視網(wǎng)膜色素變性不同證型紅細(xì)胞免疫功能及T淋巴細(xì)胞表面抗原表達(dá)的改變

1、視網(wǎng)膜色素變性不同證型紅細(xì)胞免疫功能及T淋巴細(xì)胞表面抗原表達(dá)的改變作者：易細(xì)香，李傳課，余楊桂 【關(guān)鍵詞】眼科 摘要：【目的】研究原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性(RP)的自身免疫發(fā)病機(jī)理及與中醫(yī)證型的關(guān)系。【方法】對52例不同中醫(yī)證型的原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性患者及22例健康人進(jìn)行紅細(xì)胞免疫功能的兩項(xiàng)指標(biāo)即紅細(xì)胞c3b受體花環(huán)結(jié)合率(RCR)、免疫復(fù)合物花環(huán)結(jié)合率(RICR)，及免疫復(fù)合物(CIC)、外周血T淋巴細(xì)胞表面人類白細(xì)胞DR抗原(HLADR)表達(dá)率的測定。【結(jié)果】RP患者RCR、RICR均降低，CIC值增高，HLADR表達(dá)增高，與正常組比較差異有顯著性(P005或P001)；RP患者的RCR與CI

2、C呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(P001)；而脾腎陽虛組與肝腎陰虛組比較，RCR、RICR下降更低、CIC值和HLADR表達(dá)更高，差異均有顯著性(P001)。【結(jié)論】RP患者紅細(xì)胞免疫功能原發(fā)性低下，CIC和HLADR抗原表達(dá)增高，提示了自身免疫性疾病RP因虛致瘀的發(fā)病過程。 關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜炎，色素性/免疫學(xué)；視網(wǎng)膜炎，色素性/中醫(yī)病機(jī)；肝腎陰虛；脾腎陽虛；紅細(xì)胞/免疫學(xué)；T淋巴細(xì)胞/免疫學(xué) 原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性(retinalpigmentation,RP)，屬中醫(yī)眼科的“高風(fēng)內(nèi)障”范疇，是一種以視網(wǎng)膜色素上皮和光感受器結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行性受損的遺傳性眼病。臨床上以夜盲、進(jìn)行性視野縮窄、中心視力逐漸減退，最

3、終導(dǎo)致失明為主要表現(xiàn)。RP在一般人群中的發(fā)病率約為1/40001/2000，在我國的群體患病率為1/3467。目前其發(fā)病機(jī)理尚不明了，可能涉及多方面的因素。近年來圍繞免疫功能與RP發(fā)病機(jī)理間的聯(lián)系，已從不同側(cè)面和層次進(jìn)行了較多的研究，研究表明RP患者存在細(xì)胞免疫和體液免疫功能的異常，不少學(xué)者認(rèn)為可能是自身免疫反應(yīng)所致。本研究從紅細(xì)胞免疫功能改變的角度來探討RP的發(fā)病機(jī)理，并初步探討其與中醫(yī)證型間的關(guān)系。 1資料與方法 11研究對象 為湖南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院視網(wǎng)膜色素變性中心19992001年的門診及住院患者，具有典型的RP臨床表現(xiàn)，經(jīng)詳細(xì)檢查排除合并感染、腫瘤、貧血及其他自身免疫性疾病等，確

4、診RP者共52例。其中男32例，女20例；年齡最大者65歲，最小為13歲，平均年齡(3767±287)歲；雙眼無色素沉著者2例，單眼色素變性者1例，結(jié)晶樣色變性者5例；視力下降、夜盲時(shí)間最長者37年，最短者4年，平均病程(1797±979)年。健康對照組為來自我院研究生、大專生和職工，排除全身性疾病及眼部疾病，共22例。其中男14例，女8例；年齡最大者62歲，最小者15歲，平均年齡為(3634±1176)歲。 12分組 52例RP患者中屬肝腎陰虛者41例，平均年齡為(4115±852)歲；屬脾腎陽虛者11例，平均年齡為(4360±962)歲。根

