臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制流程

1、臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量限制流程1、質(zhì)量的概念和質(zhì)量保證影響檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的因素很多,實(shí)驗(yàn)過程中,儀器、試劑和操 作等均會(huì)引起試驗(yàn)結(jié)果的誤差,衡量檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量常用準(zhǔn)確度和 精確度,或特異性和靈敏度.具體采用哪一種指標(biāo)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的性 質(zhì)決定,目前臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的工作內(nèi)容大致有 3類,衡量起質(zhì)量的 技術(shù)指標(biāo)不完全相同.第一類是檢出細(xì)菌的實(shí)驗(yàn),包括標(biāo)本直接涂片檢查和細(xì)菌分 離培養(yǎng).現(xiàn)代的細(xì)菌感染,混合菌較常見,一份標(biāo)本中,會(huì)有2種以 上細(xì)菌存在.無論標(biāo)本直接涂片還是別離培養(yǎng),檢驗(yàn)結(jié)果必須如實(shí)反映感染病灶中細(xì)菌的真實(shí)情況.這類實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量,應(yīng)該用細(xì)菌檢出率或細(xì)菌別離率來衡量.第二類是鑒定細(xì)菌的實(shí)驗(yàn).通過一系

2、列生理生化及形態(tài)學(xué)、 血清學(xué)的手段來鑒定病原菌. 對別離到的病原菌都做出準(zhǔn)確的鑒定 是反映細(xì)菌事工作質(zhì)量的一個(gè)重要方面.第三類是藥敏實(shí)驗(yàn).有稀釋法和紙片法,前者是半定量的實(shí)驗(yàn)可以用準(zhǔn)確度和精密度來衡量 ,后者以敏感或耐藥的形式報(bào)告 ,屬于定性的實(shí)驗(yàn),但實(shí)驗(yàn)過程中測量抑菌環(huán)是定量的指標(biāo).也應(yīng)以準(zhǔn) 確度和精確度衡量.所以實(shí)驗(yàn)室人員必須清楚熟悉到以上這一點(diǎn) ,在實(shí)驗(yàn)室的設(shè) 計(jì)和治理方面就應(yīng)該主動(dòng)設(shè)置誤差檢測系統(tǒng) ,實(shí)驗(yàn)中一旦出現(xiàn)誤差 及時(shí)發(fā)出警報(bào),查明原因及時(shí)糾正.2、室內(nèi)質(zhì)量限制在職人員須受過細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的專門根底教育以及相關(guān)的生物交全防護(hù)知識(shí),并以細(xì)菌檢驗(yàn)為專業(yè),及時(shí)終結(jié)并積累工作經(jīng)驗(yàn).作人員必須

3、具有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度 ,技術(shù)操作須完全遵守操作規(guī)程 , 并直接參與質(zhì)量限制工作.工作人員應(yīng)不斷增強(qiáng)自身的業(yè)務(wù)學(xué)習(xí),及時(shí)了解本領(lǐng)域的新進(jìn)展,將所掌握的新知識(shí)應(yīng)用到實(shí)際工作中.實(shí)驗(yàn)室治理人員應(yīng)注意利用一切時(shí)機(jī)培養(yǎng)技術(shù)人員,積極參加國際、國內(nèi)學(xué)術(shù)會(huì)議、專業(yè)培訓(xùn)班,獲取新信息.由于細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn),投 資人員培訓(xùn)遠(yuǎn)比投資與儀器設(shè)備更重要.操作手冊及參考書細(xì)菌室可以根據(jù)自己的實(shí)際情況制訂一本指導(dǎo)日常工作、簡明扼要的操作手冊,并在工作中不斷完善和修改.細(xì)菌室應(yīng)準(zhǔn)備一些細(xì)菌學(xué)參考書,解決某些少見的菌種的別離鑒定 判斷細(xì)菌的致病性及向臨床醫(yī)生解釋結(jié)果時(shí)用.3、設(shè)備質(zhì)量限制溫箱、冰箱每日工作開始,在翻開溫箱或冰箱等控溫

