常規(guī)實驗所用溶液配方大全

1、常規(guī)實驗所用溶液配方大全常規(guī)實驗所用溶液配方大全 1.0.5mol/LEDTA 配制 組分濃度： 0.5mol/l EDTA， PH=8 配制量：500ml 配制方法(1)稱取93.06克EDTA.Na2.2H2O，置于500 ml燒杯中 (2)加入約400ml dd H2O.用熱磁力攪拌器充分攪拌 (3)用NaOH調節(jié)PH值到8，約用10克固體NaOH (4)在溶液冷卻后，再用NaOH調節(jié)至PH=8 (5)加dd H2O將溶液定容到500 ml (6)高溫高壓滅菌后，室溫保存 2.NaOH溶液的配制 組分濃度：5 mol/l NaOH 配制量：100 ml 配制方法(1)稱取固體NaOH20

2、克于容器中 (2)加入dd H2O定容到100 ml 3.100 mmol/l Tris-HCl的配制 組分濃度： mmol/l Tris-HCl， PH=6.4 配制量：250 ml 配制方法(1)稱取3.025克Tris于250 ml燒杯中. (2)加入約200ml dd H2O充分攪拌溶解. (3)用濃鹽酸調節(jié)PH值到6.4.所用濃鹽酸約3 ml (4)將溶液定容至250ml (5)用棕色瓶分裝于4度冰箱中 (6)如使用，用水浴加熱溶解. 4.氯仿-異戊醇的配制： 配制方法(1)簡單的體積混合，既要求比例為24：1即可 (2)儲存于棕色玻璃瓶子中 (3)置于4度冰箱以便日后使用 5.去污

3、劑： CTAB：可將細胞膜裂解，使DNA釋放到提取液中，同時也使組織勻漿中的蛋白質變性. EDTA：能與DNase的輔助因子Mg2+結合，使DNase失去活性，不能降解從細胞中釋放的DNA. 6.還原劑巰基乙醇：它抑制從細胞中釋放的多酚氧仿.防止植物組織發(fā)黃變褐. 7.氯仿異戊醇：它可把組織勻漿中變性的蛋白質除去，將DNA與細胞中的蛋白質、碳 水化合物等分開除去. 8.RNase：它可去除核酸中的RNA，只留下DNA. 9.硅珠懸浮液的配制 （1） 稱取1.2g硅珠粉，溶解于10ml無菌水中. （2） 放入4冰箱備用. （3） 使用時先渦旋使其混合均勻 10. 10×TE，500ml

4、配制如下： 將100mM Tris-Hcl（PH=8.0）6.057g與10mM EDTA（PH=8.0）1.8612g溶于400ddH2O中，調PH=8.0，定容到500ml。 11. 1×TE Buffer 組成濃度：10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0 配制量：500ml 配制方法：量取下列溶液于500ml燒杯中 1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml 0.5M EDTA PH=8.0 1ml 向燒杯中加入約400mldd H2O均勻混合；將溶液定容到500ml后，高溫高壓滅菌；室溫保存. 12. 聚丙烯酰胺凝膠電泳PAGE PAGE操

5、作流程及注意事項： 1、涂膠 1）將有耳玻片（耳朝下）泡于反硅化劑中，新液25分鐘，舊液30分鐘. 2）涂無耳正面玻片硅化劑.均勻點四滴，輕而勻的沿一個方向涂三次，靜10分鐘. 3）到時間取出.打開通風櫥風干30分鐘. 2、封膠 1）將兩玻片對貼于橡膠框中，放平，用力擰死，夾住橡膠管. 2） 溶廢瓊脂膠，分兩次：第一次50秒，第二次10-20秒，防止沸出. 3） 用小細長槍頭通透加膠槍頭，便于加樣通暢，少起氣泡. 4） 吸2500-3000ul液膠加速沿玻片邊緣快速順下滴，將兩面玻片充分封死，防止漏膠.以水平底線面水平高于底為佳，靜止凝膠15分鐘.（有時可先在封口加一點TBE以潤滑玻片，利于膠

6、流下） 3、灌膠 1) 用長細槍頭透開加膠槍頭 2) 從中間加入，每次不要全部打完，留一點在槍頭內(nèi).防止斷流而導致膠中含有氣泡. 3) 插梳子時兩端平整，梳子緊貼玻板，梳齒頭部不可有氣泡. 4) 拔梳子時先加一倍TBE液將梳子泡透，然后平行用力拔出. 5) 在插梳子15分鐘內(nèi)跟蹤觀察，適當下按，保證孔的深度. 6) 等待2小時，以便膠充分凝固. 4、吹孔 1） 向中間槽加入1倍粗制TBE，要淹沒過內(nèi)玻片約1厘米. 2） 拔梳子，小心平穩(wěn)，均勻平衡. 3）調1000p槍到300-600ul，進行吹孔，將小孔內(nèi)沉淀物吹打干凈，加樣中再視時吹5、加樣 1） 用細長專用槍加入DNA 0.5ul. 2）