5、據(jù)病情分為病輕組和病重組，視力小于02、視野小于15°(顳側(cè))者為病重組共24例，視力大于02、視野大于15°(顳側(cè))者為病輕組共28例。 13診斷及辨證標(biāo)準(zhǔn) 131診斷標(biāo)準(zhǔn) 參考高等醫(yī)學(xué)院校第3版教材眼科學(xué)和宋振英主編的眼科診斷學(xué)1制定。 132辨證參考標(biāo)準(zhǔn) 參考中醫(yī)眼科學(xué)第5版教材2及中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)3，結(jié)合導(dǎo)師經(jīng)驗(yàn)制定。 肝腎陰虛型：眼局部癥狀：夜盲、進(jìn)行性視野縮窄，中心視力逐漸減退，兩眼干澀不適，具備兩項(xiàng)以上；全身癥狀：頭昏耳鳴，腰膝酸軟，五心煩熱，顴紅咽干，女子月經(jīng)量少色紅，男子遺精，舌紅少苔或無苔，脈細(xì)數(shù)，具備1項(xiàng)以上。 脾腎陽虛型：眼局部癥狀：與肝腎陰虛型

6、相同，但無兩眼干澀不適，具備任意兩項(xiàng)以上；全身癥狀：形寒肢冷，面色白，腰酸神疲，懶言食少，大便溏泄，五更泄瀉，小便清長，或夜尿頻多，女子白帶多且質(zhì)地清稀，男子陽萎早泄，舌淡胖有齒印或脈沉遲，具備1項(xiàng)以上。 14觀察指標(biāo)及方法 141紅細(xì)胞c3b受體花環(huán)結(jié)合率(RCR)及免疫復(fù)合物花環(huán)結(jié)合率(RICR)的測定 采用郭峰法4。主要試劑酵母多糖凍干試劑及補(bǔ)體致敏酵母多糖凍干試劑，均由第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院免疫室提供。025%戊二醛(含主要成份OHCCH2CH2CH2CHO23g/L)、甲醇、瑞氏染液等均由湖南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。 142血清中免疫復(fù)合物(CIC)含量測定 用PEG沉淀法

7、。主要試劑PEG-6000由天津天泰精細(xì)化工學(xué)品有限公司經(jīng)銷。 143外周血T淋巴細(xì)胞表面人類白細(xì)胞DR抗原(HLADR)的測定 采用外周靜脈血3mL以肝素抗凝，加Hanks液對倍稀釋，經(jīng)FicollHypaque密度梯度離心20min，取外周血單核細(xì)胞(PBMC)層經(jīng)Hanks液洗2遍，加PRMI-1640洗1遍，用RPMI-1640完全培養(yǎng)基(內(nèi)含10mol/LHgpesbuffer，青霉素100U/mL)調(diào)細(xì)胞濃度至5×106/mL于小試管，取100L于小試管內(nèi)加DR單克隆抗體，后置4溫度下1h洗2次，棄上清液懸浮至20L，取樣滴于載玻片上加蓋玻片，置熒光顯微鏡下觀察，計(jì)算20

8、0個(gè)細(xì)胞及其中熒光陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)百分率。 2結(jié)果 研究結(jié)果顯示，RP患者的RCR、RICR均降低，CIC和HLADR均增高，與正常組比較差異有顯著性意義(P001)；RP患者的RCR與CIC呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-03586，P001)，說明RP患者的紅細(xì)胞免疫功能原發(fā)性低下，免疫復(fù)合物卻增多。見表1。表1RP紅細(xì)胞免疫功能及HLADR抗原表達(dá)與正常人比較（略） 研究還顯示，其中脾腎陽虛組比肝腎陰虛組的RCR、RICR下降更低，CIC值與HLADR表達(dá)更高(組間比較均P001)，見表2。表2RP不同證型的紅細(xì)胞免疫功能及HLADR抗原表達(dá)的比較（略） 紅細(xì)胞免疫與HLADR抗原表達(dá)之間的相關(guān)分

