氨基酸總量氨態(tài)氮的測定

1、氨基酸總量(氨態(tài)氮)的測定一、目的與原理：1、了解掌握單指示劑與雙指示劑甲醛滴定法測氨基酸總量的方法與原理：(一)原理：氨基酸具有酸、堿兩重性質(zhì),由于氨基酸含有-COO虛顯示酸性,又含有-NH2基顯示堿性.由于這二個(gè)基的相互作用,使氨基酸成 為中性的內(nèi)鹽.當(dāng)參加甲醛溶液時(shí),-NK與甲醛結(jié)合,其堿性消失,破 壞內(nèi)鹽的存在,就可用堿來滴定-COOHS,以間接方法測定氨基酸的量, 反響式可能以下面三種形式存在.1 V 07R C C * RC-COH R -( c <oi IIIfNI1)N <+ Na()HRCH-coonk - CH|A,NHCHjOHn citABCH- COOH

2、Abb - CH1O(二)試劑(1)40 %中性甲醛溶液,以麝香草酚酥為指示劑,用INNaO骼液中和.(2)0.1 %麝香草酚酥乙醇溶液.(3)0.100N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液.三操作步驟：稱取一定量樣品約含20毫克左右的氨基酸于燒杯中如為固體加水 50毫升,力口 2-3滴指示劑,用0.1OON NaO解液滴定至淡藍(lán)色.參加 中性甲醛20毫升,搖勻,靜置1分鐘,此時(shí)藍(lán)色應(yīng)消失.再用0.1OONNaOH 溶液滴定至淡藍(lán)色.記錄兩次滴定所消耗的堿液毫升數(shù),用下述公式計(jì) 算計(jì)算：氨基酸態(tài)氮= N V X 0.014 X 100/W式中：N: NaOHS準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃渡.V: NaOHS準(zhǔn)溶液消耗的總量m1

3、W樣品溶液相當(dāng)樣品重量克.0.014 :氮的毫克當(dāng)量.三、雙指示劑甲醛滴定法：一原理：與單色法相同,只是在此法中使用了兩種指示劑.從分析結(jié)果看,雙指 示劑甲醛滴定法與亞硝酸氮?dú)馊萘糠ù朔ú僮鲝?fù)雜,不作介紹相近單 色滴定法稍偏低,主要由于單指示劑甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作為麝香草酚酥的終點(diǎn).PH值在9.2 ,而雙指示劑是以氨基酸溶液的 PH 值作為中性紅的終點(diǎn),PH值為7.0,從理論計(jì)算看,雙色滴定法較為準(zhǔn) 確.二試劑：1三種試劑同單指示劑法20.1 %中性紅50 %乙醇溶液三操作步驟：取相同的兩份樣品,分別注入 100毫升三角燒瓶中,一份參加中性紅指示劑2-3滴,用0.100N NaO皤液滴定終點(diǎn)由紅變琥珀色,記錄用 量,另一份參加麝香草酚酥3滴和中性甲醛20毫升,搖勻,以0.100NNaOH 準(zhǔn)溶液滴定至淡藍(lán)色.按下述公式計(jì)算.計(jì)算：氨基酸態(tài)氮%= NV 2-V1 X0.014/W X 100式中：5 用麝香草酚酥為指示劑時(shí)標(biāo)準(zhǔn)堿液消耗量毫升V1：用中性紅作指示劑時(shí)堿液的消耗量 m1.N:標(biāo)準(zhǔn)堿液當(dāng)