HIV測定ELISA法珠海麗珠第二人民醫(yī)院

1、HIV 測定 ELISA 法珠海麗珠)1、檢驗目的應用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法原理(ELISA)定性檢測人血清、血漿標本中的 HIV (1+2)型抗體的測定，用于HIV感染的輔助診斷，抗HIV藥物治療的效果的 監(jiān)測。2、原理采用夾心ELISA方法檢測血清或血漿標本中人類免疫缺陷病毒HIV (1+2)型抗體，預包被高純度基因重組 HIV (1+2)型抗原，可與標本中的抗-HIV抗體 反應，加入HRP標記HIV (1+2)型抗體抗原結(jié)合，形成抗原抗體酶標抗原 復合物，然后加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應。通過酶標儀檢測吸光度(0D值)，根 據(jù)0D值判斷HIV抗體的存在與否。3、性能參數(shù)靈敏度高( 0.5ng

2、/ml )4、標本要求( 1 )標本類型：血清，血漿。( 2)標本采集：見標本采集手冊(3) 標本儲存和運輸：室溫放置不超過 8小時，2-8C不超過72小時，-20C 可長期保存，應避免反復凍融( 4)標本拒收狀態(tài)：細菌污染，嚴重溶血或脂血標本不能作測定。5、容器和添加劑類型6、試劑(1)試劑名稱：人類免疫缺陷病毒 HIV(1+2)型抗體診斷試劑盒。( 2)試劑生產(chǎn)廠家：上?？迫A生物工程股份有限公司( 3)包裝規(guī)格： 96T/Kit(4) 試劑盒組成：、HIV酶標板；、HIV酶標試劑；、HIV( 1+2)型陽 性及陰性對照血清；、顯色劑A液和B液；、此外還有濃縮洗滌液、終止液、 自封袋、封板膜

3、、說明書等。7、操作步驟 、配液：將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水 25倍稀釋至1000ml備 用。 、編號：將樣品對應微孔按序編號，每板設陰性對照2孑L、陽性對照3孔，空白對照 2 孔。 、加樣：分別在相應孔加入待檢標本、陰性、陽性對照100卩l(xiāng)，用封板膜封板后置37C溫育60min。 、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機選擇 5次程序，洗板后在干凈紗布 上拍干。 、加酶：每孔加酶結(jié)合物100卩l(xiāng) （空白對照孔除外），充分混勻，用封板 膜封板后置37r溫育30min。 、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機選擇 5次程序，洗板后在干凈紗布 上拍干。 、顯色：每孔加入底物緩沖液 50卩l(xiāng)，TM

4、B 50卩l(xiāng)，輕輕振蕩混勻，封板 后置37E避光顯色10min。 、測定：每孔加終止液50卩l(xiāng)，輕輕振蕩混勻。設定酶標儀波長為 450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630 nm）,空白調(diào)零，讀取各孔 OD值。 、判斷結(jié)果：計算臨界值（cut-off ）值。臨界值=陽性對照值X 10% （若陽性對照OD值2.5按2.5計算）正常情況下，陰性對照孔的ODfiw 0.08。樣品ODfiv臨界值者為HIV抗體 陰性。若1孔陰性對照的ODfi>0.08應舍棄，若有2孔或2孔以上陰性對照的 ODfi> 0.08，應重復實驗。正常情況下，陽性對照孔的ODfi0.80。樣品OD

5、4;臨界值者為HIV抗體 陽性。若1孔陽性對照的OD值V 0.8應舍棄，若有2孔或2孔以上陽性對照的 ODfiv 0.8，應重復實驗。注意：對于篩查陽性標本，應重新取樣雙孔復試，復試陽性者應按照全國 HIV檢測管理規(guī)范送HIV確證實驗室進行確證試驗。10、質(zhì)量控制：每塊板設陰陽性及空白對照， 并于每次試驗用自制質(zhì)控血清作質(zhì)控， 將質(zhì)控 血清孔0D值采用“即刻法”計算或標在質(zhì)控圖上，如質(zhì)控有效，表明試驗可靠；如失控，則要檢查試劑效期、 儲藏溫度、試驗溫度是否正常、 操作步驟是否正確， 直至重新試驗使其在控。11、干擾和交叉反應12、生物參考區(qū)間 正常人陰性。13、 患者檢驗結(jié)果的可報告區(qū)間陽性表示 HIV 病毒感染。14、 臨床意義用于HIV感染的