9、析結(jié)果表明，RP患者RCR與HLADR之間無顯著性相關(guān)關(guān)系(r=-0233，P005)，說明紅細(xì)胞免疫與HLA-DR抗原表達(dá)雖與自身免疫均密切相關(guān)，但兩者之間可能不相關(guān)。 3討論 31從紅細(xì)胞免疫功能改變探討RP的發(fā)病機(jī)理 研究證明紅細(xì)胞參與機(jī)體反應(yīng)與免疫調(diào)控，具有識(shí)別、粘附、殺傷抗原和傳遞抗原信息，促吞噬細(xì)胞吞噬功能，增強(qiáng)T細(xì)胞依賴性反應(yīng)，清除免疫復(fù)合物的能力，并參與機(jī)體的免疫調(diào)控，有完整的自我調(diào)控作用5。Siegel9等認(rèn)為紅細(xì)胞最重要和最主要的免疫功能是免疫粘附功能，通過其膜表面的型補(bǔ)體受體(CR1)功能粘附CIC，即體內(nèi)CIC主要由紅細(xì)胞清除。CIC的形成是機(jī)體正常免疫的一部分，有利于

10、破壞和清除對機(jī)體有害的抗原，但CIC過多沉積于局部組織，又會(huì)激活補(bǔ)體系統(tǒng)，釋放出血管活性物質(zhì)，引起免疫性損害。在自身免疫性疾病中由于自身抗原持續(xù)刺激機(jī)體產(chǎn)生自身抗體，待抗體的產(chǎn)生達(dá)到一定水平時(shí)，便出現(xiàn)CIC，而CIC主要由紅細(xì)胞清除。因此，紅細(xì)胞免疫與自身免疫性疾病的發(fā)生及病理過程密切相關(guān)。 Rahi10曾用免疫熒光法在RP患者血清中檢出抗視網(wǎng)膜抗體，同時(shí)發(fā)現(xiàn)血清抗體水平的高低與RP的視網(wǎng)膜病變呈相關(guān)關(guān)系。RP患者視網(wǎng)膜組織中光感受器特別是桿體細(xì)胞外段選擇性地破壞的組織病理學(xué)也說明了主要存在于視網(wǎng)膜視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞外段的視網(wǎng)膜可溶性抗原(S-Ag)致病的可能性。因此，RP可能是一種自身免疫性

11、疾病，但目前尚缺乏公認(rèn)的科學(xué)證據(jù)。 本研究結(jié)果顯示：RP患者與正常對照組比較RCR、RICR均降低，證明RP患者紅細(xì)胞免疫功能原發(fā)性低下，而且CIC增高，從而為RP的自身免疫發(fā)病機(jī)理提供了新的依據(jù)。 32HLADR抗原與RP的發(fā)病機(jī)理 HLADR是人類MHCII類抗原，位于6號(hào)染色體短臂3P23區(qū)段，資料顯示：疾病易感性由MHC基因賦予6，50%以上遺傳因素均與類抗原連鎖基因相關(guān)。HLADR抗原主要存在于抗原提呈細(xì)胞表面，靜息的T細(xì)胞膜上不存在，具有控制免疫識(shí)別和應(yīng)答反應(yīng)始動(dòng)環(huán)節(jié)等重要的生物學(xué)功效。HLADR抗原在免疫應(yīng)答中的主要作用與抗原的提呈、引起T細(xì)胞活化有關(guān)7，是T細(xì)胞活化的必需信號(hào)，

12、抗原量的多少與免疫應(yīng)答程度有關(guān)，這揭示了HLADR抗原異常表達(dá)在自身免疫過程的重要性。HLADR抗原有異常表達(dá)在GravesSjogrens綜合征等自身免疫性疾病中普遍存在，其作用可能與自身抗原觸發(fā)自身免疫有關(guān)11。 本研究結(jié)果顯示RP患者外周血T淋巴細(xì)胞表面HLADR抗原異常表達(dá)，提示：HLADR抗原與RP發(fā)病相關(guān)聯(lián)，它可能參與了RP的免疫應(yīng)答、免疫調(diào)節(jié)過程；DR抗原可能作為一種自身抗原，為RP自身免疫反應(yīng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)；HLA決定的免疫反應(yīng)基因或疾病的易感基因與RP的發(fā)生相關(guān)聯(lián)。 33紅細(xì)胞免疫功能與HLADR抗原表達(dá)的相關(guān)性 紅細(xì)胞免疫、HLADR抗原表達(dá)均與自身免疫反應(yīng)密切相關(guān)。本研究R

