植物組織培養(yǎng)復(fù)習(xí)題 (標(biāo)準(zhǔn)).

1、植物組織培養(yǎng)復(fù)習(xí)題 一、填空題： 1.植物脫病毒一般采用莖尖培養(yǎng)脫毒和熱處理兩種方法。2.最典型的培養(yǎng)基是1962年發(fā)表的的一種適合于煙草愈傷組織快速生長的改良培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基后來被稱為MS培養(yǎng)基，現(xiàn)已廣泛用于植物組織培養(yǎng)。3.胚狀體發(fā)育順次經(jīng)過原胚期、球形胚期、心形胚期、魚雷形胚期和子葉期。4.具有防止褐變作用的維生素是Vc。5.植物組織培養(yǎng)按培養(yǎng)對象分為愈傷組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、胚培養(yǎng)、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)等幾種類型。6.在通過微莖尖培養(yǎng)脫毒時(shí)，外植體的大小應(yīng)以成苗率和脫毒率綜合確定，一般以0.30.5mm、帶13個(gè)葉原基為好。7.對植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基滅菌時(shí)，一般情況采用的條件是121溫度，

2、保持時(shí)間是1520分鐘。8.在幼胚培養(yǎng)基中，蔗糖的主要作用是維持滲透壓、提供碳源和能源和防止幼胚早熟萌發(fā)。9.植物組織培養(yǎng)中，微量元素鐵的用量較大，由于在較高pH下，易形成Fe(OH)3沉淀，難以被吸收，所以多用硫酸亞鐵（FeSO4·7H20）和乙二胺四乙酸（Na2-EDTA）形成的螯合物，并且單獨(dú)配制。10.種質(zhì)保存大致分為原地保存和異地保寸兩種方式。11.外植體選擇的原則是：選擇優(yōu)良的種質(zhì)、選擇健壯的植株、選擇最適時(shí)期、選取適宜的大小。12.細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法有成批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)等。13.植物原生質(zhì)體分離的方法有酶解法和機(jī)械法。14.植板率是指已形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的

3、百分?jǐn)?shù)。15.花粉分離的方法有擠壓法、磁攪拌法、漂浮釋放法。16.植物組織培養(yǎng)發(fā)展可分為三個(gè)時(shí)期：萌芽階段、奠基階段、快速發(fā)展和應(yīng)用階段。17.一個(gè)年產(chǎn)4-20萬株苗的商業(yè)性組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，其總面積不應(yīng)少于60平方米，可劃分為準(zhǔn)備室、緩沖室、無菌操作室和培養(yǎng)室。18.鹽酸硫胺素VB1是脫羧酶輔酶，吡哆醛VB6是轉(zhuǎn)氨酶輔酶。19.愈傷組織形成大致經(jīng)歷三個(gè)時(shí)期，即：誘導(dǎo)期、分裂期、分化期。20.莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小可分為莖尖分生組織組織培養(yǎng)和普通莖尖培養(yǎng)兩種類型。21.離體葉組織的莖和芽發(fā)生途徑有：直接產(chǎn)生不定芽、由愈傷組織產(chǎn)生不定芽、胚狀體形成、其它途徑。23.單細(xì)胞培養(yǎng)方法有看護(hù)培養(yǎng)

4、法、微室培養(yǎng)法和平板培養(yǎng)法。24.原生質(zhì)體純化的方法有：離心沉淀法、漂浮法、界面法。25.試管苗的增殖率是指植物快速繁殖中間繁殖體的繁殖率。26.低溫保存是基本特征是保存材料的定期繼代培養(yǎng)，不斷繁殖更新。27.快速冷凍法的關(guān)鍵是使細(xì)胞內(nèi)的水分迅速越過冰晶生長的危險(xiǎn)溫度區(qū)，檢測冷凍保存后的細(xì)胞和器官活力的最基本方法是再培養(yǎng)法28.莖尖培養(yǎng)的方法有固體培養(yǎng)法和紙橋培養(yǎng)法29.莖段培養(yǎng)是指對不帶芽和帶有腋（側(cè)）或葉柄的莖切段進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。30.帶芽莖段培養(yǎng)可能獲得：單苗（芽）、叢生苗（芽）、完整植株、愈傷組織。二、名詞解釋：1. 半連續(xù)培養(yǎng)：是指每隔一定時(shí)間后倒出一定量的懸浮液，并同時(shí)補(bǔ)充加入