4、設(shè)備前,以及下 午下班前須觀察當(dāng)時(shí)設(shè)備的溫度并記錄.高壓滅菌器須定期檢查滅菌器的滅菌效果 ,至少每月1次.測試方 法可用留點(diǎn)溫度計(jì)或嗜熱芬抱菌等,并定期維修.生物平安柜新安裝必須由生產(chǎn)廠家提供安裝檢測報(bào)告,以后每年必須檢測一次,假設(shè)須更換濾網(wǎng),須由專門技術(shù)人員進(jìn)行,并提供檢測報(bào) 告.工作時(shí)檢測氣流、紫外燈正常與否 ,可用營養(yǎng)瓊脂檢測空氣中 細(xì)菌的沉降數(shù),紫外線必須有使用記錄,每3個(gè)月檢查一次性能接種 環(huán)要求長5-8cm,環(huán)直徑約3mm接種針長5-8cm.顯微鏡應(yīng)做好常規(guī)的清潔和保養(yǎng).所有的技術(shù)人員必須對顯微鏡的 對光、應(yīng)用和清潔正確步驟掌握.細(xì)菌鑒定儀應(yīng)及時(shí)更新系統(tǒng)操作軟件.定期清治儀器的探測

5、部位 弁用標(biāo)準(zhǔn)模板進(jìn)行校正,必要時(shí)根據(jù)菌株對每批號的鑒定卡、條、 板進(jìn)行一次測定,弁核對每個(gè)反響和藥敏試驗(yàn)的結(jié)果.4,培養(yǎng)基的質(zhì)量限制每批培養(yǎng)基應(yīng)有配制記錄,弁對不同性能的培養(yǎng)基要用以知特性的、穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行測定弁記錄,符合要求方可應(yīng)用.培養(yǎng)基的一般質(zhì)量限制工程檢測標(biāo)準(zhǔn)檢測頻率(1)外觀液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基含指示劑的培養(yǎng)基各種培養(yǎng)基都應(yīng)啟名稱、標(biāo)記和制備日期顏色、透明度、失水情況無菌落、不干裂無菌、顏色符合要求每周(2)平板深度,般培養(yǎng)基3mm每批MH 為 4-6mm(3)雙糖斜面底層與斜面之間至少有1cm的直立段,長度 不得過2/3試管,不可 干裂每批(4)無菌試驗(yàn)經(jīng)病壓滅菌后的培養(yǎng) 基

6、無菌分裝的試管或 平板選擇性培養(yǎng)基隨機(jī)取10個(gè),放35度孵箱24h無菌每批(5)硬度試驗(yàn)固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基劃線接種應(yīng)無碎裂穿刺接種后能區(qū)分有動(dòng)力或無每批監(jiān)控常規(guī)培養(yǎng)基及試劑的菌種培養(yǎng)基陽性或生長陰性或不生長監(jiān)測頻率第一套：A每月一次賴氨酸脫酶鳥氮酸脫竣酶精氨酸雙水解酶靛基質(zhì)v - p椽酸鹽西蒙氏苯丙氨酸脫氨酶葡萄糖O-F氧化發(fā)酵不活動(dòng)硝酸鹽復(fù)原緩慢愛德華菌產(chǎn)氣腸桿菌陰溝腸桿菌大腸埃希氏菌陰溝腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌雷氏變形桿菌銅綠假單胞菌大腸埃希氏菌洛非氏不動(dòng)桿菌銅綠假單胞菌弗氏構(gòu)椽酸菌弗氏構(gòu)橡酸國普通變形桿菌陰溝腸桿菌大腸埃希氏菌緩慢愛德華菌弗氏枸椽酸菌洛菲氏不動(dòng)桿菌大腸埃希氏菌每批氧化酶銅綠假

