孔彬-群體藥代動力學(xué)綜述-交

1、臨床藥物治療與患者的生理、病理等多種因素相關(guān)，治療方案常因為沒有考慮這些因素而存在諸多問題，使得藥物治療無法達到最佳效果。 盡管我們每年都能獲得大量各種藥物相關(guān)的臨床數(shù)據(jù)，但卻未能充分利用這些數(shù)據(jù)以發(fā)現(xiàn)其中的科學(xué)規(guī)律。因此用新的方法來深入發(fā)掘藥物臨床數(shù)據(jù)背后的客觀規(guī)律，形成知識體系，以提高對藥物總體特征的認識并優(yōu)化臨床藥物治療方案格外重要。群體藥代動力學(xué)( population pharmacokinetics ， PPK) 應(yīng)運而生，它是藥學(xué)與數(shù)學(xué)學(xué)科之間的邊緣科學(xué)，近年來獲得迅速發(fā)展 1目前， 群體藥代動力學(xué)已經(jīng)形成獨立的學(xué)科領(lǐng)域和完善的知識體系， 在新藥研發(fā)和優(yōu)化臨床藥物治療方案兩方面都

2、起著不可或缺的重要作用 2 。一、群體藥代動力學(xué)的概念和發(fā)展歷史(一)群體藥代動力學(xué)的產(chǎn)生群體藥代動力學(xué)是在藥物代謝動力學(xué)( pharmacokinetics) 的基礎(chǔ)上提出的 3 。藥代動力學(xué)是描述藥物通過各種途徑進入體內(nèi)的吸收、 分布、 代謝和排泄過程的量時變化或血藥濃度經(jīng)時變化規(guī)律的一門科學(xué)。為了解藥物的體內(nèi)性質(zhì)，制定給藥方案，明確藥物的安全性和有效性就必須進行藥代動力學(xué)的研究。它的基本方法已經(jīng)滲入到生物藥劑學(xué)、分析化學(xué)、臨床藥理學(xué)、藥物治療學(xué)等諸多學(xué)科領(lǐng)域中，推動著各個學(xué)科的發(fā)展 5 。但在不同患者群體中，藥物在體內(nèi)的動 態(tài)變化會產(chǎn)生很大差異。1 、經(jīng)典藥代動力學(xué)研究用個體全息法，著眼

3、于個體對象，試驗設(shè)計是為了得到藥物在個體中動態(tài)變化的詳細數(shù)據(jù) 6 ，用全程采血，即血樣數(shù)據(jù)涵蓋吸收、分布、代謝和排泄的全過程，通常 1114個血樣點。但從臨床治療實際和醫(yī)學(xué)倫理學(xué)考慮，密集采血相對困難，尤其是在重病患者、兒童及老年人群中，傳統(tǒng)頻繁取血、嚴格取樣時間的藥代動力學(xué)研究非常困難。另一方面，經(jīng)典藥代動力學(xué)研究以個體為單位，求每一個體的藥代動力學(xué)參數(shù)的平均值和標(biāo)準偏差，若個體差異較大的情況下，個體的藥代動力學(xué)參數(shù)對整體結(jié)果影響較大，使最終結(jié)果產(chǎn)生很大偏倚 7 。研究樣本量較小，單個樣本在總體樣本中所占的權(quán)重較大，個體的偏差對結(jié)果造成的影響不能輕易消除。因此， 為了描述各個受試者參數(shù)的離散

4、程度與分布情況，確定能夠代表特定群體的藥代動力學(xué)特征，以及研究相關(guān)因素對藥代動力學(xué)的影響，就必須提出新的方法來進行藥代動力學(xué)研究 8 。2) 群體藥代動力學(xué)的定義群體藥代動力學(xué)廣義通常指定量藥理學(xué)( phar-macometrics ，PM) ，是用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計學(xué)方法探討、描述和預(yù)測藥物在特定群體的藥代動力學(xué)、藥效學(xué)以及生物標(biāo)識物 效應(yīng)關(guān)系的行為特征的一門科 學(xué) 9 。 群 體 藥 代 動 力 學(xué) 是 基 于 模 型 ( modeling) 和 仿 真( simula-tion) 研究藥物與機體作用的全新方法，將藥代動力學(xué)/藥效學(xué)模型與統(tǒng)計學(xué)模型相結(jié)合，研究確定劑量方案下藥物在特定群體中的藥代動

