酵母細(xì)胞的固定化(公開課)（課堂PPT）

1、2在食品、化工、輕紡、醫(yī)藥等領(lǐng)域大在食品、化工、輕紡、醫(yī)藥等領(lǐng)域大規(guī)模使用酶制劑，說明酶制劑使用有規(guī)模使用酶制劑，說明酶制劑使用有很多優(yōu)點(diǎn)，你能舉出一些嗎？很多優(yōu)點(diǎn)，你能舉出一些嗎？催化效率高、低能耗、低污染等。催化效率高、低能耗、低污染等。生產(chǎn)中直接使用酶存在哪些問題？你生產(chǎn)中直接使用酶存在哪些問題？你知道嗎？知道嗎？3酶制劑存在的缺陷：酶制劑存在的缺陷： 1 1、通常對(duì)、通常對(duì)等條件非常敏感，容易失活；等條件非常敏感，容易失活； 2 2、溶液中的酶很難回收，不能、溶液中的酶很難回收，不能被被 ，提高了生產(chǎn)成本；，提高了生產(chǎn)成本； 3 3、反應(yīng)后會(huì)混在產(chǎn)物中，可、反應(yīng)后會(huì)混在產(chǎn)物中，可能能

2、。強(qiáng)酸強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫和有機(jī)溶劑強(qiáng)堿、高溫和有機(jī)溶劑影響產(chǎn)品質(zhì)量影響產(chǎn)品質(zhì)量再次利用再次利用4 如果你是工程技術(shù)人如果你是工程技術(shù)人員，領(lǐng)導(dǎo)要你解決這個(gè)員，領(lǐng)導(dǎo)要你解決這個(gè)問題，你怎么辦？問題，你怎么辦？固定化酶技術(shù)固定化酶技術(shù)5 閱讀閱讀P49P49獨(dú)立思考獨(dú)立思考3 3分鐘后小組合作討論：分鐘后小組合作討論：1 1、解決酶應(yīng)用中存在問題的方法是？、解決酶應(yīng)用中存在問題的方法是？2 2、什么是高果糖漿？使用它有何好處？、什么是高果糖漿？使用它有何好處？3 3、生產(chǎn)高果糖漿需要什么酶？其作用是什么？、生產(chǎn)高果糖漿需要什么酶？其作用是什么？這種酶有何特點(diǎn)？這種酶有何特點(diǎn)？4 4、介紹一下反應(yīng)柱及

3、其優(yōu)點(diǎn)、介紹一下反應(yīng)柱及其優(yōu)點(diǎn)5 5、了解高果糖漿生產(chǎn)過程。、了解高果糖漿生產(chǎn)過程。6 6、這種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？、這種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？（一）、固定化酶的應(yīng)用實(shí)例（一）、固定化酶的應(yīng)用實(shí)例6（一）固定化酶的（一）固定化酶的應(yīng)用實(shí)例應(yīng)用實(shí)例總結(jié)：固定化酶技術(shù)的總結(jié)：固定化酶技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：使酶既能與反應(yīng)物接觸，使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離；又能與產(chǎn)物分離；固定在載體上的酶可以固定在載體上的酶可以被反復(fù)利用。被反復(fù)利用。7 在生產(chǎn)實(shí)際中使用固定化酶在生產(chǎn)實(shí)際中使用固定化酶技術(shù)有無不足技術(shù)有無不足? ?如有不足如有不足, ,怎么辦怎么辦? ?有。一種酶只能催化一種化學(xué)有。一種酶只能催化一種

4、化學(xué)反應(yīng)，而在生產(chǎn)實(shí)際中很多產(chǎn)反應(yīng)，而在生產(chǎn)實(shí)際中很多產(chǎn)物的形成都通過物的形成都通過一系列的酶促一系列的酶促反應(yīng)反應(yīng)才能進(jìn)行，所以操作比較才能進(jìn)行，所以操作比較麻煩。麻煩?？刹捎每刹捎霉潭ɑ?xì)胞技術(shù)固定化細(xì)胞技術(shù)。8概念：利用物理或化學(xué)方法將概念：利用物理或化學(xué)方法將酶酶或或細(xì)胞細(xì)胞固定在一定空間的技術(shù)。固定在一定空間的技術(shù)。包埋法包埋法化學(xué)化學(xué)結(jié)合法結(jié)合法物理吸附法物理吸附法（二）固定化酶技術(shù)和固定化細(xì)胞技術(shù)（二）固定化酶技術(shù)和固定化細(xì)胞技術(shù)固定化酶固定化酶或者或者固定化細(xì)固定化細(xì)胞胞分別適用哪分別適用哪些方法？原因？些方法？原因？適用于適用于固定化酶固定化酶適用于適用于固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞

5、包埋法是指將微生物的細(xì)胞均勻包埋在不溶于水的多孔性包埋法是指將微生物的細(xì)胞均勻包埋在不溶于水的多孔性載體中載體中化學(xué)結(jié)合法是指將酶分子或細(xì)胞相互結(jié)合或?qū)⑵浣Y(jié)合化學(xué)結(jié)合法是指將酶分子或細(xì)胞相互結(jié)合或?qū)⑵浣Y(jié)合到載體上到載體上物理吸附法是指將酶吸附到固體吸附劑的表面物理吸附法是指將酶吸附到固體吸附劑的表面9思考？思考？ 1 1從操作角度來考慮，你認(rèn)為固定化酶技術(shù)與從操作角度來考慮，你認(rèn)為固定化酶技術(shù)與固定化細(xì)胞技術(shù)哪一種方法更容易？固定化細(xì)胞技術(shù)哪一種方法更容易？哪一種方法對(duì)酶活性的影響更??？哪一種方法對(duì)酶活性的影響更??？2 2固定化細(xì)胞固定的是一種酶還是一系列酶？固定化細(xì)胞固定的是一種酶還是一系列

6、酶？3 3如果想將微生物的發(fā)酵過程變成連續(xù)的酶反如果想將微生物的發(fā)酵過程變成連續(xù)的酶反應(yīng)，應(yīng)該選擇哪種方法？應(yīng)，應(yīng)該選擇哪種方法？4 4如果反應(yīng)物是大分子物質(zhì)，又應(yīng)該選擇哪種如果反應(yīng)物是大分子物質(zhì)，又應(yīng)該選擇哪種方法？方法？固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞固定的是一系列酶固定化細(xì)胞固定的是一系列酶固定化細(xì)胞技術(shù)固定化細(xì)胞技術(shù)固定化酶技術(shù)固定化酶技術(shù)固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞10規(guī)律總結(jié)：規(guī)律總結(jié)： 固定化酶固定化酶酶的種類：一種酶的種類：一種所需條件：適宜的溫度，所需條件：適宜的溫度，PH值值固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞酶的種類：多種酶的種類：多種所需條件：適宜的溫度，所需條件：適宜的溫度，PH值，營養(yǎng)值，營

7、養(yǎng) 物質(zhì)物質(zhì)11練習(xí)：練習(xí)：1.1.使用固定化細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是使用固定化細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是( )( )。A.A.能催化大分子物質(zhì)的水解能催化大分子物質(zhì)的水解 B.B.可催化一系列化學(xué)反應(yīng)可催化一系列化學(xué)反應(yīng)C.C.與反應(yīng)物易接近與反應(yīng)物易接近 D.D.有利于酶在細(xì)胞外發(fā)揮作用有利于酶在細(xì)胞外發(fā)揮作用B122 2、研究認(rèn)為，用固定化酶技術(shù)處理污、研究認(rèn)為，用固定化酶技術(shù)處理污染物是很有前途的。如將從大腸桿菌染物是很有前途的。如將從大腸桿菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龍膜上制得到的磷酸三酯酶固定到尼龍膜上制成制劑，可以用來降解殘留在土壤中成制劑，可以用來降解殘留在土壤中的有機(jī)磷農(nóng)藥，與用微生物降解相比，的有機(jī)磷

8、農(nóng)藥，與用微生物降解相比，其作用不需要適宜的（其作用不需要適宜的（ ）A A、溫度、溫度 B B、PHPHC C、水分、水分 D D、營養(yǎng)、營養(yǎng)D133. 3. 關(guān)于固定化酶的敘述不正確的是關(guān)于固定化酶的敘述不正確的是 ( )( )。A A既能與反應(yīng)物接觸，又能與反應(yīng)既能與反應(yīng)物接觸，又能與反應(yīng) 物分離物分離 B B固定在載體上的酶可被反復(fù)利用固定在載體上的酶可被反復(fù)利用C C可催化一系列反應(yīng)可催化一系列反應(yīng) D D酶的活性和穩(wěn)定性受到限制酶的活性和穩(wěn)定性受到限制C14二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作酵母細(xì)胞的固定化酵母細(xì)胞的固定化用什么方法對(duì)酵母細(xì)胞的固定化？用什么方法對(duì)酵母細(xì)胞的固定化？ 包埋法常