7、單胞菌ATCC27853ATCC25922化膿性鏈球菌觸酶金黃色葡萄球菌化膿性鏈球菌膽?一七葉酸糞鏈球菌緩慢愛德華菌丙二酸鹽產(chǎn)氣腸桿菌大腸埃希氏菌尿素雷極氏變形桿菌快動(dòng)力肺炎克雷伯氏菌慢大腸埃希氏菌肺炎克雷伯氏菌第二套:B每批一次巧克力球脂HN流感血桿菌每批羊血瓊脂平板化膿性鏈球菌小菌落肺炎鏈球菌中等菌麥康凱落大腸埃希氏菌粉紅雙糖鐵培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂菌落奇異變形桿菌無色菌落金黃色葡萄球菌5.試劑、染色液的質(zhì)量限制試劑的質(zhì)量限制試齊陽性限制菌種陰性限制菌監(jiān)測頻率氧化酶銅綠假單胞菌ATCC 2 7 8 5 3金黃葡萄球國大腸埃希氏面ATCC 2 5 9 2 2每次凝固酶表皮葡萄球菌每次桿菌肽紙片A群鏈

8、球菌B群鏈球菌每次Optochin 紙片肺炎鏈球菌草綠色鏈球菌每次染色液的質(zhì)量限制染色液陽性限制菌種陰性限制菌監(jiān)測頻率革蘭氏染色液金黃色葡萄球菌 ATCC2 5 9 23大腸埃希氏菌ATCC 2 5 9 2 2每天萋納抗酸染液TB陽性的痰液不作每次鞭毛染色液普通變形桿菌福氏志贅氏每次6、藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量限制瓊脂擴(kuò)散法為藥敏試驗(yàn)直接測定抑菌環(huán)直徑.參考菌株分別選擇金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希氏菌ATCC2592手口銅綠假單胞菌ATCC27853由于有很多因素均能影響藥敏試驗(yàn)擴(kuò)散法的結(jié)果,因此對以下每一可變因素均應(yīng)按要求加以限制：培養(yǎng)基的成分、PH及深度：成分為水解烙蛋白瓊脂：PH為+

9、;深度為4mm 一只9cm直徑的平板約需25ml培養(yǎng)基.抗生素紙片含量及有效期：庫存的抗生素紙片儲(chǔ)存在20度,小量使用抗生素紙片密封后存放于冰箱的冰格內(nèi).使用時(shí)取出,放置室溫平衡后再開啟.菌落濃度：挑取分純的菌落5-10個(gè)移種于適宜的液體培養(yǎng)基,35度 46h后,校正菌液濃度與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁芟嗤瑸橹?將菌液均勻的涂好,每只9cm平極至多貼7張紙片,測試平板最多兩 只疊在一起,不得過多,量取抑菌環(huán)用毫米尺.參考菌種的抑菌環(huán)質(zhì)量限制標(biāo)準(zhǔn)是：藥物對該菌株的排菌環(huán)直徑平 均值+2標(biāo)準(zhǔn)差：簡明的說：將這個(gè)指標(biāo)換算成抑菌環(huán)直徑質(zhì)量限制 允許范圍.實(shí)驗(yàn)室連續(xù) 30次監(jiān)測的結(jié)果允許最多 3次超過質(zhì)量控 制范圍

10、,并且這3次失控不應(yīng)該連續(xù)出現(xiàn).如超出圍,成查明誤差原 因并予以糾正.質(zhì)控菌株：大腸埃希氏菌 ATCC25922大腸埃希氏菌 ATCC35218用 于B內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合制劑；金黃色葡萄球菌ATCC25923同綠假 單胞菌ATCC2785鮮.質(zhì)控測定次數(shù)：每批新的M-H瓊脂和含藥紙片必須用質(zhì)控菌株進(jìn)行 檢測.每大與臨床標(biāo)本一起測定質(zhì)控菌株以監(jiān)控整個(gè)過程,NCCLS規(guī)定只有在符合以下條件時(shí)才可減少測定次數(shù)：與常規(guī)標(biāo)本一起連續(xù)測定質(zhì)控菌株 30日.每種藥物與相應(yīng)的每種細(xì)菌的 30個(gè)抑菌環(huán)直徑3個(gè)結(jié)果超 出規(guī)定范圍.到達(dá)以上要求以后,可執(zhí)行每周一次檢測.如發(fā)現(xiàn)有一個(gè)不符 合的結(jié)果,應(yīng)立即尋找原因,如果發(fā)現(xiàn)諸如質(zhì)控菌錯(cuò)誤、 含藥紙片種 類錯(cuò)誤或