5、等量的新鮮培養(yǎng)液，這相當(dāng)于成批培養(yǎng)時(shí)頻繁地進(jìn)行再培養(yǎng)，半連續(xù)培養(yǎng)能重復(fù)地取得大量、均一的培養(yǎng)細(xì)胞，供生物研究之用。2. 玻璃化：偶然的情況下，培養(yǎng)的植物會生長出腫脹的、扭曲的葉片，這種葉片不可逆的變成半透明狀并最終壞死。這種情況下會導(dǎo)致苗的死亡。這一現(xiàn)象稱之為玻璃化。3. 人工種子：是指植物離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的胚壯體或不定芽，被包裹于含有養(yǎng)分和保護(hù)功能的人工胚乳和人工種皮中從而形成的能發(fā)芽出苗的顆粒體。4. 體細(xì)胞胚：是指二倍體或單倍體的體細(xì)胞在特定條件下，未經(jīng)性細(xì)胞融合而通過與合子胚發(fā)生類似的途徑發(fā)育出新個(gè)體的形態(tài)發(fā)生過程。經(jīng)體胚發(fā)生形成類似合子胚的結(jié)構(gòu)稱為體細(xì)胞胚。 5. 體細(xì)胞雜交：分離下來

6、的不同親本的原生質(zhì)體，在人工控制條件下，像性細(xì)胞受精一樣互相融合成一體。6. 植板率：植板率是指已形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)。7. 無病毒苗：是指不含該植物的主要危害病毒，即經(jīng)檢測主要病毒在植物體內(nèi)的存在表現(xiàn)陰性反應(yīng)的苗木。8. 植物細(xì)胞全能性：植物體的每一個(gè)細(xì)胞都攜帶有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成為完整植株的潛在能力。9. 脫分化：一個(gè)已停止分裂的成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)，并形成未分化愈傷組織的現(xiàn)象稱為脫分化。10. 指示植物：是指對病毒反應(yīng)敏感、癥狀特征顯著的植物。11. 植物組織培養(yǎng)：指植物的離體器官、組織、細(xì)胞以及去除細(xì)胞壁的原生質(zhì)體，放在離體無菌條件下，在人工控制環(huán)境條

7、件下，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上對其進(jìn)行克隆，使其生長、分化并成長為完整植株的過程。12. 愈傷組織：是指植物受傷后的傷口或在植物組織培養(yǎng)中切口處產(chǎn)生的一團(tuán)不定行的薄壁組織。13. 母液：欲配培養(yǎng)液的濃縮液，也稱儲備液。14. 外植體：是指植物組織培養(yǎng)中的各種接種材料。15. 植物器官培養(yǎng)：主要是指植物的根、莖、葉、花器和幼小果實(shí)的無菌培養(yǎng)。16. 胚培養(yǎng)：是指采用人工方法把胚從種子、子房或胚珠分離出來，再放在離體無菌條件下，讓其進(jìn)一步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。17. 連續(xù)培養(yǎng)：是指在培養(yǎng)過程中，以不斷抽取懸浮培養(yǎng)物并注入等量新鮮培養(yǎng)基，使培養(yǎng)物不斷得到養(yǎng)分補(bǔ)充，保持其恒定體積的培養(yǎng)。三、選