5、力學(xué)/藥效學(xué)的特征以及變異性的大小，定量的研究特定群體中藥物濃度/效應(yīng)的影響因素 10 。這里的 “群體” 的概念是指根據(jù)研究目的所確定的研究對象總體。針對某一特定群體來探討和預(yù)測藥物在該群體中的體內(nèi)處置特征。影響藥物體內(nèi)藥代動力學(xué)、藥效學(xué)的因素，例如年齡、體重、基因型、性別、疾病狀態(tài)、藥物-藥物相互作用等，由于研究對象的健康狀況、生理特征、營養(yǎng)狀況、遺傳等方面都存在差異，不同研究對象對于同一藥物的體內(nèi)處置過程可能存在較大的差異 11 。因此在群體藥代動力學(xué)研究中引入了“協(xié)變量( covariate) ”，協(xié)變量的集合可以看作是不同的“亞群體”，例如性別對藥物的藥代動力學(xué)行為產(chǎn)生影響，則男性和

6、女性就分別作為該群體中的亞群體。多個協(xié)變量疊加的 “亞群體” ，實際上就接近個體，即個體是多個特定協(xié)變量疊加的“亞群體” 。例 如 一 個 體 重 60 kg ，年 齡 40 歲 的 CYP2C19 慢代謝的男性個體就是體重、年齡、 基因型和性別4 個協(xié)變量疊加的 “亞群體” 。協(xié)變量越多、越具體，就越接近真實的個體，因此，群體藥代動力學(xué)可以用于優(yōu)化個體化給藥方案 12 。個體化給藥方案是充分了解個體的這些協(xié)變量對藥代動力學(xué)/藥效學(xué)的影響，根據(jù)群體藥代動力學(xué)特征以優(yōu)化藥物治療方案，達到最佳藥效和減少不良反應(yīng)的目的 13 。3) 3) 群體藥代動力學(xué)的發(fā)展歷史1977 年美國 Sheiner 教

7、授首次提出用群體模型估算臨床試驗數(shù)據(jù)中的群體參數(shù)。隨著群體藥代動力學(xué)的發(fā)展，相繼提出稀疏數(shù)據(jù)模型和估算藥代動力學(xué)參數(shù)的變異。最初的群體藥代動力學(xué)模型首先大量用于治療藥物監(jiān)測( TDM) 的臨床數(shù)據(jù)，用稀疏數(shù)據(jù)得到藥代動力學(xué)的典型參數(shù)和變異值。上個世紀8090年代，該方法逐步將TDM 數(shù)據(jù)模型與Bayesian 回歸方法結(jié)合，估算個體藥代動力學(xué)參數(shù)以及優(yōu)化個體給藥方案。1982 年 在 Journal of Pharmacokinetics and Biop-harmaceutics 雜志，首次提出群體藥代動力學(xué)( 定量藥理學(xué))定義， 即 “應(yīng)用模型進行分析復(fù)雜藥代動力學(xué)和生物藥劑學(xué)特征的科學(xué)。

8、 此后， 群體藥代動力學(xué)在藥物研發(fā)和藥物治療中的作用逐漸被認識， 越來越廣泛的得到認可和接受。模型仿真的應(yīng)用是另一個促進群體藥代動力學(xué)發(fā)展的因素。模型仿真早在1971 年 Maxwell 等提出，但直到1998 年 Hale 等才真正將模型仿真技術(shù)用于臨床試驗?zāi)Ｐ蛿?shù)據(jù)的檢驗。這一應(yīng)用極大地推動了群體藥代動力學(xué)的發(fā)展。同年， 美國食品和藥品監(jiān)督管理局( FDA) 表現(xiàn)出對此技術(shù)的極大興趣，認為模型仿真是進行臨床試驗設(shè)計的非常有用的工具，并將其用于評價不同試驗設(shè)計的優(yōu)劣。自此模型仿真被廣泛用于各期臨床試驗，進一步促進群體藥代動力學(xué)的發(fā)展。群體藥代動力學(xué)的快速發(fā)展使FDA 和歐洲藥品監(jiān)督管理局( E

