大腸菌群的計(jì)數(shù)試驗(yàn)

1、大腸菌群計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)MPN計(jì)數(shù)法一、設(shè)備和材料250ML隹形瓶3個(gè) 100ML 燒杯1個(gè)250MLs筒1個(gè)1000ML 燒杯1個(gè)15*150mnM管 3 個(gè)18*180mnM管 20 個(gè)玻璃棒1個(gè)剪刀1把均質(zhì)器電爐1ML刻度吸管4個(gè)杜氏小管接種環(huán)1個(gè)藥匙2個(gè)天平（感量0.1g）洗耳球二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1、配制培養(yǎng)基：LST培養(yǎng)基的配制：用天平稱取17.8gLST培養(yǎng)基于錐形瓶中加入500ML蒸儲(chǔ)水加熱煮沸至完全溶解分裝于裝有杜氏小管的大試管中，每管 10ML共10管高溫滅菌備用BGLB§養(yǎng)基的配制: 用天平稱取20gBGL羽養(yǎng)基于錐形瓶中加入500ML蒸儲(chǔ)水加熱煮沸至完全溶解分裝于裝有杜氏小管

2、的大試管中，每管 10ML高溫滅菌備用2、生理鹽水取4.25g氯化鈉于大燒杯中加入500ML蒸儲(chǔ)水溶解取225ML生理鹽水于錐形瓶中分別取9ML生理鹽水于3只小試管中將分裝好的生理鹽水進(jìn)行高溫滅菌3、滅菌：將均質(zhì)杯、100ML燒杯、刻度吸管、剪刀、接種環(huán)、洗耳球高溫滅菌備用三、取樣在提交的產(chǎn)品中隨機(jī)抽取三箱，從每箱中隨機(jī)抽取未打開(kāi)包裝的產(chǎn)品 1袋3袋，抽取不低于250g的樣品作為微生物指標(biāo)檢驗(yàn)試樣。四、檢驗(yàn)程序檢樣25 g(mL)樣品+225 mL稀釋液，均質(zhì)$10倍系列稀釋選才i 3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，接種LST肉湯管36C ± 1 0 48h ± 2h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣BG

3、LB 肉 |36C ± 1 C148h 土 2h*不產(chǎn)氣1F大腸菌群陽(yáng)性大腸菌群陰性查MPN表報(bào)告結(jié)果五、操作步驟初發(fā)酹試驗(yàn)1、稱取25g樣品，放人盛有 225m生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8 00or/min-10 000r/min 均質(zhì) 1 min-2 min ,制成 1:10 的樣品勻液。2、用1ml無(wú)菌吸管吸取1:10樣品勻液1ml,沿管壁緩緩注人9ml生理鹽水的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管，使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。3、換一只新的1ml無(wú)菌吸管吸取1:100樣品勻液1ml,沿管壁緩緩 注入9ml生理鹽水的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端

4、不要觸及稀釋 液面），振搖試管，使其混合均勻，制成1:1000的樣品勻液。4、將三個(gè)連續(xù)稀釋梯度的樣品原液在進(jìn)行 10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 ml樣品勻液于LST肉湯，每個(gè)稀釋度接種三管。5、同時(shí)做一組空白，在一支 LST肉湯中接種1ml生理鹽水。6、36 c±1C培養(yǎng)24h±2h ,觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，如未 產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h士 2h。記錄在24h和48h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯 管數(shù)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性，產(chǎn)氣者則進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)用接種環(huán)從所有48h士 2h內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物l環(huán)，移種于（BGLB肉湯管中，36c ±1C 培養(yǎng)

5、48h±2h ,觀察產(chǎn) 氣情況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽(yáng)性管。大腸菌群最可能數(shù)（MPN）的報(bào)告根據(jù)大腸菌群陽(yáng)性管數(shù)，檢索 MPN表，報(bào)告每克（或毫升）樣品中 大腸菌群的MPN值。大腸菌群最可能數(shù)(MPN )檢索表陽(yáng)性管數(shù)MPN95%M信限陽(yáng)性管數(shù)MPN95碗信限0.10.010.001上限下限0.10.010.001上限下限000<3.09.5220214.5420013.00.159.6221288.7940103.00.1511222358.7940116.11.218230298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.69410

6、03.60.1718301388.71101017.21.30102113.6383104391801107.41.32111113.63831212037420120113.64231316040420121154.5423209318420130164.542321150374202009.21.43832221040430201143.642323290901000202204.542330240421000210153.742331460902000211204.54233211001804100212278.794333>1100420注1:本表采用3個(gè)稀釋度【0.1g(mL)、0.01g(mL)和0.001g(mL),每個(gè)稀釋度接種3管。注2:表內(nèi)所列檢樣量如