脂肪酸的一氧化

1、實驗28 脂肪酸的一氧化一、目的1了解脂肪酸的一氧化作用2 通過測定和計算反應液內丁酸氧化生成丙酮的量，掌握測定一氧化作用的方法及其原理。二、原理在肝臟內脂肪酸經(jīng) 一氧化的作用生成乙酰輔酶A，兩分子的乙酰輔酶A可縮合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，也可還原生成 一羥丁酸。 乙酰乙酸，一羥丁酸和丙酮總稱為酮體。肝臟不能利用酮體，必須經(jīng)血液運至肝外組織特別是肌肉和腎臟，再轉變?yōu)橐阴］o酶A而被氧化利用。酮體作為有機體代謝的中間產(chǎn)物，在正常的情況下，其產(chǎn)量甚微，患糖尿病或食用高脂肪膳食時，血中酮體含量增高，尿中也能出現(xiàn)酮體。本實驗用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮可用碘仿反應滴定。在堿性條件下，丙

2、酮與碘生成碘仿。反應式如下：CH3|CH2 | CH2|COOH CH3|CH CH|COOH CH3|CHOH | CH2 |COOH CH3CH3|C=O |CH2|COOH脫羧 CO2+H2OOCH3C2HaOH+I2=NaOI+NaI+H2OCH3COCH3+3NaOI=CHI3+CH3COONa+2NaOH碘仿剩余的碘可用標準Na2S2O3滴定NaOI+NaI+2HCl=I2+2NaCl+H2OI2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2NaI根據(jù)滴定樣品與滴定對照所消耗的硫代硫酸鈉溶液體積之差，可以計算由丁酸氧化生成丙酮的量。三、材料、試劑和儀器（一）材料家兔（或雞或大鼠）的新鮮肝臟

3、一、試劑10.1%淀粉溶液（溶于飽和氯化鈉溶液中）20.9%氯化鈉溶液30.5M丁酸溶液：取4.5毫升正丁酸，用1N氫氧化鈉溶液中和至pH=7.6,并稀釋至100毫升。420%三氯乙酸溶液510%氫氧化鈉溶液610%鹽酸70.1碘溶液，稱取 12.7克碘和約25克碘化鉀溶于水中，稀釋到1000毫升，混勻，用標準0.1M硫代硫酸鈉溶液標定。8.標準0.02M硫代硫酸鈉溶液：臨用時將已標定的1N硫代硫酸鈉溶液衡釋成0.02M。91/15M，PH7.6磷酸鹽緩沖液：1/15M磷酸氫二鈉86.8毫升與1/15M磷酸二氫鈉13.2毫升混合。（二）器具1、勻漿器或研缽2、剪刀、鑷子、漏斗3、50

4、毫升錐形瓶4、碘量瓶5、試管和試管架6、移液管（5毫升，10毫升）7、微量滴定科8、恒溫水浴四、操作步驟（一）肝勻漿的制備將雞頸部放血處死，取出肝臟。用0.9%NaCl溶液洗去表面的污血后，用濾紙吸去表面溶液，稱取肝組織5g ，置于研缽中加入少許0.9%NaCl溶液，將肝組織研磨成肝勻漿。再加入0.9%NaCl溶液，使肝勻漿總體積達10ml。（二）酮體的生成1取錐形瓶兩只，按下表編號后，分別加入各試劑。 錐形瓶編號試劑（ml）AB新鮮肝勻漿2.0預先煮沸肝勻漿2.0PH7.6 磷酸緩沖液3.03.0正丁酸溶液2.02.02.將加入試劑的兩只錐形瓶于43oC恒溫水浴鍋中保溫40min后取出。3于

5、上述兩錐形瓶中分別加入20%三氯醋酸3mL，搖勻后，室溫放置10min。4將錐形瓶中的混合物分別過濾，收集濾液于事先如上編號的試管中。（三）酮體的測定1取碘量瓶兩只，按下表編號后加入有關試劑。 碘量瓶編號試劑（ml）AB無蛋白溶液5.05.00.1mol/L 碘液3.03.010%NaOH3.03.0加完試劑后搖勻，放置10min。2于各碘量瓶中滴加10%HCl，溶液3ml，使各瓶溶液中和至中性或微酸性。3用0.02mol/L Na2S2O3滴定至碘量瓶中溶液呈淺黃色時，往瓶中滴加數(shù)滴0.1%淀粉溶液2-3滴，使瓶中溶液呈藍色。4用0.02mol/L Na2S2O3 繼續(xù)滴定至碘量瓶中溶液的藍

6、色消褪為止。5記下滴定時所用去的Na2S2O3溶液的毫升數(shù)，按下式計算樣品中丙酮的生成量。（四）計算實驗中所用肝勻漿中生成的丙酮量(mmol)=(AB)×C×1/6肝臟生成丙硐的量（mmol·g-1）=(A-B)×C×式中：A為滴定A 樣品所消耗的0.02mol/L Na2S2O3溶液的毫升數(shù)；B為滴定B樣品所消耗的0.02mol/L Na2S2O3溶液的毫升數(shù)；C 為Na2S2O3的濃度（mol/L）。五、注意事項1、在低溫下制備新鮮的肝糜，以保證酶的活性。2、加HCl溶液后即有I2析出，I2會升華，所以要盡快進行滴定，滴定的速度是前快后慢，當溶液變淺黃色后，加入指示劑就要慢慢一滴一滴的滴。3、滴定時淀粉指示劑不能太早加入，只有當被滴定液變淺黃色時加入最好，否則將影響終點的觀察和滴點結果。六、實驗報告保留實驗的有效數(shù)據(jù)，計算結果并分析討論。七、思考題1. 為什幺說做好本實驗的關鍵是制備新鮮的