9、MEA) 相繼出臺指南將該方法用于藥物研發(fā)。1998 年 FDA 藥品評價中心的兒童藥代動力學(xué)研究指南中提出除了進行傳統(tǒng)的藥代動力學(xué)研究外，還應(yīng)進行群體藥代動力學(xué)研究。 1999 年， 該機構(gòu)提出的肝功能不全患者藥代動力學(xué)研究指南中也提到相關(guān)問題。同年，F(xiàn)DA 頒布了藥物研發(fā)中群體藥代動力學(xué)研究指南，明確提出新藥研發(fā)中如何進行群體藥代動力學(xué)研究以及報告的具體內(nèi)容。2000 年，人用藥品注冊技術(shù)規(guī)定國際協(xié)調(diào)會議（ ICH） 推薦在兒童患者藥物臨床研究中應(yīng)進行群體藥代動力學(xué)研究 14 。目前在美國和歐洲，群體藥代動力學(xué)研究已經(jīng)成為藥物研發(fā)必不可少的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。同時該方法也廣泛應(yīng)用于臨床藥物治療的各個

10、方面，發(fā)揮著非常重要的作用。Sheiner 等將經(jīng)典的藥代動力學(xué)模型與群體統(tǒng)計學(xué)模型結(jié)合起來提供了群體統(tǒng)計學(xué)模型（Population Statistical Model ）結(jié)合起來， 提供群體藥代動力學(xué)理論，主要研究人體藥代動力學(xué)參數(shù)的群體值，再結(jié)合病人的個體信息反饋，得到病人個體化藥代動力學(xué)參數(shù)，以優(yōu)化給藥方案，指導(dǎo)臨床個體化用藥，（二 ）群體藥代動力學(xué)的研究內(nèi)容1 群體參數(shù)：明確和預(yù)測藥物在特定群體的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)行為典型特征研究目標(biāo)群體中藥物的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)的總體特征，通常用典型患者來表示，稱為群體參數(shù)（ popu-lation parameter）或者群體典型值（ popul

11、ation typical value） ， 群體典型值表征目標(biāo)群體的整體特征，用于表述整個群體的平均狀態(tài)或者群體典型患者的特征 15 。2 .定量相關(guān)因素（ 協(xié)變量 ）： 協(xié)變量是指對藥代動力學(xué)和藥效學(xué)產(chǎn)生影響的因素，包括生理因素（ 例如年齡、性別、種族、基因型、體重、體表面積、胖瘦等） ，病理因素（ 例如疾病狀態(tài)、并發(fā)癥、肝腎功能狀況等 ） ，藥物 藥物相互作用和藥物 食物相互作用，以及其他因素 （ 晝夜節(jié)律等） 。協(xié)變量可以指證個體與群體的差別，個體是多個 “亞群體”疊加的結(jié)果，而不同 “亞群體”是不同協(xié)變量的集合。因此， 定量研究協(xié)變量以將研究從群體水平深入到個體水平，預(yù)測個體的藥代動

12、力學(xué)和藥效學(xué)行為特征。 3估算藥代動力學(xué)和藥效學(xué)參數(shù)的隨機變異群體藥代動力學(xué)中的隨機變異包括個體間變異 (inter-individual variability ， IIV 或 者 between-subject variability ， BSV) 、 周期間變異( inter-occasion variability ， IOV 或者 between-occasion variability ， BOV) 和 個 體 內(nèi) 變 異 (intra-individual variability) 或 稱 殘 差 變 異 ( residual variability) ，與隨機因素相關(guān)。這類因素

13、確定存在，但卻未知和無 法測量 16 。個體間變異是指不同個體間的差異，協(xié)變量是導(dǎo)致個體 間變異的主要來源。周期間變異是指同一個體在不同試驗周期中的差異， 與試驗設(shè)計相關(guān)。個體內(nèi)變異或者殘差變異是指同一個體在不同時間或者重復(fù)試驗時依然存在的差異，與測定誤差、模型偏倚或者劑量誤差等相關(guān)。在群體藥代動力學(xué)中，所有變異都用百分數(shù)( %) 表示。 4 發(fā)掘隱藏在臨床數(shù)據(jù)中的科學(xué)規(guī)律 藥物研發(fā)和臨床應(yīng)用過程中會產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)，傳統(tǒng)藥代動力學(xué) 方法從中獲得的知識有限?；诖罅颗R床數(shù)據(jù)的群體藥代動力學(xué)、藥效學(xué)模型，統(tǒng)計學(xué)模型，圖形等方法的應(yīng)用，可以充分發(fā)掘隱藏在臨 床數(shù)據(jù)中的科學(xué)規(guī)律，為藥物研發(fā)和藥物治療的