8、擇題: 1. 植物組織培養(yǎng)室適宜濕度是（ C ）A. 50-60% B. 60-70% C. 70-80% D. 80-90%2. 有關(guān)無菌短枝扦插說法錯(cuò)誤的是（ C ）A. 又稱微型扦插 B. 形成小灌木叢結(jié)構(gòu)C. 經(jīng)過脫分化產(chǎn)生 D. 利用細(xì)胞分裂素抑制頂端優(yōu)勢3. 組織培養(yǎng)適宜的花粉發(fā)育是（ A ）A. 單核期 B. 雙核期 C. 三核期 D. 任何時(shí)期4. 下列材料遺傳上最穩(wěn)定的是 （ A ）A. 莖尖分生組織 B. 不定芽 C. 體細(xì)胞胚 D. 愈傷組織5. 有關(guān)試管苗生態(tài)系統(tǒng)特點(diǎn)說法錯(cuò)誤的是（ D ）A. 高溫 B. 高濕 C. 無菌 D. 強(qiáng)光 6. 下列有關(guān)生根培養(yǎng)基特點(diǎn)說法錯(cuò)

9、誤的有（ C ）A. 低鹽培養(yǎng)基 B. 低糖培養(yǎng)基 C. 含細(xì)胞分裂素培養(yǎng)基 D. 含活性炭培養(yǎng)基7. N6培養(yǎng)基適合（ B ）A. 番茄根尖 B. 禾谷類花藥 C. 大豆組織 D.木本植物8. 在配制激素6BA母液中應(yīng)先加少量溶劑（ B ）A. NaOH B. HCl C. NaCl D. 95%乙醇9. 下列不能作消毒劑進(jìn)行外植體消毒時(shí)（ D ）A升汞 B次氯酸鈉 C過氧化氫 D甲醛10. 下列培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的濃度最低的是（ C ）AMS培養(yǎng)基 BB5培養(yǎng)基 CWhite培養(yǎng)基 DN6培養(yǎng)基11. 下列有關(guān)生長素說法錯(cuò)誤的（ D ）A. 誘導(dǎo)愈傷組織形成 B. 體細(xì)胞胚的產(chǎn)生 C. 試管苗

10、生根 D. 促進(jìn)莖增粗12. 有關(guān)細(xì)胞分裂素說法錯(cuò)誤的是（ B ）A. 促進(jìn)細(xì)胞分裂與分化 B. 促進(jìn)細(xì)胞脫分化C. 促進(jìn)側(cè)芽生長 D. 增強(qiáng)蛋白質(zhì)合成13. 植物組織培養(yǎng)第二個(gè)突破是（ A ）A. 胡蘿卜髓細(xì)胞培養(yǎng)成完整植株 B. 酶法分離原生質(zhì)體成功C. 蘭花產(chǎn)業(yè)化 D. 花藥培養(yǎng)獲得再生植株14. 植物組織培養(yǎng)室適宜濕度是（ C ）A. 50-60% B. 60-70% C. 70-80% D. 80-90%15. 6-BA是指（ A ）A、芐基腺嘌呤 B、激動素 C、萘乙酸 D、吲哚乙酸16. N6培養(yǎng)基適合（ B ）A、番茄根尖 B、禾谷類花藥 C、大豆組織 D、木本植物四、判斷題：

11、 1. 胚培養(yǎng)可以拯救雜種敗育胚 （ ）2. 培養(yǎng)基中加入活性炭是為了向植物提供碳源。 （ × ） 3. 胚壯體微管組織的分布是獨(dú)立的“Y”形。 （ ）4. 葉片接種是將背葉面朝下放置。 （ × ）5. 珠心胚為單性生殖的一種。 （ ）6. 花粉植物細(xì)胞均為單倍體。 （ × ）7. 條件培養(yǎng)基是針對性加入某種營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。 （ × ）8. 原生質(zhì)體培養(yǎng)必須加滲透壓穩(wěn)定劑。 （ ）9. 愈傷組織培養(yǎng)可以達(dá)到脫毒效果。 （ ）10. 植物組織培養(yǎng)可以用食糖代替蔗糖。 （ ）11. 培養(yǎng)基中加入活性炭是為了向植物提供碳源。 （ × ） 12. 葉

