樣便，粘液便，膿血便或血便，伴有惡心，嘔吐，食欲不振，發(fā)熱，腹痛及全身不適等，大便鏡檢白細胞大于等于5個每高倍視野，抗菌藥物治療后的腹瀉等。 2.標本的采集方法，時間與量盡可能在發(fā)病早期（急性期）或應用抗菌藥物治療之前，采集新鮮的糞便，懷疑沙門菌感染時，應在發(fā)病2周以后采集。自然排便法，排便后，挑取有膿血或粘液部位的大便，液狀糞便取絮狀物盛于無菌的容器內(nèi)；直腸拭子采集法，用于排便困難的患者或嬰幼兒。一般用拭子采集大于2g的標本送檢，若標本為水樣，采集大于2ml的標本于無菌容器中送檢。3標本的運送與保存標本采集后應盡快送檢，室溫條件下不能超

11、過2小時，如不能及時送檢可加入ph7.0磷酸鹽甘油緩沖保存液中或?qū)ｉT的大便運送培養(yǎng)基中置4度冰箱保存，但不能超過24小時。高度懷疑霍亂弧菌感染的標本必須符合特殊標本的安全要求。4.注意事項最好在用藥前，采集新鮮的標本盛裝在無菌容器內(nèi)，立即送檢，提高陽性檢測結果。厭氧菌的培養(yǎng)盡量避免與空氣接觸和正常的菌群污染。(五)膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標本的采集及運送1.送檢指征凡是當患者有外傷感染，術后切口感染，導管感染，臍帶殘端感染，有膿液和分泌物時，應采集標本培養(yǎng)。 2.標本的采集時間和方法在使用抗生素前或停用藥12天以后，或使用下一次抗生素前采集，對膿腫性分泌物應先用生理鹽水或75%的酒精沖洗

12、潰瘍表面滲出物，盡可能抽取膿液于無菌杯內(nèi)送檢。對于封閉性膿腫時，應無菌操作抽取膿液310ml于無菌試管內(nèi)或血培養(yǎng)瓶內(nèi)送檢，懷疑厭氧菌感染時，應做床旁接種或注入?yún)捬跗績?nèi)（310ml）送檢，最佳方法是采集組織送檢。3.標本的運送標本采集后應于2小時內(nèi)送微生物實驗室進行處理，若不能及時送檢，需氧培養(yǎng)的標本除對環(huán)境敏感的淋病奈瑟菌，腦膜炎奈瑟菌和流感嗜血桿菌外，可保存在4度冰箱中，但保存時間不能超過24小時;厭氧培養(yǎng)時，需用厭氧瓶或厭氧袋在室溫下保存，但不能超過24小時。 4.注意事項盡可能在用抗生素前采集，若患者也用藥，應在檢驗單上注明抗菌藥名，并在下次用藥前采集；對于開放性的傷口，采集前應先除去表面污染菌，以防帶入與感染無關的皮膚定值菌。干燥結痂的標本一般不做培養(yǎng)，除非有滲出物。采集標本時應無菌操作。（六）穿刺液標本的采集與運送穿刺液主要包括腦脊液，胸腹水，心包液，膽汁，關節(jié)液及鞘膜液，在正常標本中，上述液體是無菌的，在排除