7、 一手托另一臂的肘，以保證加樣手不抖. 3） 一定垂直加到孔中去，不脫尾，不吸水，不靠壁，干凈利落. 4） 加完一次.在放于桌旁的吸紙上，將細槍頭上余液吸干. 5） 首、中、尾各留1到2個孔，兩面膠孔的Marker不完全一樣，以便區(qū)分. 6） 加Marker 0.15ul 一般取0.3ul每孔注如一半，可用兩個孔. 6、跑膠 1) 向兩側槽中加入粗制TBE，至U管線處. 2) 打開電源，穩(wěn)壓到120V 3) 電泳2h左右 4) 當樣品跑到底部2cm處，關閉電源. 7、撬玻片 1）刀片不伸入過深.刀片平行于玻片，稍用力. 2）將沒有硅化劑的無耳玻片放于水盤中，還有梳子. 3）清理瓊脂膠，放于燒杯

8、中. 4）膠玻片放于盤中，銀染. 13. 2、TBE電泳母液（10×）的配制 1） 分別稱取54克Tris堿，27.5克硼酸，20ml 0.5mol/EDTA（PH=8.0） 2） 將各組分別加入1升燒杯中，用ddH2O定容到1升. 3） 在電泳時使用1倍工作液，按1：4與水混合. 4） 1倍液是為了增加電泳工作液的電流的電流量. 5） 盛于玻璃瓶，在室溫保存. 14. AgNO3的配制 量取AgNO3原液2500ul；將250ml dd H2O和2500ul AgNO3加入膠玻片上. （AgNO3原液的配制：50ml 中含AgNO3 7.5g 濃度為0.15g/ml） 15溴化乙錠

9、（10mg/ml） 組分濃度 10mg/ml 溴化乙錠 配制量 100ml 1稱取1.0g溴化乙錠，加入到200ml容器中。 2加入去離子水100ml，充分攪拌數(shù)小時完全溶解溴化乙錠。 3將溶液轉入棕色瓶，室溫避光保存。 4溴化乙錠最終工作濃度為0.5g/ml。 15. 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。 17.10mg/mlRnase（無DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L

10、的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl調pH至7.5，于-20貯存。（配制過程中要戴手套） 16. 5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。 10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水

11、中使終體積為100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應在臨用前配制） 2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20 17. DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分數(shù)為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應，不可用DEPC處理Tris緩沖液。 18. TE（用于懸浮和貯存DNA

12、） 成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L TrisHCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml 19. 5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液 成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補足1L 一.常用貯液與溶液1mol/L亞精胺（Spermidine）

13、: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學試劑級，無DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成

14、小份貯存于-20。1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20。或轉移100mg的二硫蘇糖醇 至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。8mol/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩

15、爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。100

16、mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。10mg/mlRnase（無DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl調pH至7.5，于-20貯

17、存。（配制過程中要戴手套）5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應在臨用前配制）

18、2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。100×Denhardt試劑（Denhardt's regent）成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（組分V） 水 2g 2g 2g 加水至總體積為100ml依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質，分裝成小份于-20貯存。10×標準DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）成

19、分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選） 0.5mg/ml BSA（組分V）（可選） 水 5ml 1mol/L 貯液 1ml 1mol/L 貯液 1ml 1mol/L 貯液 200ul 100 mmol/L 貯液 50ul 1 mmol/L 貯液 0.5ml 10 mg/mL 貯液 2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以購買到100mmol/L純dNTP

20、s貯液，-80可貯存至少6個月。10mmol/L dNTP混合液成分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液 2ul 100 mmol/L dCTP 貯液 2ul 100 mmol/L dGTP 貯液 2ul 100 mmol/L dTTP 貯液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量質量濃度為20聚乙二醇 2.5mol/L 氯化鈉 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.

21、6g 固體氯化鈉 補足100ml 加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。20×SSC成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水） 3mol/L 氯化鈉 水 88.2g 175.3g 補足1L 溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調pH為7.0，用水補足體積至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分數(shù)為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反

22、應，不可用DEPC處理Tris緩沖液。甲酰胺（deionized formamide） 直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮氣于-80貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate buffer） 按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（

23、Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。1mol/L 磷酸二氫鈉（ml）1mol/L 磷酸氫二鈉（ml）最終pH值877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2TE（用于懸浮和貯存DNA）成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml Tris緩沖液（Tris-HCl buffer） 將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調整終體積至1L。濃鹽酸的體積（ml）pH8.6