14、決策提供理論依據(jù)。 (三)群體藥代動力學(xué)的優(yōu)勢1 . 與傳統(tǒng)藥代動力學(xué)相比，群體藥代動力學(xué)的應(yīng)用更加廣泛，其數(shù)據(jù)類型可以是富集數(shù)據(jù)，也可以是稀疏數(shù)據(jù)，適用于治療藥物監(jiān)測數(shù)據(jù)，以及臨床難以采樣的特殊患者，包括兒童、孕婦、腫瘤患者等。稀疏數(shù)據(jù)同樣可以作為有效信息納入到藥物研究中，提供藥物的相關(guān)信息。 另一方面，群體藥代動力學(xué)可以進行多個臨床試驗數(shù)據(jù)的集合研究， 將樣本量有限的多個不同試驗設(shè)計的臨床數(shù)據(jù)進行集合分析，獲得更為豐富的信息與知識。此外，群體藥代動力學(xué)可以對不同試驗方案設(shè)計進行模型仿真，模擬臨床試驗; 可以明確藥代動力學(xué)/藥效學(xué)變異性，優(yōu)化給藥方案;通過群體模型進行試驗方案的設(shè)計和劑量選擇

15、; 研究藥物 -藥物 /食物相互作用，分析藥物相互作用的機理; 可以進行種屬間外推; 可以明確不同種屬間的差異大小; 充分發(fā)掘藥物研發(fā)中各期臨床試驗的藥代動力學(xué) /藥效學(xué)科學(xué)規(guī)律 12 。2 .清除率概念在藥代動力學(xué)中的應(yīng)用藥物從人體內(nèi)清除是多途徑的。通常是以腎清除和肝清除為主。當(dāng)一個藥物經(jīng)主要的代謝途徑消除時，病人間消除的個體差異是普遍存在的。 藥物主要以腎排泄消除時，則肌醉清除率以及血清肌醉濃度可用于評價病人的腎功能，并可以用來估算藥物的清除率(C1)和半衰其 ( t1/2 ) ，因為腎清除直接與肌醉清除率(Clcr) 成正比 :K=a Clcr+knr(1)用 K 對 Clcr 作圖可以

16、得到一條直線。血清肌醉濃度Cc 與肌醉清除率又有以下關(guān)系:(2)Cc=PR/Clcr根據(jù)(1) (2)式可獲得 K=a PR / Cc +knr(3)由于 K=0.693/t 1/2 ,可以獲得t1/2 與肌酐濃度的雙倒數(shù)關(guān)系式【】 ，K=a PR /0.693Cc +knr/0.693式中 PR 為內(nèi)源性肌酐生成速度，knr 為腎消除速率常數(shù)，a 為系數(shù)。病人的血清肌酐濃度與年齡，性別，體重等個體信息有關(guān)系，Jone,和Perrier導(dǎo)出它們間的關(guān)系式Clcr=bw (144 一 Y)/ 71G(5)式中 bw 為體重 (kg). y 為年齡(歲 )，對于女性則上式右邊乘以0.85 為其肌醉

17、清除率Clcr。 因此一旦直接測出血清肌醉濃度，估算出肌醉清除率。就可以得到藥物的消除速率常數(shù)(K)或C1。確定K和Cl 參數(shù)后，就可以計算維持劑量和負荷劑量，為實現(xiàn)給藥方案個體化提供依據(jù)。3 主要的估算群體藥代動力學(xué)參數(shù)的方法3.1 NPD 法 (單純聚集法)一組受試者服用某藥后，分別在相同時間點采血樣，測定血藥濃度，取其平均值，然后再用藥代模型進行c-t 曲線擬合，求算出各項藥代動力參數(shù)。本法不足之處:(1)不能反映個體間變異 (2)參數(shù)估算值比較粗略。3.2 TS 法 (二步法)對一組受試者的各個c-t 數(shù)據(jù)進行。c-t 曲線擬合，求算出各項藥代動力學(xué)參數(shù)，再求算其平均值和標(biāo)準差。本法優(yōu)