13、P患者紅細(xì)胞免疫功能原發(fā)性低下，其外周血T淋巴細(xì)胞表面HLADR抗原表達(dá)增高，研究顯示兩者之間無相關(guān)關(guān)系，說明RP患者紅細(xì)胞免疫功能低下不是HLADR抗原表達(dá)異常的直接原因。由于本研究病例不多，它們兩者之間究竟有無相關(guān)關(guān)系、是如何相互影響的，有待今后進(jìn)一步充實(shí)病例研究。 34RP中醫(yī)證型與紅細(xì)胞免疫功能改變的關(guān)系 審視瑤函有“夫目之有血，為養(yǎng)目之源，充和則發(fā)生長養(yǎng)之功，而少有虧滯，目病生焉”。RP類似中醫(yī)“高風(fēng)內(nèi)障”；傅仁宇認(rèn)為：“此癥俗呼雞盲蓋元陽不足之病”。根據(jù)RP的臨床病理特征，大多學(xué)者認(rèn)為是“以虛為本”，“虛”指先天不足，命門火衰；肝腎虧損，精血不足或脾胃虛弱，清氣不升導(dǎo)致目失濡養(yǎng)。本

14、實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明RP患者紅細(xì)胞免疫功能原發(fā)性低下，從新的角度證實(shí)RP“虛”的病理本質(zhì)；脾腎陽虛組和肝腎陰虛組RP患者與正常對照組比較均有RCR、RICR降低，CIC、DR增高；而脾腎陽虛組與肝腎陰虛組比較，RCR、RICR下降更低，提示RP的紅細(xì)胞免疫功能改變與中醫(yī)證型有關(guān)；CIC增多、HLADR表達(dá)更高，似乎提示RP“因虛致瘀”的發(fā)病過程。RP發(fā)病具有遺傳傾向，患者由于先天不足，肝腎先虛，致脾腎陽虛，命門火衰，使氣血失利，目絡(luò)瘀阻，最終表現(xiàn)為眼底血管普遍變細(xì)，甚則閉塞而發(fā)病，這一過程是一個(gè)以虛為本，因虛致瘀，最終發(fā)展為虛中夾瘀的緩慢病理過程，故在全身辨證的基礎(chǔ)上，借助微觀檢測手段，將有利于預(yù)防和

15、控制疾病的發(fā)展。該結(jié)論有待進(jìn)一步證實(shí)。 參考文獻(xiàn) 1宋振英眼科診斷學(xué)M北京：人民衛(wèi)生出版社，1985 2廖品正中醫(yī)眼科學(xué)M第5版上海：上海科技出版社，1986 3沈自尹中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)S中西醫(yī)結(jié)合雜志，1983，3(2)：117 4郭峰紅細(xì)胞免疫學(xué)及其調(diào)節(jié)功能測定方法J免疫學(xué)雜志，1990，6(1)：60 5孟東，陳櫻，靳建鳴，等2型糖尿病患者紅細(xì)胞CR1與T淋巴細(xì)胞亞群動(dòng)態(tài)觀察及相關(guān)性分析J天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，8(1)：94 6肖露露，于立新，陳洪濤，等慢性腎小球腎炎與HLA免疫遺傳強(qiáng)關(guān)聯(lián)J中華泌尿外科雜志，1999，20(10)：592 7牛余宗MHCII類抗原的異常表達(dá)與自身免疫病J國外醫(yī)學(xué)・免疫學(xué)分冊，1989(3)：133 8HerdiaCDAkteredcellularimmunityandsuppressorcallactivjtyinpatientswithprimaryretinitispegmentosaJBrJOpht