12、片接種是將背葉面朝下放置。 （ ）13. 條件培養(yǎng)基是針對性加入某種營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。 （ × ）14. 原生質(zhì)體培養(yǎng)必須加滲透壓穩(wěn)定劑。 （ ）15. 植物組織培養(yǎng)可以用食糖代替蔗糖。 （ ）五、簡答題： 1. 植物組織培養(yǎng)的三大難題是什么，并加以解釋。答：植物組織培養(yǎng)的三大難題是污染、褐變、玻璃化。污染是指在組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。褐變是指外植體在培養(yǎng)過程中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞里的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，這種致死性的褐化物不但向外擴(kuò)散致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，而且會抑制其他酶的活性，嚴(yán)重影響外植體的脫分化和器官分化，最后變褐而死

13、亡的現(xiàn)象。玻璃化是指培養(yǎng)的植物會生長出腫脹、扭曲的葉片，這種葉片不可逆地變成半透明狀并最終壞死，這種情況下會導(dǎo)致苗的死亡。2. 為什么幼胚比成熟胚培養(yǎng)要求的培養(yǎng)基成分復(fù)雜？答：因?yàn)橛着呤钱愷B(yǎng)型，處于這一時(shí)期的幼小胚完全依賴和吸收周圍組織的有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)，而成熟胚則為自養(yǎng)型，這一時(shí)期胚能吸收培養(yǎng)基中的無機(jī)鹽和糖，經(jīng)過自身代謝作用合成所必須的物質(zhì)，所以在進(jìn)行胚培養(yǎng)時(shí)，幼胚比成熟胚培養(yǎng)要求的培養(yǎng)基成分復(fù)雜。 3. 培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿和植物材料通常怎樣滅菌? 答：培養(yǎng)基一般采用濕熱滅菌，如果培養(yǎng)基中的有些成分高溫易分解，則可采用過濾滅菌。培養(yǎng)器皿可采用濕熱滅菌或干熱滅菌。植物材料一般采用藥劑浸泡滅菌，具體

14、操作如下： （1）外植體的預(yù)處理，對植物組織進(jìn)行修整，去掉不需要的部分，并將外植體用流水沖洗干凈。（2）用70%的酒精浸潤材料30s左右。（3）用滅菌劑浸泡滅菌，滅菌時(shí)不時(shí)攪動，使植物材料與滅菌劑有良好的接觸，若滅菌過程中加入數(shù)滴吐溫，則滅菌效果更好。（4）植物材料用無菌水沖洗3-5次，以除去滅菌劑。4. 什么是看護(hù)培養(yǎng)? 其具體的方法是什么？ 答：看護(hù)培養(yǎng)指用一塊生長活躍的愈傷組織來看護(hù)單個(gè)細(xì)胞或其他培養(yǎng)物，使其生長和增殖的方法。具體方法：1、將生長活躍的愈傷組織放入滅過菌的固體培養(yǎng)基上，并在愈傷組織上放一片無菌濾紙片。2、將該愈傷培養(yǎng)過夜。3、將單細(xì)胞或其他培養(yǎng)物放于濾紙片上面，移入培養(yǎng)室