18、于NPD 法 :(1)參數(shù)反映出個體間變異;(2)個體間變異不僅來源于生物學(xué)，也來原于方法學(xué)的誤差;(3)由于前二個原因，其個體間變異往注NONMEM 法高。3.3 NONMEM 法 (一步法 ) 為采用線性混合效應(yīng)模型(nonlinearmixed effect model)的一步法.本法既優(yōu)于NPD法又優(yōu)于TS法，(1)病例數(shù)多，代表性強，采血點少(2-3 點 )，臨床易于接受，(3)不同年齡，病理分組區(qū)別，所得參數(shù)更能反映生理病理因素的影響，對臨床給藥方案個體化有幫助。該方法主要包括以下幾個步驟：確定藥代動力學(xué)模型根據(jù)某藥已知的一確定統(tǒng)計模型-預(yù)測藥代動 力學(xué)參數(shù)一用兩點實測血藥濃度計算

19、實際藥代動力學(xué)參數(shù)。4 群體藥代動力學(xué)的應(yīng)用曾衍霖曾在國臨床藥理雜志上介紹了群體藥代動力學(xué)及其參數(shù)三種估算方法。以后陳剛，夏東亞和李珍等發(fā)表了一些研究結(jié)果，與傳統(tǒng)方法比較，有更好的參數(shù)估算能力，而且能處理臨床藥物監(jiān)測中收集的非均勻的零散血藥濃度數(shù)據(jù)，便于開展臨床藥學(xué)研究，其研究可歸納以下方面:(1)群體藥代動力學(xué)參數(shù)結(jié)合個體血藥濃度的反饋,得到病入個體藥代動力學(xué)參數(shù)，以優(yōu)化給藥方案，指導(dǎo)個體化用藥.如應(yīng)用C1,Vd,K 等參數(shù)， 估算維持劑量(Do) 和負荷量 (Do), 在連續(xù)給藥方案中利用C1, Vd, K 等參數(shù)，確定或預(yù)測隱態(tài)濃度，確定給藥時間間隔。(3)國外已有商品軟件如NONMEM

20、 程序可應(yīng)用，如無軟件，自行計算也很簡便(4)從文獻來看國外在群體藥代動力學(xué)參數(shù)估算方面有一定的成功經(jīng)驗，如地高辛，慶大霉素，卡那霉素和5一 Fu 等。國內(nèi)也有成功的經(jīng)驗，如茶堿，丁胺卡那霉素及其他氨基糖類抗生素5、群體藥代動力學(xué)研究主要對象遺傳因素對藥物代謝動力學(xué)影響的研究是以闡明藥物代謝的個體差異及種族差異的規(guī)律為目的的，以利臨床實施個體化藥物抬療及不同種族患者臨床用藥方案的調(diào)整。藥代動力學(xué)與藥效動力學(xué)的相關(guān)性研究該項研究除探索相關(guān)性的規(guī)律、治療血藥濃度范圍、中毒濃度外，還應(yīng)確定是否納入臨床治療藥物監(jiān)測的范疇，從而進一步提供安全、有效用藥依據(jù)。6、群體藥代動力學(xué)研究對象以及分析方法的建立和

21、驗證臨床藥物動力學(xué)研究的生物樣品一般為全血、血清、血漿或尿液，具有取樣量少、藥物濃度低、內(nèi)源性物質(zhì)干擾大(如激素、維生素、膽汁以及可能同服的其他藥物)、個體的差異大等原因，因此必須根據(jù)待測物的結(jié)構(gòu)、生物樣品來源和預(yù)期的濃度范圍，建立靈敏、專一、精確的生物分析方法，并經(jīng)驗證后才能用于臨床試驗群體模型。4.1 生物樣品分析方法目前常用的幾種分析方法有:(1)色譜法:氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法(LC 一 MS、LC一 MS MS , Gc Ms , Gc Ms MS)等，可用于大多數(shù)藥物的檢測;(2)免疫學(xué)方法:放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等，多

22、用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測;(3)生物側(cè)定和微生物學(xué)方法。分析一般首選色譜法，如HpLC、 Gc法或 Lc 一 MS、 Gc 一 Ms 法，這類方法靈敏度、特異性、準確性一般都能適應(yīng)臨床藥代研究的需要，多數(shù)實驗室也具備條件，因此應(yīng)用最廣。般應(yīng)進行以下兒方面的考4.2 方法學(xué)驗證為了保證分析方法可靠，一般應(yīng)進行以下兒方面的考察:(l)特異性;特異性是指在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準確、 專一地測定分析物的能力。必須證明所測定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或特定活性代謝物、內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)代謝物、降解產(chǎn)物無千擾。如生物樣本分析法為色譜法，應(yīng)至少提供空白生物樣品、空白生物樣品加入標(biāo)準品及服藥后

