Lab培養(yǎng)基的配制與滅菌

1、2 Sterilization destruction of all forms of microbial life, including endospores. Physical MethodsMoist heatAutoclavingAction - protein denaturation.Very effective method of sterilization; at about 15 psi（Ib/in2 ） of pressure (121C 250F), all vegetative cells and their endospores are killed in about

2、 15 min.Dry heatDirect flamingexample: Inoculation loopHot-air sterilizationBaking in oven Very effective method of sterilization, but requires temperature of 170C 340 Ffor about 2 hr.Filtration Separation of bacteria from suspending liquid. Removes microbes by passage of a liquid or gas through a s

3、creen like material. Most filters consist of diatomaceous earth, cellulose acetate or nitrocellulose. 0.45 m filters removes most bacteria, 0.20 m more inclusive, viruses need 0.01 m. Useful for sterilizing liquids (enzymes, vaccines) that are destroyed by heat.三 實(shí)驗(yàn)材料與器材 培養(yǎng)基：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉

4、紅、鏈霉素、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、KNO3、K2HPO43H2OMgSO47H2OFeSO47H2O. 器材：玻璃器皿、天平、pH試紙、滅菌鍋等四 操作步驟稱量溶解調(diào)pH*（過濾*）分裝*加塞*包扎高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌滅菌操作步驟 首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。開

5、啟電源加熱，并同時(shí)打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用 1.05 kg/ cm2 ，121.3 ，20 min滅菌。滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開排氣閥，就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37 溫箱培養(yǎng)24 h，經(jīng)檢查若無雜菌生長(zhǎng)，即可待用。五注

6、意事項(xiàng) 培養(yǎng)基分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 使用滅菌鍋應(yīng)嚴(yán)格按照操作程序進(jìn)行。滅菌所需時(shí)間到后，要先切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，才能打開排氣閥。六思考題 在配制培養(yǎng)基的操作過程要注意哪些問題？ 高壓蒸汽滅菌時(shí)，為什么要先將滅菌鍋鍋內(nèi)的冷空氣完全排盡？Filtration Separation of bacteria from suspending liquid. Removes microbes by passage of a liquid or gas through a screen like material. Most filters consist of diatomaceous earth, cellulose acetate or nitrocellulose. 0.45 m filters removes most bacteria, 0.20 m more inclusive