9、用哪些載體？包埋法常用哪些載體？思考：思考：包埋法包埋法 明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素、聚丙烯酰胺等纖維素、聚丙烯酰胺等 15三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備固定化酵母細(xì)胞（一）制備固定化酵母細(xì)胞觀看視頻思考下列問題：觀看視頻思考下列問題：（1 1）制備過程包括哪幾個(gè)步驟？）制備過程包括哪幾個(gè)步驟？（2 2）你認(rèn)為哪個(gè)步驟的操作是最）你認(rèn)為哪個(gè)步驟的操作是最重要的一環(huán)？重要的一環(huán)？（3 3）各步驟應(yīng)當(dāng)分別注意什么問）各步驟應(yīng)當(dāng)分別注意什么問題？題？16二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作酵母細(xì)胞的固定化酵母細(xì)胞的固定化（1）酵母細(xì)胞的活化：）酵母細(xì)胞的活化：思考思考1活

10、化是指什么？活化是指什么？方法？方法？ 思考思考2在活化酵母的過在活化酵母的過程中要注意？程中要注意？1、酵母細(xì)胞活化時(shí)體積會(huì)變大，、酵母細(xì)胞活化時(shí)體積會(huì)變大，所用容器要大一些，防止活化液溢出；所用容器要大一些，防止活化液溢出；2、選用的干酵母有較強(qiáng)的活性且物種單一；、選用的干酵母有較強(qiáng)的活性且物種單一；17二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作酵母細(xì)胞的固定化酵母細(xì)胞的固定化（1）酵母細(xì)胞的活化：）酵母細(xì)胞的活化：（2）配制）配制CaCl2溶液：溶液：18二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作酵母細(xì)胞的固定化酵母細(xì)胞的固定化（1）酵母細(xì)胞的活化：）酵母細(xì)胞的活化：（2）配制）配制CaCl2溶液：溶液： （3）配制海藻酸

11、鈉溶液：）配制海藻酸鈉溶液： 是最重要的環(huán)節(jié)：是最重要的環(huán)節(jié)：如果海藻酸鈉濃度過如果海藻酸鈉濃度過高，將很難形成凝膠珠；高，將很難形成凝膠珠；如果濃度過低，形成如果濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞的數(shù)目少，影響實(shí)細(xì)胞的數(shù)目少，影響實(shí)驗(yàn)效果。驗(yàn)效果。 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：加熱時(shí)要用小火，加熱時(shí)要用小火，或者間斷加熱（目的？）或者間斷加熱（目的？）（濃度要適宜？）（濃度要適宜？）19二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作酵母細(xì)胞的固定化酵母細(xì)胞的固定化（1）酵母細(xì)胞的活化：）酵母細(xì)胞的活化：（2）配制）配制CaCl2溶液：溶液：（3）配制海藻酸鈉溶液：）配制海藻酸鈉溶液：（4）海藻酸鈉

12、溶液與海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞的混合：酵母細(xì)胞的混合：必須將溶化的海藻酸鈉必須將溶化的海藻酸鈉溶液溶液冷卻至室溫冷卻至室溫才能與才能與酵母細(xì)胞進(jìn)行混合。酵母細(xì)胞進(jìn)行混合。為什么？攪拌的目的？為什么？攪拌的目的？20二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作酵母細(xì)胞的固定化酵母細(xì)胞的固定化（1）酵母細(xì)胞的活化：）酵母細(xì)胞的活化：（2）配制）配制CaCl2溶液：溶液：（3）配制海藻酸鈉溶液：）配制海藻酸鈉溶液：（4）海藻酸鈉溶液與海藻酸鈉溶液與 酵母細(xì)胞的混合：酵母細(xì)胞的混合：（5）固定化酵母細(xì)胞：固定化酵母細(xì)胞：CaClCaCl2 2溶液的作用？所形成的溶液的作用？所形成的凝膠柱在凝膠柱在CaCl2溶液中浸泡的溶液

13、中浸泡的目的？目的？使膠體聚沉。形成穩(wěn)定使膠體聚沉。形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)如何判斷固定化酵母細(xì)胞是否成如何判斷固定化酵母細(xì)胞是否成功？功？-觀察凝膠珠的觀察凝膠珠的顏色顏色和和形狀形狀若凝膠珠若凝膠珠顏色過淺顏色過淺，說，說明海藻酸鈉的明海藻酸鈉的濃度偏低濃度偏低，固定的酵母細(xì)胞數(shù)目固定的酵母細(xì)胞數(shù)目較少較少凝膠珠不是圓形或橢圓凝膠珠不是圓形或橢圓形形，則說明海藻酸鈉的，則說明海藻酸鈉的濃濃度偏高度偏高，制作失敗，需要，制作失敗，需要再作嘗試再作嘗試2122 檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格，可以檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格，可以使用下列方法：使用下列方法： 一是用鑷子夾起一個(gè)凝膠珠放在實(shí)一是用鑷子夾起一個(gè)