23、生物樣品的色譜圖，以反映分析方法的特異性。(2)標(biāo)準曲線和線性范圍:標(biāo)準曲線反映了所測定物質(zhì)濃度與儀器響應(yīng)值之間的關(guān)系，一般用回歸分析方法(如用加權(quán)最小二乘法)所得的回歸方程來評價。應(yīng)提供標(biāo)準曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)，說明其線性相關(guān)程度。標(biāo)準曲線高低濃度范圍為線性范圍，在線性范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應(yīng)達到試驗要求的精密度和準確度。(3)標(biāo)準樣品:在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標(biāo)準曲線，計算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。不同生物樣品應(yīng)配制標(biāo)準樣品制備各自的標(biāo)準曲線，用于建立標(biāo)準曲線的標(biāo)準濃度個數(shù)取決于分析物可能的濃度范圍和分析物/響應(yīng)值關(guān)系的性質(zhì)。應(yīng)使用與待測樣品相同生物介質(zhì)，一般

24、用6 一 8 個濃度建立標(biāo)準曲線，對于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點。線性范圍要能覆蓋全部待側(cè)的生物樣品濃度范圍，不得用線性范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標(biāo)準曲線時應(yīng)隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點，僅用于評價干擾。(4)精密度與準確度:精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對標(biāo)準差(RSD)來考察方法的精確度。一般RSD應(yīng)小于巧,在定量下限(LowerLi 而 t 可 quantitation ， LLOQ) 附近 RSD 應(yīng)小于20% 。準確度是指在確定的分析條件下，測得的生物樣品濃度與真實濃度的接近程度(即質(zhì)控

25、樣品的實測濃度與真實濃度的偏差)，重復(fù)測定己知濃度分析物樣品可獲得準確度。一般應(yīng)在85%-110% 范圍內(nèi)(一般偏差應(yīng)少于10%) ，在 LLOQ 附近應(yīng)在80%120% 范圍內(nèi)。一般要求選擇 3 個濃度的質(zhì)控樣品同時進行方法的精密度和準確度考察。低濃度選擇在定量下限(LLoQ) 附近， 其濃度在LoQ 的 3 倍以內(nèi);高濃度接近于標(biāo)準曲線的上限。每一濃度至少測定5 個樣品。(4) 定量下限(LowerLtofquantitation ， LLoQ): 定量下限是標(biāo)準曲線上的最低濃度點，表示淵定樣品中符合準確度和精密度要求的最低藥物濃度。LLOQ應(yīng)能滿足側(cè)定35個消除半衰期時樣品中的藥物濃度或

26、能檢測出Cmax的1/101/120時的藥物濃度。其準確度應(yīng)在真實濃度的80%-120% 范圍內(nèi)，RSD 應(yīng)小于 20% 。(5)樣品穩(wěn)定性:含藥生物樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時間進行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時間。以及考察儲備液的穩(wěn)定性和樣品處理后的穩(wěn)定性。(6)提取回收率:從生物樣本樣品中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標(biāo)準品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的提取回收率。也可以說是將供試生物樣品中分析物提取出來供分析的比例。實驗應(yīng)該考察高、中、低3個濃度的提取回收率，應(yīng)當(dāng)獲得一致、精密和可重現(xiàn)的回收率。(7)方法學(xué)質(zhì)控:在測定生物樣品中的藥物濃度時應(yīng)進行質(zhì)量控制。一般做法是在

27、每批樣品測定時應(yīng)同時制備空白、低、 中、 高 4 份質(zhì)控(標(biāo)準濃度)樣品或隨行制備標(biāo)準曲線的方法進行方法學(xué)質(zhì)控研究。質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于監(jiān)測生物分析方法的效能和評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成之后開始測試未知樣品。推薦由獨立的人員配制不同濃度的標(biāo)準樣品對分析方法進行考核。 每個分析批生物樣品測定時應(yīng)建立新的標(biāo)準曲線，并隨行測定高、中、低三個濃度的質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于20% 。每個濃度至少雙樣本。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于 20% ，低濃度點偏差一般應(yīng)小于20% ，最多允許不在同一濃度的質(zhì)控樣品結(jié)果超限。(8)徽生物學(xué)和免疫學(xué)分析:上述原則基本適用于生物學(xué)和微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到其特殊性。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準曲線本質(zhì)上是非線性的。結(jié)果的準確度是關(guān)鍵的