15、培養(yǎng)。5. 外植體成苗途徑有哪些？ 第一種，外植體先形成愈傷組織，然后再分化成完整植株。第二種，在組織培養(yǎng)中再生植株可通過與合子胚相似的胚胎發(fā)生過程，即形成胚狀體，再發(fā)育成完整植株。第三種，外植體經(jīng)誘導(dǎo)后直接形成根與芽，發(fā)育成完整的植株。6. 比較初代培養(yǎng)與繼代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)：是將外植體進(jìn)行的第一次培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)：組織培養(yǎng)中外植體或培養(yǎng)物培養(yǎng)一段時(shí)間后，為了防止培養(yǎng)的細(xì)胞老化，或培養(yǎng)基中養(yǎng)分利用完而造成營養(yǎng)不良及代謝物過多積累而產(chǎn)生毒害的影響，要及時(shí)將其轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，以使其能夠順利地增殖、生長、分化，長成完整的植株。7. 莖尖微繁過程一般包括哪五個(gè)階段？無菌培養(yǎng)體系的建立，芽

16、的增殖，中間繁殖體的增殖，壯苗和生根，試管苗的移植。8. 葉組織消毒的一般方法是什么？取植物的幼嫩葉片，用流水沖洗后，用蘸有少量75%酒精的紗布擦拭葉片兩面后，放入0.1%升汞溶液中消毒5-8分鐘，再用無菌水沖3-4次，消毒后的葉片轉(zhuǎn)入到鋪有濾紙的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用解剖刀切成5mm×5mm左右的小塊。9. 影響試管苗移栽成活率的因素有哪些？試管苗的生理狀況，植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，無機(jī)鹽濃度，活性炭，環(huán)境因子，移栽過程中讓試管苗從無菌向有菌逐漸過渡。六、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及問答題： 1. 配制1升培養(yǎng)基，配方為MS+0.05mg/L NAA+0.1mg/L 6-BA+2.5%蔗糖+0.6%瓊脂。MS母

17、液的濃度分別是：大量元素20倍，微量元素500倍，鐵鹽100倍，有機(jī)物50倍，0.1mg/mL NAA和0.1mg/mL 6-BA。請敘述該培養(yǎng)基的配制過程（包括計(jì)算過程）。答：大量元素：1000/20=50ml微量元素:1000/500=2ml鐵鹽:1000/100=10ml有機(jī)物:1000/50=20ml6-BA：0.1mg/L×1/1mg/ml=0.1mlNAA：0.05 mg/L×1/1mg/ml=0.05ml糖:1000×2.5%=25g瓊脂：6g準(zhǔn)備好需要的各種器物并放于指定位置，稱量好瓊脂、蔗糖，準(zhǔn)備好蒸餾水，溶化瓊脂、蔗糖。按要求量取或吸取各種上面

18、算得的母液，加入到適量的蒸餾水中，混合后倒入溶化的瓊脂中，定容至需要的體積，最后調(diào)節(jié)PH值約6.0左右。2. 某地區(qū)的一種馬鈴薯經(jīng)多年的種植后，植株變的矮小，產(chǎn)量和品質(zhì)都下降，請你用所學(xué)的組培知識分析原因，并設(shè)計(jì)一個(gè)解決方案。答：可能是由于馬鈴薯感染了病毒，造成品種退化。解決方法：可通過馬鈴薯莖尖培養(yǎng)脫毒來解決這個(gè)問題。馬鈴薯莖尖培養(yǎng)脫毒程序：1. 外植體選擇（1）進(jìn)行脫毒培養(yǎng)的材料，可以直接從大田里取。（2）如為了減少污染可按下面的方法進(jìn)行：當(dāng)芽長到約15cm高時(shí)，將頂端切下68cm長。去掉下面2片葉片，在切口處涂上生根生長調(diào)節(jié)劑，把切條植入一個(gè)口徑為10cm、內(nèi)裝有營養(yǎng)土的花盆內(nèi)，用玻璃杯罩上，保持10d。然后將其轉(zhuǎn)入生長箱中，光照度30004000Lx，每天光照16h。兩周后去掉頂芽，以促使腋芽生長。當(dāng)腋芽長出約12cm時(shí)，折下腋生枝，用于消毒、接種。2. 消毒由于莖尖分生組織受彼此重疊的葉片嚴(yán)密保護(hù)，基本