14、凝膠珠放在實(shí)驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不容易破驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不容易破裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制作成功。作成功。 二是在實(shí)驗(yàn)桌上用力摔打凝膠珠，二是在實(shí)驗(yàn)桌上用力摔打凝膠珠，如果凝膠珠很容易彈起，也能表明制備如果凝膠珠很容易彈起，也能表明制備的凝膠珠是成功的。的凝膠珠是成功的。23三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作 用固定化酵母進(jìn)行發(fā)酵用固定化酵母進(jìn)行發(fā)酵思考發(fā)酵過程中錐形瓶為什么要密封？思考發(fā)酵過程中錐形瓶為什么要密封？思考錐形瓶中的氣泡和酒精是怎樣形成的？思考錐形瓶中的氣泡和酒精是怎樣形成的？思考在利用固定化酶或固定化細(xì)胞進(jìn)行工業(yè)生思考在利用固定化

15、酶或固定化細(xì)胞進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)的過程中，需要無菌操作嗎？產(chǎn)的過程中，需要無菌操作嗎？酵母菌的酒精發(fā)酵需要缺氧條件。酵母菌的酒精發(fā)酵需要缺氧條件。酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生的。酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生的。 需要。需要。24這一階段成功與否呢？怎這一階段成功與否呢？怎樣評(píng)價(jià)？樣評(píng)價(jià)？觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液；觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液；利用固定的酵母細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)生利用固定的酵母細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)生酒精，可以看到產(chǎn)生了很多氣酒精，可以看到產(chǎn)生了很多氣泡，同時(shí)會(huì)聞到酒味。泡，同時(shí)會(huì)聞到酒味。還有其他方法嗎？還有其他方法嗎？25課堂總結(jié)課堂總結(jié) 1、酶更適合采用、酶更適合采用固定化，而固定化，而細(xì)胞多采用細(xì)胞多采用固定化固定化 2、

16、制定固定化酵母細(xì)胞的步驟：、制定固定化酵母細(xì)胞的步驟： 3、海藻酸鈉溶液濃度過高、海藻酸鈉溶液濃度過高；過低，過低， 4、固定化酶固定的是、固定化酶固定的是種酶，固定化細(xì)種酶，固定化細(xì)胞固定的是胞固定的是酶酶26練習(xí)練習(xí):1、制備固定化酵母細(xì)胞的過程中錯(cuò)誤的、制備固定化酵母細(xì)胞的過程中錯(cuò)誤的是（是（ ）A、取干酵母，加入蒸餾水，使其活化、取干酵母，加入蒸餾水，使其活化B、配制海藻酸鈉時(shí)，加熱用大火，直、配制海藻酸鈉時(shí)，加熱用大火，直到海藻酸鈉溶化為止到海藻酸鈉溶化為止C、將溶化好的海藻酸鈉溶液冷卻至室、將溶化好的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫，加入已活化的酵母細(xì)胞溫，加入已活化的酵母細(xì)胞D、將凝膠珠在

17、、將凝膠珠在CaCl2 2溶液中浸泡溶液中浸泡30 min左右左右B272 2、下列關(guān)于酶和細(xì)胞的固定敘述、下列關(guān)于酶和細(xì)胞的固定敘述不正確的是不正確的是( )( )。A A酶分子很小，易采用包埋法酶分子很小，易采用包埋法 B B酶分子很小，易采用化學(xué)結(jié)合酶分子很小，易采用化學(xué)結(jié)合或物理吸附法固定的酶或物理吸附法固定的酶C C細(xì)胞個(gè)大，難被吸附或結(jié)合細(xì)胞個(gè)大，難被吸附或結(jié)合 D D細(xì)胞易采用包埋法固定細(xì)胞易采用包埋法固定A283 3、固定化細(xì)胞對(duì)酶的活性影響最小，、固定化細(xì)胞對(duì)酶的活性影響最小，根本原因是根本原因是( )( )。A A避免了細(xì)胞破碎、酶的提取純化避免了細(xì)胞破碎、酶的提取純化過程過程 B B固定化細(xì)胞在多種酶促反應(yīng)中連固定化細(xì)胞在多種酶促反應(yīng)中連續(xù)發(fā)揮作用續(xù)發(fā)揮作用C C促化反應(yīng)結(jié)束后，能被吸收和重促化反應(yīng)結(jié)束后，能被吸收和重復(fù)利用復(fù)利用D D細(xì)胞結(jié)構(gòu)保證了各種酶在細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞結(jié)構(gòu)保證了各種酶在細(xì)胞內(nèi)化學(xué)反應(yīng)中有效的發(fā)揮作用化學(xué)反應(yīng)中有效的發(fā)揮作用D29直接使用酶直接使用酶固定化酶固定化酶固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞酶的種類酶的種類營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)催化反應(yīng)催化反應(yīng)反應(yīng)底物反應(yīng)底物優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)一種或多種一種或多種一種一種不需要不需要不需要不需要需要需要一種或多種一種或多種