精編2019年食品飲料企業(yè)大腸菌群檢測方法

1、1.0目的檢測食品飲料中的大腸菌群，以監(jiān)測飲料的微生物狀況。2.0范圍適用于咖啡飲料，茶飲料等產(chǎn)品的大腸菌群的測定。3.0職責微生物品控員負責本文件的執(zhí)行；QA檢驗工程師負責監(jiān)督本文件的有效執(zhí)行。4.0定義無5.0程序5.1培養(yǎng)介質的準備所有培養(yǎng)劑必須根據(jù)制造商的說明進行制備和滅菌。它們對熱很敏感，所以不能過熱。 培養(yǎng)劑應裝入200- 300ml的瓶內進行滅菌。容器中至少保留15%的空間。5.2培養(yǎng)皿準備5.2.1按測試內容及測試樣品數(shù)量準備好平板和乳糖膽鹽發(fā)酵管，另外每個測試項目加 一個發(fā)酵管作對照試驗，放入滅菌釜滅菌。5.2.2將滅菌好的發(fā)酵管和平板置于干燥箱中高溫烘干。冷卻待用。 5.3

2、操作步驟5.3.1檢樣稀釋及培養(yǎng)5.3.1.1 以無菌操作，將檢樣25g或25ml放于含有225ml無菌水的玻璃瓶內（瓶內預 置適當數(shù)量的玻璃珠），經(jīng)充分振搖作成1:10的均勻稀釋液。5.3.1.2 用1ml滅菌吸管吸到1:10稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml無菌水的試 管內（注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液），振搖試管混合均勻，作成1:100的 稀釋液。5.3.1.3 另取1ml滅菌吸管，按上項操作順序，作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。5.3.1.4 由于本方法所適用的樣品均要求無菌，因此只選擇原液、1:10和1:100兩個稀釋度，分別作10倍遞增稀釋的

3、同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌發(fā)酵管內（已按待測樣品的類別和批號分別作好記號）內，每個稀釋度作 三個發(fā)酵管。5.3.2乳糖發(fā)酵試驗 將檢驗樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內，每一稀釋度接種三管，置36+/-1 oC溫箱內，培養(yǎng)24+/-2小時，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告大腸菌群陰 性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進行。5.3.3分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36+/-1 oC溫箱內，培養(yǎng)48+/-2h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并作革蘭氏染色和證實試驗。5.3.4證實試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落 12個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā) 酵管，置3

4、6+/-1 C溫箱內培養(yǎng)24+/-2h,觀察產(chǎn)氣情況，凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染 色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。5.3.5報告根據(jù)證實為大腸桿菌陽性的管數(shù)，在“ GB4789.3食品衛(wèi)生微生物學檢驗大腸菌群的測定”中查MPN僉索表，報告每100ml大腸菌群的最可能數(shù)，并將結果記錄 在“微生物檢驗記錄” FM-QA-520。生效日期：2003/04/10編 寫：版本：B審核：修訂次數(shù)：00 批 準：共2頁，第1頁6.0參考文獻6.1本文件支持綱要文件：R-QA-006 微生物監(jiān)控綱要大腸菌群測定。6.2本文件參考：GB 4789.3 食品衛(wèi)生微生物學檢驗 7.0附件/記錄7.1附件：無7.2記錄：微生物檢驗記錄FM-QA-520生